固本健脑法对老年健忘模型动物大脑皮层Na+-K+-ATP酶\血清SOD活性和MDA含量的影响(1)
摘 要：目的：固本健脑法对老年健忘模型动物大脑皮层Na+-K+-ATP酶、血清SOD活性和MDA含量的影响。方法：腹腔注射D-半乳糖和NaNO2，制造老年健忘大鼠模型，分别灌胃固本健脑方、补脾健脑方、补肾健脑方水煎液，并设正常对照组和模型对照组，均灌胃生理盐水，连续20d。灌胃结束后分别检测各组动物大脑皮层组织Na+-K+-ATP酶活性、血清SOD活性、血清MDA含量等指标。结果：模型组动物大脑皮层Na+-K+-ATP酶活性显著低于正常组、补脾组和固本组；模型组动物血清SOD活性明显低于正常组、补脾组和补肾组；模型组动物血清MDA含量明显高于正常组和各给药组。结论：固本法改善老年记忆的作用机制之一是调节大脑皮层Na+-K+-ATP酶活性，提高血清SOD活性，减低MDA含量。
关键词：固本健脑法；老年健忘模型；Na+-K+-ATP酶；SOD；MDA
中图分类号：R285.5文献标识码：A文章编号：1673-7717(2011)12-2702-03
, 百拇医药
Effect of Expression of Na+-K+-ATPase in Cortex And SOD And MDA in Blood serum
of The Forgetful Model in Aged Rat With Treatment of Consolidating Root And Nourishing Brain
MA Zuofng，JIANG Ruixue,ZHANG Liutong,WANG ping
(The College of Traditional Chinese Medicine of Hubei，Wuhan 430065，Hubei，Chikna)
Abstract:Intraperitoneal injection of D-galactose and NaNO2 was used for manufacturing forgetful old rats. Treat Animal Models with prescription on nourishing spleen and strengthening brain and prescription on nourishing kidney and strengthening brains and prescription on consolidating root and nourishing brains. Detect in all groups Cortex Na+-K+-ATPase, SOD and MDA in blood serum. Research the mechanism about treatment of consolidating root and nourishing brain to improve learning and memory function in rats.
, 百拇医药
Key words:Treatment of Consolidating Root and Nourishing Brain；The Forgetful Model in Aged Rat；Na+-K+-ATPase；SOD；MDA
________________________________________
收稿日期：2011-08-21
基金项目：湖北省教育厅青年骨干教师资助项目(2007C360533)
作者简介：马作峰(1967-)，男，河南南阳人，副教授，医学博士，研究方向：中医药延缓衰老、藏象学说应用及脑病防治。
通讯作者：王平(1962)，男(土家族)，湖北恩施人，教授，医学博士，研究方向：脑病的中医药防治、中医治则治法及病因病机研究。运用固本健脑法改善老年健忘的记忆功能是课题组长期坚持的研究方向，现已积累了大量的临床经验。前期的研究业已证明，固本健脑方可以通过调节海马神经递质水平、影响海马脑区c-fos基因表达等途径，提高模型动物的记忆功能。为了考察该方是否对大脑皮层的能量供应系统产生影响，固本健脑法是否具有抗氧化功能，课题组又开展了本次研究。
, http://www.100md.com
1 材料与方法
1.1 实验动物及模型制作
清洁级健康雄性Wistar大鼠，雌雄各半，3月龄，体重(200±20)g，由华中科技大学同济医学院实验动物学部提供，批号：0016152。适应性饲养1周后，用跳台法初筛，选成绩相似者，完全随机法分为正常对照组(15只)、模型组(60只)。参考文献\[1\]稍加改变。模型组大鼠腹腔注射D-半乳糖120mg·kg-1·d-1(生理盐水配制成240mg·mL-1)和NaNO290mg·kg-1·d-1(双蒸水配制成180mg·mL-1),连续40d,正常组大鼠腹腔注射2mL的生理盐水溶液。
