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编号:11748378
四君子汤中多糖的提取和含量测定
http://www.100md.com 2009年2月1日 《亚太传统医药》 2009年第2期
四君子汤中多糖的提取和含量测定

     摘 要:目的:提取四君子汤中的多糖,并进行含量测定。方法:采用热水法提取、乙醇沉淀制备总多糖;蒽酮-硫酸法测定多糖含量。结果:总多糖中多糖的含量为61.44%。结论:四君子汤中多糖的含量为4.97%。

    关键词:四君子汤;多糖;提取;含量测定

    中图分类号:R284文献标识码:A文章编号:1673-2197(2009)02-0043-02

    四君子汤出自宋代《太平惠民和剂局方》,由人参、白术、茯苓、炙甘草组成,具有益气健脾之功效,主治脾胃气虚证。研究报道四君子多糖具有显著的免疫调节作用,可用于肿瘤等的辅助治疗[1~3]。本文采用蒽酮-硫酸法对四君子汤水煎剂中多糖的含量进行了测定。

    1 仪器与试药

    WFZ-UV-2102 PC型紫外-可见分光光度计(尤尼柯中国上海仪器有限公司),RE-52C旋转蒸发器(河南巩义市英峪予华仪器厂),LXJ-Ⅱ离心沉淀机(上海医用分析仪器厂),ZKXF-1型电热真空干燥箱(上海树立仪器仪表有限公司)。四君子汤药材(济南建联中药有限公司)。葡聚糖4万(中国医药集团上海化学试剂公司),蒽酮(上海五联化工厂)。
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    2 方法与结果

    2.1 四君子总多糖的提取

    精密称取四君子汤34g(人参10g,白术9g,茯苓9g,甘草6g),投入到15倍量的沸水中0.5h,以灭活共存酶,浸泡过夜,95℃提取3次,每次3h,六层纱布过滤,滤液合并,50℃减压浓缩至30mL,离心,弃去残渣,上清液加四倍量无水乙醇,沉淀过夜,离心,收集沉淀,依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤,将沉淀置于有五氧化二磷的真空干燥箱中,50℃真空干燥24h,得四君子总多糖样品2.75 g。精密称取四君子总多糖样品20mg,定容于250mL的容量瓶中,为供试品溶液A,供多糖的含量测定用。

    2.2 标准曲线的测定

    采用蒽酮-硫酸法[4]测定多糖含量。

    葡聚糖标准品溶液的配制:精密称取干燥至恒重的葡聚糖25mg,加适量蒸馏水溶解,转移至250mL容量瓶中,加水至刻度,即得0.1g/L的葡聚糖标准品溶液。
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    蒽酮试剂:0.2g蒽酮溶解于100mL浓硫酸中,当日配制使用。

    标准曲线制备:移液管分别量取0.1g/L葡聚糖标准溶液2mL、4mL、6mL、8mL、10mL转于10mL容量瓶,蒸馏水补至刻度,各取1mL于试管中并按顺序编号1、2、3、4、5,后分别加入4.00mL蒽酮试剂,迅速浸于冰水浴中冷却,各管加完后充分振摇均匀,并一同浸入沸水浴中,管口加盖开始反应。自水浴沸腾时起,准确煮沸10min,自来水冷却,室温放置约10min,振摇均匀,以蒸馏水为空白,在λ620nm处测定吸光度A。以吸收度A为纵坐标,糖浓度C为横坐标,得回归方程A=5.8965C+0.0478,r=0.9998。

    2.3 精密度试验

    按复方配比取四君子汤药材10.02g,精密称定,按2.1项提取制得供试液,取1mL依法重复测定5次,吸收度值的RSD为0.67%(n=5)。
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    2.4 重现性试验

    按复方配比取四君子汤药材5 份,各10.02g,精密称定,依2.1项下提取后,进行多糖的含量测定,每份测定3次,取平均值,5份样品中多糖的含量分别为4.67%、4.98%、4.76%、4.86%、4.73%,计算RSD为2.54%(n=5)。

    2.5 稳定性试验

    对同一供试品液,蒽酮-硫酸法显色后,分别于0、10、20、40、60min 时在620nm处测定吸收度值,计算RSD为1.64%(n=5),表明吸收度值在1h内基本稳定。

    2.6 样品含量测定

    取供试品溶液1mL,依法进行测定,计算四君子总多糖中多糖的含量为61.44%,由粗多糖中多糖含量折合成四君子汤中多糖的含量为4.97%。
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    2.7 回收率试验

    取已知多糖含量的四君子汤药材5份,各6.8g,精密称定,于每份中加入一定量的葡聚糖对照品,按2.1项下提取,依法测定多糖含量,计算得平均回收率为101.52%,RSD为3.20%(n=5)。结果见表1。

    3 讨论

    蒽酮-硫酸法测定多糖含量,为避免氧化,蒽酮试剂要现用现配,由于硫酸密度比水大,容易分层,因此样品加入蒽酮试剂后和紫外测定前一定要振摇充分。结果表明,该法测定多糖含量,可获得良好的线性关系(r=0.9998),回收率较高(101.52%),而且精密度试验、稳定性试验均符合分析要求,方法准确,重现性好,可用于四君子汤中多糖的含量测定。

    参考文献:

    [1] 周华,刘良,王培训,等. 四君子汤复方总多糖口服和注射给药对免疫功能影响的对比研究[J]. 中药新药与临床药理,2001,12(5): 602-902.

    [2] 宁康健,何玉意,吕锦芳. 四君子汤对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响[J]. 中兽医医药杂志,2005,(5): 30-32.

    [3] 刘良,周华,王培训,等. 四君子汤复方总多糖对小鼠肠道粘膜相关淋巴组织的影响[J]. 中国免疫学杂志,2000(17): 402-602.

    [4] 张惟杰. 糖复合物生化研究技术(第二版)[M].杭州:浙江大学出版社,1999:12.

    (责任编辑:姜付平), 百拇医药(刘玉红)


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