1.2.4 指标检测与方法

    1)MTT检测：将INS-1细胞和FOXO1高表达模型细胞种于96孔板，每孔4 000个，12 h后，分别用20%、15%、10%、5%、1%含药血清培养24 h，弃去液体，每孔加入90 μL的培养基和10 μL 5 mg/mL的MTT继续培养4 h，弃去液体，加100 μL的DMSO溶解结晶，在570 nm测定吸光度。

    2)Western blotting检测：应用蛋白裂解液与核质蛋白分离提取试剂盒(Beyotime)分别提取细胞总蛋白、细胞质蛋白和核蛋白。BCA试剂盒测定蛋白浓度。以裂解液调整蛋白浓度至相同水平，按1∶ 1加入2X上样缓冲液稀释，沸水煮5 min。制备凝胶上样，每个样品加入30 μL，总蛋白量30 μg，电泳、转膜。将聚偏二氟乙烯膜(PVDF取出，使用适量TBST溶液清洗。加入封闭液，室温下，置于摇床上缓慢摇动2 h。移除封闭液，加入以封闭液稀释的Ⅰ抗(Akt、phospho-Akt(Thr308)、FOXO1、phospho-FOXO1(Ser256)和β-actin稀释比例1∶ 1 000) ......