造模结束后，分别用跳台法和Morroise水迷宫法比较正常对照组和模型对照组动物行为学指标，以正常对照组成绩明显优于模型对照组(P<0.05)为造模成功。将造模成功的Wistar大鼠(60只)，完全随机法分为模型对照组(B)、补脾健脑方组(C)、补肾健脑方组(D)、固本健脑方组(E)，每组15只。加上没有造模的正常对照组(A)15只动物，使参加实验的动物达5组，75只。
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1.2 给药方法\[2\]
各给药组大鼠在水迷宫检测造模效果以后，每天分别灌胃固本健脑方、补脾健脑方、补肾健脑方水煎液；正常对照组和模型对照组大鼠灌胃2mL的生理盐水溶液,连续20天。
固本健脑方由党参、杞果、何首乌、茯苓、山楂、石菖蒲等药物组成；补脾健脑方由党参、茯苓、山楂、石菖蒲等组成；补肾健脑方由杞果、何首乌、山楂、石菖蒲等组成。所有药物均购自南阳市医药公司，经中药鉴定专家鉴定，均为正品。按人与动物体表面积折算法，算得大鼠等效剂量分别为每公斤体重50g生药(固本健脑方)、40g生药(补脾健脑方、补肾健脑方)，以用5倍于药材的冷水浸泡20min，然后用武火煎至水沸，改用文火煎煮40min，滤出药液加冷水适量，煎至水沸，改用文火煎煮30min，滤出药渣，将两次煎取药液混匀，浓缩成每毫升含生药2.5g(固本健脑方)和2g(补脾健脑方、补肾健脑方)的药液，3种药液均置冰箱0～4℃保存。每次灌胃2mL，每天灌胃1次。
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1.3 主要仪器试剂
超微量ATP酶(Na+-K+)试剂盒，批号20100115，南京建成生物工程公司；SOD试剂盒，批号20101113，南京建成生物试剂公司；MDA试剂盒，批号20071017，南京建成生物试剂公司；SSW型微电脑电热恒温水槽，上海博迅实业公司生产；752型紫外光栅分光光度计，山东高密分析仪器厂；GL21M型高速冷冻离心机，长沙湘智离心机仪器有限公司；752型紫外光栅分光光度计，山东高密分析仪器厂；DY89-Ⅱ型电动玻璃匀浆机，宁波新芝生物科技股份有限公司；FC204型电子天平，上海精科实业公司。
1.4 实验方法\[3\]
给药结束后，各组动物均禁食12h，每组的1-10号动物断头取血后(11-15号动物做免疫组化切片)，迅速于冰块上打开颅腔，取出全脑放在下面垫有冰盘的滤纸上，用生理盐水将脑上的血液冲洗干净。然后用刀片延大脑半球后端与小脑之间的横裂切掉小脑，延大脑纵裂切开，使大脑两个半球分开，再小心剥取大脑皮层，用生理盐水冲洗干净，精确称重后，在冰水浴中加入10倍量(W/V)的预冷生理盐水匀浆。以10000r/min离心20min,按试剂盒说明书提取细胞膜测Na+-K+-ATP酶活性。, http://www.100md.com(马作峰 姜瑞雪 张六通 王平)
关键词：固本健脑法；老年健忘模型；Na+-K+-ATP酶；SOD；MDA
中图分类号：R285.5文献标识码：A文章编号：1673-7717(2011)12-2702-03
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Effect of Expression of Na+-K+-ATPase in Cortex And SOD And MDA in Blood serum
of The Forgetful Model in Aged Rat With Treatment of Consolidating Root And Nourishing Brain
MA Zuofng，JIANG Ruixue,ZHANG Liutong,WANG ping
(The College of Traditional Chinese Medicine of Hubei，Wuhan 430065，Hubei，Chikna)
Abstract:Intraperitoneal injection of D-galactose and NaNO2 was used for manufacturing forgetful old rats. Treat Animal Models with prescription on nourishing spleen and strengthening brain and prescription on nourishing kidney and strengthening brains and prescription on consolidating root and nourishing brains. Detect in all groups Cortex Na+-K+-ATPase, SOD and MDA in blood serum. Research the mechanism about treatment of consolidating root and nourishing brain to improve learning and memory function in rats.
