经空肠注入大承气汤对急性胰腺炎大鼠细胞因子和胰腺细胞凋亡的影响(1)
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[摘要] 目的 观察空肠内注入大承气汤对急性胰腺炎大鼠细胞因子、胰腺腺泡细胞凋亡的影响。 方法 将90只大鼠随机分为假手术组、模型组和对照组。建立急性胰腺炎模型，术后第2天检测各组外周血中白介素1β(IL-1β)、白介素18(IL-18)、肿瘤坏死因子(TNF-α)浓度，胰腺组织病理学积分和胰腺腺泡细胞凋亡指数的差异。 结果 急性胰腺炎大鼠模型应用大承气汤后，血清IL-1β、IL-18、TNF-α浓度水平均较模型组减低，胰腺组织病理学积分较模型组明显减低，胰腺腺泡细胞凋亡指数明显升高。 结论 空肠内注入大承气汤具有抑制急性胰腺炎大鼠炎症反应、促进胰腺腺泡细胞凋亡的作用。
[关键词] 大承气汤；凋亡；急性胰腺炎
[中图分类号] R657.5 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2013)02(c)-0007-03
大承气汤治疗急性胰腺炎的疗效已得到广大临床工作者的认同。研究证明大承气汤有促进肠蠕动、防止肠道细菌及毒素移位、控制全身炎症反应综合征、抑制促炎因子等作用[1]。细胞凋亡或者坏死是胰腺自身消化、微循环障碍、炎性介质等多个因素作用于胰腺细胞后产生的最终影响，被认为是急性胰腺炎发病机制的终末效应阶段[2]。如细胞以凋亡方式死亡，则不引起炎症反应及胰外脏器功能损害，而只出现轻型胰腺炎。目前，大承气汤对急性胰腺炎胰腺腺泡细胞凋亡的影响仍为空白。因急性胰腺炎可延缓胃排空，造成恶心、呕吐，经空肠给药可有效避免呕吐导致给药失败。本实验建立急性重症胰腺炎大鼠模型，观察空肠内注入大承气汤对急性胰腺炎大鼠细胞因子的影响和胰腺腺泡细胞凋亡的影响。
1 材料与方法
1.1 实验材料
实验动物雄性SD大鼠，数目90只，体重250～280 g。大承气汤(北京中医药大学东直门医院中药房提供)，配方为大黄12 g、枳实12 g、厚朴15 g、芒硝9 g，煎为200 mL。
1.2 实验分组
大鼠随机分为假手术组、模型组和治疗组，每组各30例。假手术组仅行开腹、经胃造口置空肠管术。模型组采用3.5%牛磺胆酸钠胰周注射法制造大鼠急性胰腺炎模型，假手术组和模型组术后2 h一次性空肠内注入10 mL生理盐水。治疗组在模型组基础上术后2 h按10 mL/kg的剂量一次性空肠内注入大承气汤。
1.3 实验方法
大鼠术前空腹12 h，按分组标记后，称重。用10%水合氯醛(400 mg/kg体重)腹腔注射麻醉，开腹。假手术组大鼠：开腹后，行胃造瘘术，然后经胃造口置入内径1.0 mm硅胶管于空肠上段2.0 cm处，关腹。模型组及治疗组大鼠：开腹后，用1 mL注射器向胰周被膜内匀速注射3.5%牛磺胆酸钠约1 mL，使整个胰腺均匀隆起。然后经胃造口置入内径1.0 mm硅胶管于空肠上段2.0 cm处。检查无消化道漏，关腹。各组大鼠术后10～15 min清醒后限制饮水，笼中自由活动。术后2 h，治疗组按10 mL/kg的剂量经造瘘硅胶管一次性空肠内注入大承气汤，假手术组和模型组经造瘘硅胶管一次性空肠内注入相应体积的生理盐水。给药24 h后开腹，腹主动脉取血1 mL，于4℃下离心10 min，转速1 500 r/min。取上清，分装冻存于-80℃冰箱。切取胰腺标本，置20%中性磷酸盐缓冲液-甲醛中固定，送组织病理检查。
1.4 检测方法
1.4.1 检测项目及方法 大鼠血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL -1β)、白介素18(IL -18)集中采用ELISA法检测TNF-α、IL -1β、IL -18浓度变化。
1.4.2 胰腺炎组织损伤病理评分标准 胰腺组织病理学积分采用改良Grewal法[3]对胰腺炎组织损伤进行定量评估，病理评分标准如下。①水肿：0分，无水肿；1分，胰腺小叶间隙增宽；2分，重度叶间隙增宽；3分，腺泡间隙增宽；4分，细胞间隙增宽。②炎症：以每个高倍视野(HPF)中的炎性细胞数计算，每5个炎细胞计0.5分，超过30个计4分。③出血：以每个HPF计算，0分，无出血；1分，1～2个出血点；2分，3～4个出血点；3分，5～6个出血点；4分，7～8个或更多出血点。④坏死程度：以每个HPF计坏死细胞数，0分，1～4个/HPF；1分，5～8个/HPF；2分，9～12个/HPF；3分，13～16个/HPF；4分，17个以上或广泛融合的坏死。连续观察8～10个视野，根据各个视野的水肿、炎症、出血和坏死各类积分分别计算均数；各均数相加得每只大鼠的病理积分总分。
1.4.3 计算胰腺腺泡细胞凋亡指数 每个大鼠的胰腺石蜡标本块取8个切片，每张切片选取8个阳性细胞数最多的高倍视野，每个视野计数100个细胞和其中的凋亡细胞，计算800个腺泡细胞中阳性细胞所占的百分比作为每只大鼠胰腺组织的凋亡指数，凋亡指数=阳性细胞数/800×100%。
1.5 统计学方法
应用SPSS 11 ......
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