不同时期骨髓间充质干细胞移植对大鼠肝纤维化的作用(2)
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1.2.4 标本的收集、保存及检测 正常饮食饲养各组动物1个月后,1%戊巴比妥60mg/kg腹腔内麻醉,麻醉满意后,观察肝脏的大体改变及肝脏的重量,行肝功能检测(ALB、ALT、TBIL),肝脏HE染色,荧光显微镜检测DAPI染色阳性细胞在肝组织的分布。
1.3 统计学方法
所有数据均采用均数±标准差表示,用SPSS17.0统计软件包进行统计学处理。如果符合正态分布和方差齐性检验,则用多样本均数两两之间的全面比较的LSD-t检验,如果不符合则秩转换后用非参数检验。取α=0.05水准,P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 MSCs的分离纯化体外培养
相差显微镜下,新分离的骨髓单个核细胞透亮度好,大小不一,悬浮于培养液中,以圆形的造血细胞居多(封三图1),之后造血细胞随换液而被清除。第3天换液后,可见少量短梭形、星形细胞分散贴壁生长,伸出伪足呈逗点状或短棒状(封三图2)。贴壁后细胞开始分裂增殖,贴壁细胞体积增大,呈现成纤维细胞梭形外观,有些细胞则呈三角形或多角形,核居中,有1～2个核仁(封三图3)。传代时几乎呈均一的成纤维细胞样细胞,可呈网状、辐射状(封三图4)。
2.2 对移植的MSC进行观察
DAPI是一种荧光染料,它对双链DNA具有高度亲和力 ,示踪作用良好。DAPI标记的MSC的观察荧光显微镜观察(DAPI 染色×100)显示细胞多数呈类圆形,细胞核呈明亮的蓝色(封三图5)。
2.3 血生化指标的检测和组织病理学观察
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