没食子酰表没食子儿茶素抗肿瘤作用的研究
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37c医学网
作者：梁钢 黄仁彬 黄志明 符麟军
单位：广西医科大学药理学教研室 南宁 530021
关键词：没食子酰表没食子儿茶素；小鼠肝癌；小鼠肉瘤180；抗肿瘤
广西医科大学学报000203
摘要 目的：了解没食子酰表没食子儿茶素(EGCG)抗肿瘤作用。方法：用小鼠肉瘤180(S-180)、小鼠肝癌(Hep)为瘤株，对EGCG进 行体内外抗肿瘤药效试验和观察其对荷瘤小鼠免疫器官重量的影响。结果：EGCG灌胃80、40 mg/kg.d-1，连续7 d，对小鼠移植 性S-180实体瘤有明显抑制作用；80 mg/kg.d-1可延长Hep腹水癌小鼠生命；160、 80、40、20 mg/L的EGCG对S-180和Hep瘤细胞的体外存活有明显抑制；160、80、40、20、1 0 mg/L的EGCG可完全或部分灭活Hep瘤苗；除10 mg/L浓度组外，其余各浓度组亦可部分灭 活S-180瘤苗；80、40 mg/kg可增加荷瘤小鼠胸腺重量。结论：EGCG在实验条件下有一定抗肿瘤作用，能延缓免疫器官衰退 。
, 百拇医药
中国图书资料分类法分类号 R965.1
STUDY OF ANTITUMOR EFFECT OF (-) EPIGALLOCATECHIN GALLATE
Liang Gang,Huang Renbin,Huang Zhiming
(Department of Pharmacology, Guangxi Medical University,Nanning 530021,China)
Abstract Objective:The purpose of this study was to understan d the anti-tumor effect of (-) epigallocatechin gattate,EGCG.Methods:The pharmacodynamic test of EGCG on sarcoma 180(S-180 ) hepato cacinoma (Hep)in mice or in vitro and the effect of EGCG on the weight of immunic organ of mice implanted tumor were observed.Results:The finding showed that the growth of transplanted S- 180 was significantly inhibited and that the lifetime of mice with Hepascitic ca rcinoma could be prolonged when EGCG were administered intragastioly to mice for 7days.EGCG could significantly inhibited the living cells of S-180 and Hep in vitro and decrease the rate of implant on tumor cells to mice.In addition,EGCG could also increase the weight of thymus in mice with tumor.Conclusion:These results suggested that EGCG have antitumor ef fect and can delay immunic organ failure.
, 百拇医药
Key words (-)epigallocatechin；EGCG；hepatocacinoma；sarcoma1 80;antitumor
