1.2.3.3 Western blotting检测海马组织Shh、Gli、PI3K、p-AKT蛋白表达水平的变化 从各组中随机抓取3只大鼠，充分麻醉后取出海马组织，切割成约100 mg，加入1 mLRAPI裂解液，室温条件下静置30 min，4 ℃、15 000 r/min条件下离心5 min，取上清备用。取出25 μL进行BCA法测定样本蛋白浓度，根据样本上样缓冲液=4∶1的比例进行均匀混合后将每份待测置于100 ℃水浴锅中加热变性7 min，变性后迅速将样本放于冰上冷却，保存于-20 ℃冰箱备用。随后根据计算得出的上样量加样至先前配制好的SDS-PAGE凝胶孔中，进行跑胶，将目的蛋白转膜只PVDF膜，再用封闭液对PVDF膜进行封闭，封闭后将PVDF膜置于TBS中漂洗3次，5 min/次，随后用一抗稀释液按照1∶500的比例稀释β-actin、Shh、Gli、PI3K、p-AKT，4 ℃孵育过夜后置于TBS中漂洗3次，5 min/次，然后加入碱性磷酸酶标记山羊抗兔IgG(二抗稀释液1∶2 000稀释)室温孵育1 h，再用TBS漂洗3次 ......