抗衰益智胶囊对衰老大鼠脑组织三磷酸腺苷酶活性 和血清白细胞介素-6\肿瘤坏死因子-α的影响(2)
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1.2药物
抗衰益智胶囊由熟地黄、枸杞子、黄芪、肉苁蓉、三七、胆南星、麝香等中药组成,上述药材均购自兰州医药公司药材市场,先将熟地黄、枸杞子、黄芪、肉苁蓉等按特定比列配伍后用砂锅煎煮,文火慢煎,第1次煎煮40 min,第2次煎煮50 min,两煎滤液去渣,将药液混合,然后将滤液浓缩至清膏状；将特定比列麝香、三七等药打粉过120目筛,并将药粉与浓缩药液混合,干燥,按比例分装成胶囊。脑复康,西安交大瑞鑫药业有限公司,批号101217。
1.3主要仪器与试剂
酶联免疫检测仪(美国BIO-RAD),电热恒温培养箱(金坛市恒丰仪器厂)；D-半乳糖(上海试剂二厂,批号110516)；Na+-K+-ATP酶测试盒(批号20120928)、Ca2+-Mg2+-ATP酶测试盒(批号20121113)、考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒(批号20121003)、IL-6测试盒(批号20121023)、TNF-α测试盒(批号20121106),南京建成生物工程研究所生产。
2实验方法
2.1分组
受试大鼠适应性饲养1周后,将72只大鼠按体质量编号,以随机数字表法抽取10只为空白组,其余62只为造模组,并参考文献[4]造模。所有大鼠在统一条件下(室温18 ℃、相对湿度30%左右)标准饲料喂养,自由饮水。
2.2造模与给药
大鼠每日腹腔注射D-半乳糖0.125 g/kg,连续6周,造成大鼠拟衰老动物模型,采用跳台法筛选符合衰老标准大鼠,再将成模动物分为模型组、脑复康组和抗衰益智胶囊低、高剂量组,每组10只。从第50日开始各组大鼠灌胃给药,测定动物体质量,计算给药量,每10 d 测体质量1次,以调整药量。等效剂量以成人常规剂量按人与动物体型系数折算[5]。即抗衰益智胶囊高(18 g/kg,相当于60 kg体质量成人每日临床用量的10倍)、低剂量组(4.5 g/kg,相当于60 kg体质量成人每日临床用量的2倍),脑复康组(7 g/kg,相当60 kg体质量成人每日临床用量的5 倍),2 mL/次灌胃。正常组和模型组每日给予等量生理盐水。每日灌胃1次,连续60 d。
2.3组织取材与标本制备
各组大鼠末次给药后,禁食不禁水12 h,测体质量后记录,大鼠3%戊巴比妥钠30 mg/kg麻醉,股动脉采血4 mL,37 ℃水中放置30 min,3000 r/min离心10 min,分离血清,4 ℃冰箱保存,待测效应指标。大鼠采血后断头处死,低温条件下快速取脑组织,以冰冷的生理盐水冲洗,滤纸吸干,称重后置于匀浆器中,用9倍生理盐水匀浆(匀浆器的末端置于放冰块的冷水中),3 500 r/min离心10 min,取上清液,置4 ℃冰箱保存,采用化学比色法和酶联免疫吸附法测定效应指标 ......
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