从绿茶提取的多酚化合物(Polyphenol compunds)中含有多种儿茶素(Catechin)。这些 儿茶素类物质中包括多种(+)儿茶素和(-)表儿茶素[(-)-Epicatechin,EC]。它们具有多 种生理功能，如抗氧化、清除自由基、抗衰老等作用[1，2]。近来有研究还表明， 绿茶或茶多酚具有明显的防癌和抗癌作用，能诱导肿瘤细胞凋亡和延缓荷瘤动物免疫器官衰 退的作用[3～7]。为进一步确定绿茶多酚类提取物的抗肿瘤作用是否和其中的表儿 茶素主要成分有关，本实验直接用纯的没食子酰表没食子儿茶素(-)-(Epigallocatechin gallate,EGCG)，观察其体内外抗小鼠肿瘤的作用和对荷瘤小鼠免疫器官重量的影响。
1 材 料
, 百拇医药
1.1 药物：没食子酰表没食子儿茶素(Epigallocatechingallate,EGCG)，纯度>98%，由广西医科大学化学教研室提供。注射用环磷酰胺(CTX)，200mg/瓶，上海华联制药有限公司(961111)产品。
1.2 动物：昆明种小白鼠，广西医科大学实验动物中心提供，普通级。
1.3 瘤株：小鼠肝癌(Hep)，小鼠肉瘤(S-180)由广西肿瘤防治研究所药理室提供。
1.4 培养液：RPMI-1640；Hank's液。
2 方法与结果
2.1 对小鼠移值性S-180实体瘤的影响：选取健康小鼠50只，体质量18～21g。每鼠右腋窝皮下接种1∶3S-180细胞悬液0.2ml，次日称重后随机分成5组，每组10只，雌雄各半。各组给药剂量及途径：阴性对照组给生理盐水(NS)，阳性对照组隔日给CTX20mg/kg,EGCG高、中、低剂量组分别给120、60、30mg/kg，灌胃给药，每天1次，连续给药7d。
, 百拇医药
给药结 束后次日处死小鼠，然后剥取瘤块并称重，计算其抑瘤率[8]。按同样方法重复试 验一次。结果：EGCG高、中剂量组平均瘤重低于阴性对照组(P<0.05)，但低剂量与阴 性对照组比较无显著差异；重复试验结果相同。提示对小鼠移植性S-180实体瘤有抑制作用 ，见表1。
2.2 对小鼠移植性Hep腹水瘤的影响：选取健康小鼠75只，体质量18～21 g，雌雄各半，每 鼠腹腔接种1∶3 Hep细胞悬液0.2 ml，次日根据性别、体质量随机分成5组，分组及给药方 法同实验1。给药结束后记录各组动物存活时间，计算生命延长率[8]。重复实验两 次。 结果：EGCG高剂量组的平均存活时间与阴性对照组比较有显著性差异(P<0.05)；重复 试验结果相同。表明EGCG有一定延长Hep腹水癌小鼠生命的作用，见表2。
2.3 对小鼠移植性肿瘤细胞体外存活的影响(台盼蓝染色法)：将EGCG用细胞培养液(RPMI 1640)按实验所需浓度逐管稀释为5个浓度，用细胞培养液将S-180和Hep瘤细胞制成细胞悬 液，空白对照用等量细胞培养液稀释。置37℃温育6 h，台盼蓝染色计数瘤细胞蓝染率，与 对照组比较，计算抑瘤率[9,10]。结果如表3所示，EGCG 5个浓度组的S-180和Hep 瘤细胞的蓝染率均明显高于空白对照组(P<0.01)，且呈剂量依赖性地递增，在对应浓 度组中，以Hep瘤细胞蓝染率高于S-180。对S-180和Hep的50%抑瘤浓度(IC50)分别为40 mg /L和20 mg/L。提示EGCG对S-180和Hep瘤细胞的体外存活有明显抑制作用。
, 百拇医药
2.4 对小鼠S-180和Hep瘤苗活性的影响：制备的S-180和Hep瘤细胞悬液浓度及EGCG浓度 比同实验3。将不含和含上述5个浓度比的EGCG瘤细胞悬液置37℃温育1.5 h，制成瘤苗。按 每鼠3×106个/0.1 ml瘤细胞的量，接种S-180瘤苗于小鼠右腋窝皮下，Hep瘤苗则接种 于小鼠腹腔，两瘤种各剂量组每组接种10只，观察其是否发病。按同样方法重复试验1次。 结果如表4，20至160 mg/L的EGCG可部分灭能S-180瘤苗，灭能作用随EGCG剂量增加而增强 ，10 mg/L的EGCG对S-180瘤苗无灭能作用，两实验结果相同；对于Hep瘤苗，第1次实验16 0 mg/L的EGCG组可完全灭能，第二次实验80 mg/L EGCG组也可完全灭能瘤苗，其余EGCG浓度 组仅能部分灭能瘤苗，灭能作用亦随剂量增加而增强。对照组两次实验均无灭能S-180和He p瘤苗作用。提示EGCG对S-180和Hep瘤苗活性有抑制作用。
