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编号:12642100
快速PCR方法在蛇类药材真伪鉴别中的应用(2)
http://www.100md.com 2014年10月1日 中国中药杂志 2014年第19期
     2.3 PCR产物检测 在PCR扩增产物中加入2 μL 100× SYBR Green I于365 nm紫外波长下检测荧光,出现绿色荧光则表明存在阳性扩增产物。

    3 结果与分析

    3.1 碱裂解法提取蛇类材料DNA 由于碱裂解法提取的DNA无法通过凝胶电泳检测[9],本文使用通用引物进行扩增,以检测所获得DNA质量。1%琼脂糖凝胶电泳检测结果表明,利用Cytb-H/Cytb-L引物,3种蛇类药材及其20个混淆品均获得约400 bp大小的扩增产物,见图1,说明碱裂解法提取的DNA可以满足PCR反应的要求。

    3.2 PCR反应条件的确定 为建立准确、快速、简便的蛇类药材分子鉴别方法,本文对已报道的PCR反应体系进行了优化,在最初的25 μL PCR反应体系中加入1 μL 20% PVP 40溶液、0.5 μL 10 g·L-1 BSA溶液,可显著增加PCR反应的成功率[10] ......
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