中药苍柏湿毒清颗粒剂对解脲支原体体外作用的实验研究(1)
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【摘 要】 目的:观察中药苍柏湿毒清颗粒剂对解脲支原体(Uu)体外抑制作用。方法:苍柏湿毒清颗粒剂及其所含单味药分别制成药液，连续倍比稀释，观察其对Uu的抑制作用，测定其最低抑菌度，并与四妙丸、萆薢分清饮、热淋清颗粒、五味消毒饮的抑制作用进行对比。结果:单味药物中抑菌效果由高到低的是黄柏、白头翁、柴胡、土茯苓，复方药物中抑菌效果较好的是苍柏湿毒清(MIC为7.81 mg/ml)，优于萆薢分清颗粒、五味消毒饮和热淋清颗粒剂，而四妙丸对解脲支原体几乎没有抑制作用(MIC为250 mg/ml)。结论:苍柏湿毒清颗粒剂具有直接抑制Uu繁殖、生长作用。
【关键词】 苍柏湿毒清； 解脲支原体； 最低抑菌度(MIC)； 实验研究
解脲支原体(Uu)是一群介于细菌和病毒之间、目前所知的能独立生活的最小微生物。它主要通过性接触传播，可以导致多种疾病，如：非淋球菌性尿道炎，慢性前列腺炎，附睾炎，不孕不育，妊娠感染，新生儿疾病，尿路结石等[1]。近年在门诊非淋患者中支原体阳性者占到60%以上，而临床上95%以上支原体性泌尿生殖道感染是由Uu引起[2]。由于广谱抗生素的广泛应用，患者反复感染及慢性迁延等因素，耐药菌株不断增加，给治疗带来了很大的困难。近年来运用中医中药治疗本病，效果显著，副作用少。我科应用苍柏湿毒清颗粒剂内服治疗大量解脲支原体性尿道(宫颈)炎患者，疗效满意，对该药及其组成成分药进行解脲支原体体外抑制试验，结果表明该药具有抑制Uu繁殖、生长的作用。
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1 材料
1.1 试 剂
试剂采用广东省珠海海泰生物科技有限公司生产的解脲支原体培养药敏试剂盒。粤食药监械(准)字：2005第2400108号。执行标准：Y2B/粤0352-2004。8×12孔板(中国北京化工厂生产)。
1.2 标本采集
本实验所有菌株均来自东方医院皮肤性病科化验室化验的患者。男性患者要求2小时以上未排小便，在尿道口消毒后，用无菌棉拭子插入尿道2～3cm轻轻转动，停留30秒后取出；女性则于外阴消毒后用无菌棉拭子插入患者宫颈2～3cm旋转两圈，停留30秒后取出(棉拭子勿碰阴道壁)，立即接种于固体培养基，放于37℃恒温箱内的烛缸中培养24小时至36小时。固体培养基变为紫红色且显微镜检出现典型的“油煎蛋”样菌落，然后在超净台内、显微镜下取菌落接种于另一个培养基上，经过三次传代，即得到纯种解脲支原体，置-20℃冰箱冷藏保存备用[1]。
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1.3 药 物
苍柏湿毒清颗粒剂(江阴天江药业有限公司，批号0508123)：炒苍术10g，黄柏10g，生黄芪10g，柴胡10g，丹参15g，白扁豆10g，生苡仁30g，茯苓15g，苦参10g，马齿苋15g，马鞭草10g，虎杖10g，败酱草15g，白头翁10g，白花蛇舌草15g；五味消毒饮(选自《医宗金鉴》比例)：金银花9g，野菊花6.6g，蒲公英6.6g，紫背天葵子6.6g，地丁6.6g；四妙丸(选自《成方便读》比例)：炒苍术10g，黄柏20g，怀牛膝10g，生苡仁20g；热淋清颗粒(贵州威门药业股份有限公司生产，批号：国药准字Z52020383)4g；萆薢分清颗粒(选自《医学心悟》比例)：川萆薢6g，黄柏1.5g，石菖蒲1.5g，丹参4.5g，车前子4.5g，白术3g，莲子心2.1g，茯苓3g。
以上每个药方分别把诸药相混，先加入药物质量2倍蒸馏水浸泡30分钟，使其充分溶解，置于高压灭菌锅中，121℃，15min灭菌。冷却后离心弃去沉淀，并蒸发浓缩成浓度为1:1(即lml药液相当于1g生药)，即药液浓度为500mg/ml，调整PH值为5.0±0.5，分装于无菌试管中，贴好标签，于冰箱内4℃保存备用。