2.5 对荷瘤小鼠免疫器官重量的影响：给药方式，EGCG剂量和给药时间同实验1，于接种S -180荷瘤小鼠停药24 h后称体质量和胸腺、脾脏的湿重，按文献[8]计算胸腺指数 和脾指数。结果：EGCG大、中剂量组的胸腺指数较阴性对照组明显增加(P<0.01或0.0 5)，低剂量组无显著差异；3个EGCG剂量组的脾脏指数与阴性对照组比较，无显著差异；CTX 组的胸腺和脾脏指数均低于阴性对照组(P<0.01)。提示：EGCG可增加S-180荷瘤小鼠 胸腺重量，见表5。
, 百拇医药
表1 EGCG对小鼠移植性S-180实体瘤的影响(
±s) 实验
次数
组别
药量
(mg/kg)
动物数
(始/末)
瘤重
(m/g)
抑 瘤率
(%)
, http://www.100md.com
1
NS
/
10/10
1.24±0.51
CTX
20
10/10
0.70±0.26**
43.5
EGCG
80
10/10
, 百拇医药
0.76±0.30*
38.7
EGCG
40
10/10
0.85±0.39*
31.5
EGCG
20
10/10
0.94±0.29
24.2
, http://www.100md.com
2
NS
/
10/10
1.19±0.32
CTX
20
10/10
0.64±0.23**
46.2
EGCG
80
10/10
, http://www.100md.com
0.70±0.20**
41.2
EGCG
40
10/10
0.72±0.29**
39.5
EGCG
20
10/10
0.99±0.34
16.8
, http://www.100md.com
与阴性对照组比较，*P<0.05，**P<0.01表2、EGCG对小鼠移植性Hep腹水瘤影响(±s) 实验
次数
组别
药量
(mg/kg)
动物数
(n)
平均生存时间
(t/d )
生命延长
率(%)
, 百拇医药
1
NS
/
15
10.1±2.8
CTX
20
15
12.2±4.0
20.8
EGCG
80
15
, 百拇医药
14.0±3.5*
38.8
EGCG
40
15
12.2±3.5
20.8
EGCG
20
15
11.8±3.6
16.8
2
, 百拇医药
NS
/
15
9.7±2.5
CTX
20
15
11.9±3.7
22.7
EGCG
80
15
13.5±4.1*
, 百拇医药
39.2
EGCG
40
15
12.3±3.8
26.8
EGCG
20
15
11.6±2.7
19.5
与阴性对照组比较，*P<0.05表3 EGCG对小鼠移植性肿瘤细胞体外存活的影响 组别
, 百拇医药
药物浓度
(ρB/mg。L-1)
瘤细胞数
(个/ml)
S-180
Hep
蓝染率
(%)
抑瘤率
(%)
蓝染率
(%)
, 百拇医药
抑瘤率
(%)
对照
0
3×107
8.3
5.7
EGCG
160
3×107
76.8**
68.5
, 百拇医药
89.2**
83.5
EGCG
80
3×107
68.2**
59.9
85.3**
79.6
EGCG
40
3×107
, 百拇医药
62.5**
54.2
67.4**
61.7
EGCG
20
3×107
52.4**
44.1
58.6**
52.3
, 百拇医药 EGCG
10
3×107
28.6**
20.3
36.2**
30.5
与对照组比，**P<0.01表4 EGCG对小鼠S-180和Hep瘤苗活性的影响 实验
次数
组别
药物浓度
, http://www.100md.com
(ρB/mg。L-1)
瘤细胞数
(个/ml)
接种量
(个/0.1 ml)
动物数
(n)
S-180
Hep
接种后
发病数
, 百拇医药 灭 能
情况
接种后
发病数
灭能
情况
1
对照
0
3×107
3×106
10
10
, http://www.100md.com
未灭
10
未灭
EGCG
160
3×107
3×106
10
1
部分灭
0
完全灭
EGCG
, http://www.100md.com