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Key words:Treatment of Consolidating Root and Nourishing Brain；The Forgetful Model in Aged Rat；Na+-K+-ATPase；SOD；MDA
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收稿日期：2011-08-21
基金项目：湖北省教育厅青年骨干教师资助项目(2007C360533)
作者简介：马作峰(1967-)，男，河南南阳人，副教授，医学博士，研究方向：中医药延缓衰老、藏象学说应用及脑病防治。
通讯作者：王平(1962)，男(土家族)，湖北恩施人，教授，医学博士，研究方向：脑病的中医药防治、中医治则治法及病因病机研究。运用固本健脑法改善老年健忘的记忆功能是课题组长期坚持的研究方向，现已积累了大量的临床经验。前期的研究业已证明，固本健脑方可以通过调节海马神经递质水平、影响海马脑区c-fos基因表达等途径，提高模型动物的记忆功能。为了考察该方是否对大脑皮层的能量供应系统产生影响，固本健脑法是否具有抗氧化功能，课题组又开展了本次研究。
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1 材料与方法
1.1 实验动物及模型制作
清洁级健康雄性Wistar大鼠，雌雄各半，3月龄，体重(200±20)g，由华中科技大学同济医学院实验动物学部提供，批号：0016152。适应性饲养1周后，用跳台法初筛，选成绩相似者，完全随机法分为正常对照组(15只)、模型组(60只)。参考文献\[1\]稍加改变。模型组大鼠腹腔注射D-半乳糖120mg·kg-1·d-1(生理盐水配制成240mg·mL-1)和NaNO290mg·kg-1·d-1(双蒸水配制成180mg·mL-1),连续40d,正常组大鼠腹腔注射2mL的生理盐水溶液。
造模结束后，分别用跳台法和Morroise水迷宫法比较正常对照组和模型对照组动物行为学指标，以正常对照组成绩明显优于模型对照组(P<0.05)为造模成功。将造模成功的Wistar大鼠(60只)，完全随机法分为模型对照组(B)、补脾健脑方组(C)、补肾健脑方组(D)、固本健脑方组(E)，每组15只。加上没有造模的正常对照组(A)15只动物，使参加实验的动物达5组，75只。
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1.2 给药方法\[2\]
各给药组大鼠在水迷宫检测造模效果以后，每天分别灌胃固本健脑方、补脾健脑方、补肾健脑方水煎液；正常对照组和模型对照组大鼠灌胃2mL的生理盐水溶液,连续20天。
固本健脑方由党参、杞果、何首乌、茯苓、山楂、石菖蒲等药物组成；补脾健脑方由党参、茯苓、山楂、石菖蒲等组成；补肾健脑方由杞果、何首乌、山楂、石菖蒲等组成。所有药物均购自南阳市医药公司，经中药鉴定专家鉴定，均为正品。按人与动物体表面积折算法，算得大鼠等效剂量分别为每公斤体重50g生药(固本健脑方)、40g生药(补脾健脑方、补肾健脑方)，以用5倍于药材的冷水浸泡20min，然后用武火煎至水沸，改用文火煎煮40min，滤出药液加冷水适量，煎至水沸，改用文火煎煮30min，滤出药渣，将两次煎取药液混匀，浓缩成每毫升含生药2.5g(固本健脑方)和2g(补脾健脑方、补肾健脑方)的药液，3种药液均置冰箱0～4℃保存。每次灌胃2mL，每天灌胃1次。
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1.3 主要仪器试剂
超微量ATP酶(Na+-K+)试剂盒，批号20100115，南京建成生物工程公司；SOD试剂盒，批号20101113，南京建成生物试剂公司；MDA试剂盒，批号20071017，南京建成生物试剂公司；SSW型微电脑电热恒温水槽，上海博迅实业公司生产；752型紫外光栅分光光度计，山东高密分析仪器厂；GL21M型高速冷冻离心机，长沙湘智离心机仪器有限公司；752型紫外光栅分光光度计，山东高密分析仪器厂；DY89-Ⅱ型电动玻璃匀浆机，宁波新芝生物科技股份有限公司；FC204型电子天平，上海精科实业公司。
1.4 实验方法\[3\]
给药结束后，各组动物均禁食12h，每组的1-10号动物断头取血后(11-15号动物做免疫组化切片)，迅速于冰块上打开颅腔，取出全脑放在下面垫有冰盘的滤纸上，用生理盐水将脑上的血液冲洗干净。然后用刀片延大脑半球后端与小脑之间的横裂切掉小脑，延大脑纵裂切开，使大脑两个半球分开，再小心剥取大脑皮层，用生理盐水冲洗干净，精确称重后，在冰水浴中加入10倍量(W/V)的预冷生理盐水匀浆。以10000r/min离心20min,按试剂盒说明书提取细胞膜测Na+-K+-ATP酶活性。, http://www.100md.com(马作峰 姜瑞雪 张六通 王平)