门冬氨酸鸟氨酸注射液细菌内毒素检查法的研究(1)
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[摘要] 目的 建立门冬氨酸鸟氨酸注射液细菌内毒素检查方法。 方法 按《中国药典》2010年版二部附录细菌内毒素检查法，采用2个不同厂家的鲎试剂对门冬氨酸鸟氨酸注射液进行研究。 结果 根据临床实际应用情况，确定门冬氨酸鸟氨酸注射液的内毒素限值L = 10 EU/mL；本品稀释20倍以后，对细菌内毒素检查无干扰；按拟定标准检验，该品种2个厂家6批样品细菌内毒素检查结果和家兔热原检查结果均符合规定。 结论 细菌内毒素检查法可代替家兔热原检查法用于门冬氨酸鸟氨酸注射液的质量控制。
[关键词] 门冬氨酸鸟氨酸注射液；细菌内毒素检查；干扰试验
[中图分类号] R927.33 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2013)02(c)-0100-03
门冬氨酸鸟氨酸注射液为肝胆疾病辅助用药，临床上主要用于因急、慢性肝病(如各型肝炎、肝硬化、脂肪肝、肝炎后综合征)引发的血氨升高及治疗肝性脑病，尤其适用于治疗肝昏迷早期或肝昏迷期的意识模糊状态。国内市场上已有本品的进口药品，目前尚无国内药厂的门冬氨酸鸟氨酸注射液上市。门冬氨酸鸟氨酸注射液的国家食品药品监督管理局进口药品注册标准采用家兔法进行热原检查，本实验根据《中国药典》2010年版二部“细菌内毒素检查法”[1]99-101和“化学药品注射剂安全性检查法应用指导原则”[1]212-213，以及相关细菌内毒素检查的文献[2-12]，对门冬氨酸鸟氨酸注射液应用鲎试剂进行细菌内毒素检查的可行性进行了研究并建立了门冬氨酸鸟氨酸注射液的细菌内毒素检查方法。
1 仪器与试药
1.1 仪器
VS-1300L-U洁净工作台(苏净集团苏州安泰空气技术有限公司)，S648 恒温水浴锅(上海医疗器械七厂)，XW-80A混旋仪(上海沪西分析仪器厂有限公司)，微量取液器(50～250 μL，上海荣泰生化工程有限公司)，细菌内毒素检查用具(湛江博康海洋生物有限公司)，智能热原仪(天津大学无线电厂精密仪器厂，ZRY-2D型)。
1.2 细菌内毒素检查用水
细菌内毒素检查用水(福州新北生化工业有限公司，批号：11102021，规格：100 mL/瓶)。
1.3 细菌内毒素工作标准品(冻干品)
细菌内毒素工作标准品(冻干品)(中国食品药品检定研究院，效价：120 EU/支，批号：150601-201072)。
1.4 鲎试剂与家兔
鲎试剂(福州新北生化工业有限公司，批号：11091912，灵敏度：0.25 EU/mL，规格：0.1 mL/支；湛江博康海洋生物有限公司，批号：1112010，灵敏度：0.25 EU/mL，规格：0.1 mL/支)；新西兰兔，普通级，体重1.7 kg以上，购自南京青龙山动物繁殖场，生产许可证号为SCXK(苏)2007-0008。
1.5 药品
门冬氨酸鸟氨酸注射液(规格：10 mL∶5 g，批号：110901， 110902，110903，由合肥一公司生产；规格：10 mL∶5 g，批号：010571，010581，010591，由德国麦氏大药厂生产)。
2 方法与结果
2.1 鲎试剂灵敏度复核试验
按《中国药典》2010年版二部附录细菌内毒素检查法[1]对两个厂家的鲎试剂进行灵敏度复核试验，结果见表1。由结果可知，2λ管均为阳性，0.25λ管和阴性对照管均为阴性，两个不同厂家的2批鲎试剂灵敏度测定值均在0.5λ～2.0λ范围内，符合要求，可用于细菌内毒素检查，并以标示灵敏度λ为该批鲎试剂的灵敏度。
2.2 内毒素限值(L)的确定[1-4]
参照药品说明书，门冬氨酸鸟氨酸注射液临床用法用量如下：在使用前应该用注射用溶液稀释，然后经静脉输入。由于静脉耐受方面的原因，每500毫升溶液中不要溶解超过6安瓿该药物，输入速度最大不要超过每小时1安瓿该药物。根据公式L = K/M，注射剂K=5 EU/(kg·h)，式中M为人用每千克体重每小时的最大供试品剂量，人均体重按60 kg计算，则L = 30 EU/mL，根据《中国药典》2010年版二部“化学药品注射剂安全性检查法应用指导原则”[2]，由于药物和适应证(如抗感染、抗肿瘤、心血管药等急重病症用药、儿童老人用药、复合用药、大输液等)的不同，限值可适当严格，至计算值的1/3～1/2，以保证安全用药，所以最终确定限值(L)为1/3×30 EU/mL=10 EU/mL。
2.3 干扰试验预试验
根据公式MVD=C×L/λ，目前市售鲎试剂λ通常在0.50～0.03 EU/mL，则门冬氨酸鸟氨酸注射液对应的最大有效稀释倍数分别为20、40、80、160、320倍。取样品一批(批号：110901)，将门冬氨酸鸟氨酸注射液用细菌内毒素检查用水分别配制成为原液、10、20、40、80倍稀释液，将此系列溶液记为NPC。同法制备上述系列溶液，在其中加入细菌内毒素标准溶液，使每一浓度的溶液中均含有2λ(0.50 EU/mL)浓度的细菌内毒素，记此系列溶液为PPC。取2个厂家的鲎试剂分别与上述NPC和PPC进行反应 ......
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