1.2.2 流式细胞术检测EFP-AW1对HUVECs细胞P-selectin蛋白表达的影响 收集1×106个HUVECs 细胞，PBS洗2次，加入FITC标记的P-selectin鼠抗人单克隆抗体(CD62P)20 μL，4 ℃避光孵育30 min。PBS洗涤2次，加入PBS重悬细胞，FACS Calibur流式细胞仪检测。以上实验重复3次。

    1.2.3 RT-PCR检测TNF-α诱导的HUVECs细胞P-selectin mRNA表达 利用Trizol试剂提取细胞总RNA。在20 μL RT反应体系中，取各组细胞总RNA 1 μg为模板逆转录合成cDNA，再以4 ?L逆转录合成的单链cDNA为模板进行PCR循环。PCR反应引物序列如下：P-selectin 正向引物：5'-CAA TCA CTT TTA GCC AAA TATC-3'；反向引物5'-TTA TAA TTC AGC AAC CTG AAC TG-3'；β-action上游为：5'-AAG GAT TCC TAT GTG GGC -3' ......