TenascinC在瘢痕疙瘩成纤维细胞中表达增高及其意义(1)
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[摘要]目的：探索Tenascin C在瘢痕疙瘩组织的表达及其意义。方法：使用免疫组化方法对15例瘢痕疙瘩组织和正常皮肤组织成纤维细胞表达的Tenascin C表达进行检查。结果：与正常皮肤成纤维细胞相比，瘢痕疙瘩成纤维细胞高表达Tenascin C，具有显著差异，P<0.01。结论：瘢痕疙瘩成纤维细胞自分泌产生Tenascin C，在瘢痕疙瘩组织高表达，是瘢痕疙瘩组织的特异性标志物。
[关键词]瘢痕疙瘩；Tenascin C；成纤维细胞
[中图分类号]R619+.6 [文献标识码]A [文章编号]1008-6455(2012)08-1330-03
瘢痕疙瘩是皮肤损伤后伤口愈合异常现象，其形成机制仍然未知[1]。肌腱蛋白C(Tenascin C)、XIV胶原蛋白和纤维连接蛋白均属于细胞外基质糖蛋白。胚胎发育过程中，间充组织含有丰富的Tenascin C，但在成人组织中的分布却较少[2]。在皮肤的炎症反应、伤口愈合过程和增生性皮肤疾病中Tenascin C的表达水平较高，而正常皮肤组织含量很低[3]。XIV胶原蛋白纤维和纤维连接蛋白构成人皮肤的真皮的主要成分，但是Tenascin C、XIV胶原蛋白和纤维连接蛋白在瘢痕疙瘩的表达却未见报道。我们用免疫组化方法研究Tenascin C在瘢痕疙瘩和正常皮肤的成纤维细胞分泌的细胞外基质蛋白表达情况，为筛查瘢痕疙瘩特异性标记物以及抗瘢痕疙瘩的发生、发展提供研究资料。
1 材料和方法
1.1 试剂：胎牛血清(Gbico公司)。DMEM培养基(Hyclone公司)。青链霉素(杭州四季青生物公司)。兔抗人Tenascin C单克隆抗体、兔抗人纤维连接蛋白、碱性磷酸酶标记的羊抗兔IgG(北京博奥森生物公司)。INT/BCIP碱性磷酸酶显色试剂(上海生工生物工程公司)。
1.2 患者筛选以及皮肤组织的处理：取材自2009年8月～2010年12月期间，经齐齐哈尔医学院第三附属医院整形美容科确诊的15例瘢痕疙瘩患者为实验组，年龄19～41岁，其中男11例、女4例。术中切取患者全层瘢痕组织标本；同例标本瘢痕疙瘩周围附带的少量正常皮肤组织为对照组。
1.4 免疫组化染色：按照免疫组化实验步骤进行碱性磷酸酶免疫组化染色，添加兔抗人Tenascin C单克隆抗体(1:50)，4℃过夜，PBS清洗后，碱性磷酸酶标记的羊抗兔IgG(1:1000)孵育1h，以INT/BCIP碱性磷酸酶显色试剂显色，苏木精复染。
1.5 结果判断：使用OLYMPUS BX5型显微镜观察，将成纤维细胞免疫组以染色强度划分为五个等级，从0到4分别对应阴性，弱，一般，强和特强染色。
1.6 统计学处理：使用SPSS18.0统计软件，配对资料使用t检验，P<0.05具有统计学意义。
2 结果
3 讨论
Tenascin C由成纤维细胞或肌细胞等间质细胞产生，Tenascin C强烈表示在多个器官胚胎发育过程中，参与上皮、间质的相互作用，而成人皮肤中的表达和分布比较局限[2]。Tenascin C在皮肤炎症或皮肤增生性疾病表达增高，被认为皮肤恶变的标志性物质之一[4]。近年来发现Tenascin C在痤疮，硬皮病或过度增生性皮肤病等良性病变中表达也增高[5-6]。体外研究表明，Tenascin C调节细胞与纤维连接蛋白，而干扰成纤维细胞增殖、迁移和黏附，导致伤口收缩和诱导皮肤基因差异性表达[7]，Tenascin C促进角质细胞迁移，在伤口真皮层或伤口边缘肉芽组织强烈表达。
本实验使用的瘢痕组织未进行过其他治疗措施，瘢痕疙瘩成纤维细胞表达Tenascin C增高，说明瘢痕疙瘩成纤维细胞会自分泌高表达的Tenascin C。我们的研究结果证实，体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞是通过自分泌机制表达Tenascin C，这与以往学者观察到的瘢痕疙瘩组织切片Tenascin C染色强度较高结果相似[8]，这可能是由于瘢痕疙瘩成纤维细胞会高表达TGF-β1，持续高表达的TGF-β1会促进Tenascin C分泌，进而促使XIV胶原蛋白和纤维连接蛋白的合成[9]。
尽管许多间质细胞能够表达Tenascin C，但瘢痕疙瘩中成纤维细胞是Tenascin C蛋白质的主要来源，其表达能反映正在进行的皮肤纤维化进程。瘢痕疙瘩成纤维细胞是否需要外界刺激或以自分泌/旁分泌的方式产生Tenascin C的机制尚不知晓。我们研究发现，瘢痕疙瘩成纤维细胞不需要外界因素刺激，即可以上调Tenascin C表达。因此，我们认为瘢痕疙瘩的成纤维细胞以自分泌机制分泌Tenascin C，同时通过Tenascin C对成纤维细胞自身的反馈机制，进一步高表达Tenascin C，进而导致持续化的的皮肤纤维化过程的启动或持续 ......
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