党参多糖不同组分的抗炎活性及机制研究(4)
2.3.3 3種多糖的抗炎机制研究 按“2.3.2”项下方法进行细胞接种、分组和给药。然后将细胞置于37 ℃、5% CO2培养箱中培养24 h，用PBS快速清洗细胞，加入Trizol试剂，反复吹打，使细胞充分裂解，按照试剂盒说明书操作提取总mRNA。采用分光光度计测定总mRNA在260、280 nm波长处的吸光度(OD)，根据OD260/OD280评价其纯度。然后取mRNA反转录合成cDNA后，在Mini OpticonTM检测系统上进行PCR扩增。扩增体系(20 μL)：qPCR试剂10 μL，上、下游引物(10 μmol/L)各0.5 μL，双蒸水5.0 μL，cDNA模板4.0 μL。扩增条件：95 ℃预变性2 min;95 ℃变性10 s，62 ℃退火30 s，72 ℃延伸15 s，共40个循环。以β-actin为内参，采用2-ΔΔct法计算目的基因的表达水平 ......
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