反义TIMP-1表达质粒对实验性肝纤维化的影响(1)
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[摘要]目的：观察反义TIMP-1真核表达质粒对实验性肝纤维化的影响。方法：运用重组DNA技术及反义技术，构建反义TIMP-1真核细胞表达质粒，经脂质体包埋，将其导入实验性肝纤维化大鼠模型体内，通过半定量RT-PCR，病理形态学观察及western bloting免疫印记技术，观察反义TIMP-1表达质粒对大鼠肝纤维化的影响。结果：反义TIMP-1质粒组与肝纤维化组、空质粒组相比TIMP-1mRNA、MMP-13mRNA及蛋白表达明显减少(P<0.05)，空质粒组与肝纤维化组无显著性差异(P>0.05)；正常对照组与各实验组之间的病理学分级有显著性差异(P<0.05)；反义TIMP-1质粒组病理学分级较空质粒组及有明显改善(P<0.05)；空质粒组与肝纤维化组无显著性差异(P>0.05)。结论：反义TIMP-1/pcDNA3.1(+)真核细胞表达质粒使TIMP-1mRNA、MMP-13mRNA及蛋白的表达受到抑制，反义TIMP-1表达质粒对肝纤维化有较好的改善作用，为以后肝纤维化的基因治疗奠定基础。
[关键词]肝纤维化；反义基质金属蛋白酶抑制因子-1；基质金属蛋白酶-13
肝纤维化主要是由于细胞外基质(ECM)降解减少导致ECM沉积增多而形成，细胞外基质的降解受基质金属蛋白酶-基质金属蛋白酶抑制剂(MMPs-TIMPs)系统的调节。基质金属蛋白酶(MMPs)在降解纤维化肝脏过多细胞外基质(ECM)的过程中起主要作用，其中间质胶原酶
(人MMP-1，鼠MMP-13)在降解纤维化肝脏ECM过程中起重要作用[1]。本研究构建了反义pcDNA3.1(+)/TIMP-1真核表达载体，将其导入到复合因素复制的实验性肝纤维化大鼠体内，观察pcDNA3.1(+)/TIMP-1真核表达质粒对实验性肝纤维化的影响。
1材料与方法
1.1、材料
正常纯种系SD大鼠60只，雌性，体重200～300g。脂质体Lipofectmine2000、Trizol Reagent、UNIQ-200大剂量质粒抽提试剂盒、UNQI-10柱式PCR切胶回收试剂盒 ......
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