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2 方法
按刘忠义法[3]，略加改进。超净化工作台内进行操作。
2.1 苍柏湿毒清颗粒剂体外抑菌试验操作步骤
(1)先将液体培养基、Uu菌株、备用苍柏湿毒清、萆薢分清颗粒、四妙丸、热淋清颗粒、五味消毒饮制剂、8×12孔板置于37℃恒温箱中预温2小时；
(2)将25u1备用苍柏湿毒清制剂加至孔板之第2, 3孔；
(3)将25u1液体培养基分别加入第3～11孔；
(4)用微量移液器，从第3孔开始，反复吹打10次，倍比稀释备用制剂至第11孔，混匀后于11孔吸出25u1弃去；
(5)第1孔加液体培养基75u1，第2～11孔各50u1，第12孔100u1；
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(6)第1～11孔各加入25ul Uu菌液，至此，所有孔的液体体积均为100u1。
(7)第1孔为阳性对照，第12孔为阴性对照。药物浓度从第2孔始依次为500mg/ml、250 mg/ml、125 mg/ml、62.5 mg/ml、31.25 mg/ml、15.625 mg/ml、7.8125 mg/ml, 3.9063 mg/ml,1.9531 mg/ml、0.9766 mg/ml共10个稀释度。
⑧加样完毕后，每孔上滴三滴石蜡油，盖上透明胶带，置37℃恒温箱中孵育24小时后观察结果，直至阳性对照孔发生颜色改变。
2.2 萆薢分清颗粒、四妙丸、热淋清颗粒、五味消毒饮制剂体外抑菌试验
操作步骤同上。
2.3 结果判定
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加样完毕，经37℃恒温箱孵育24小时后观察，根据反应板孔颜色变化，判定结果，孔内液体由澄亮的桔黄色变为澄亮的紫红色表明有解脲支原体生存，以最低无颜色变化孔的药物浓度定为最低抑菌度(MIC)。
2.4 中药药敏标准
中药对解脲支原体的MIC尚无统一标准。我们根据文献的标准[2]作为判断标准，MIC≤7.81mg/ml生药浓度时较为敏感；当MIC在7.81～250.00mg/ml生药浓度时为中度敏感；当MIC>250.00mg/ml生药浓度时为不敏感[4]。
3 结果
我们用苍柏湿毒清、萆薢分清颗粒、五味消毒饮、热淋清颗粒、四妙丸及部分单味药对解脲支原体临床菌株进行体外抑制试验，结果表明：在所试验的单味药物中抑菌效果较好的是黄柏(MIC为1.95 mg/ml)，其次是白头翁(MIC为3.90 mg/ml)、柴胡(MIC为7.81 mg/ml)、土茯苓(MIC为31.25 mg/ml)；复方药物中抑菌效果较好的是苍柏湿毒清(MIC为7.81 mg/ml)，萆薢分清颗粒(MIC为31.25mg/ml)紧跟其后，五味消毒饮和热淋清颗粒冲剂位居第三位(MIC均为62.50 mg/ml)，而四妙丸对解脲支原体几乎没有抑制作用(MIC为500 mg/ml)。此试验结果证明苍柏湿毒清配伍合理，在体外对解脲支原体具有一定的抑制作用。具体结果见表1。
4 讨论
近年来，中草药抗解脲支原体研究的报道很多，但研究多重于单味中草药，复方研究较少，尤其是对复方及其单体成分研究更少。刘氏[2]采用微量稀释法测定了156种中草药对14株解脲支原体国际标准株的体外抑制效应。结果表明，解脲支原体对黄柏、白芷、地肤子、大黄等有较高的敏感性，其MIC90 ≤7.81mg/ml生药；对甘草、板蓝根、黄连、穿心莲、胡黄连、鱼腥草等次之，其MIC90 为15.63～62.5mg/ml生药；对苦楝皮和益母草等敏感性再次之，其MIC90 为250mg/ml生药；由此说明中草药在治疗解脲支原体性尿道(宫颈)炎上有重要价值。, http://www.100md.com(李元文 孙占学 张丰川 黎莲珺)