二、遗传学分析

    经患儿家属知情同意，并经中山大学伦理委员会批准后，取患儿及其父母外周血2 ml，按常规酚/氯仿/异戊醇抽提法抽提基因组DNA。

    对患儿及其父母的FGFR2基因的全部18个外显子及其剪接位点进行直接序列分析。根据NM_000141.4序列，从UCSC数据库(http：//genome.ucsc.edu)中获取人类FGFR2基因的DNA序列。以在线软件Primer3(http：//frodo.wi.mit.edu/)进行引物设计，由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。PCR 反应体系为30 μl，含1×PCR Buffer、4 种脱氧核糖核苷三磷酸(dNTP)各20 mmol/L、氯化镁2.5 mmol/L，上游和下游引物各0.33 μmol/L、Taq DNA聚合酶(MBI)1.5 U， 基因组DNA约0.1 ～ 0.7μg。热循环条件为：94 ℃预变性5 min;94 ℃变性45 s、60 ℃退火45 s、72 ℃

    延伸1 min 30 s，共35 个循环;最后72 ℃延伸10 min。对PCR 产物进行琼脂糖凝胶电泳、回收纯化，并直接测序 ......