80
3×107
3×106
10
2
部分灭
1
部分灭
EGCG
40
3×107
3×106
, 百拇医药
10
5
部分灭
3
部分灭
EGCG
20
3×107
3×106
10
6
部分灭
5
, 百拇医药
部分灭
EGCG
10
3×107
3×106
10
10
未灭
7
部分灭
2
对照
0
, http://www.100md.com
3×107
3×106
10
10
未 灭
10
未灭
EGCG
160
3×107
3×106
10
, 百拇医药
1
部分灭
0
完全灭
EGCG
80
3×107
3×106
10
3
部分灭
0
部分灭
, 百拇医药
EGCG
40
3×107
3×106
10
4
部分灭
2
部分灭
EGCG
20
3×107
, http://www.100md.com 3×106
10
8
部分灭
6
部分灭
EGCG
10
3×107
3×106
10
10
未灭
, http://www.100md.com
9
部分灭
表5 EGCG对荷瘤小鼠免疫器官重量的影响(±s) 组别
药物剂量
(mg/kg)
动物数
(n)
体质量
(m/g)
相对重量(mg/g体质量)
胸腺
, 百拇医药
脾脏
NS
/
10
21.1±0.8
4.47±0.97
9.86±1.61
CTX
20
10
19.2±0.8
2.87±0.71**
, http://www.100md.com 7.65 ±1.52**
EGCG
80
10
20.9±0.8
6.03±0.46**
11.10 ±1.65
EGCG
40
10
20.7±0.8
5.30±0.62*
, http://www.100md.com
9.42±1.52
EGCG
20
10
20.9±0.9
5.11±0.23
9.74±1.02
与对照组比，*P<0.05，**P<0.01
3 讨 论
有报道，绿茶及其多酚化合物能阻断亚硝胺类和黄曲霉毒素B1等多种致癌物的化学致 癌 作用[3，4]，其主要成分儿茶素能抑制促癌剂引起的癌症正相关基因如C-fos，c -myc的基因表达[10]。绿茶多酚不仅可防癌，也有抗癌作用。茶多酚可抑制鼠MO4 细胞的侵袭性[12]，还可抑制小鼠荷瘤(S-180和EAC)的体内生长[5]以及 对多种动物及人肿瘤细胞的体外生长及存活起抑制作用[10，13] 。最近又有报道 ，绿茶水提物可诱导大肠癌LOVO细胞凋亡[7]，茶多酚则可诱导人胃癌细胞(MGC-8 03)凋亡[14]。由此可见，茶叶中的茶多酚是其抗肿瘤的主要活性成分，但茶多酚 是含有30多种化学成分的复合物，这些物质在参与抗肿瘤过程中所起的作用仍研究甚少。有 鉴于此，本研究进一步对抗氧化作用强的茶多酚单体成分之一的EGCG的抗肿瘤作用及其量效 关系进行了探讨。
, 百拇医药
研究表明，EGCG可抑制小鼠荷瘤生长，并有一定延长荷瘤小鼠生命的作用。在体外亦可 抑制小鼠荷瘤细胞的存活率和明显降低其瘤苗活性。这与上述文献报道的茶多酚的抗肿瘤作 用是一致的。
有资料说明，癌的各个发展阶段以及癌的治疗等多个方面都与自由基反应密切相关，尤 其与活性氧联系密切[15]。EGCG在表儿茶素类化合物中，具有很强的抗氧化能力， 能清除体内多种自由基形成系统产生的自由基和活性氧[1]。故推测其抗肿瘤作用 可能与其抗氧化性质有关，但其确切的作用机制有待进一步探索。
许多抗肿瘤化疗药物如CTX，在发挥抗肿瘤作用的同时，也抑制机体的免疫机能，使免 疫器官衰退。茶多酚与此不同，它可增加荷瘤小鼠免疫器官重量，提高机体免疫功能[ 6]，因此还有扶正作用。本研究所用EGCG亦有相似作用，其对免疫功能的具体作用正待 研究。了解EGCG的抗肿瘤作用无疑对儿茶素的开发和利用有重要意义。
, 百拇医药
广西区科技厅科学研究与技术开发课题 (桂科攻9817091)
参 考 文 献
1，梁 钢，黄志明，洪息君.儿茶素3种成分的抗氧化作用研究.广西医科大学学 报，1998，15(1)：17.
2，梁 钢，黄志明，洪息君.茶多酚抗衰老的动物实验研究.广西医学院学报，19 93，10(2)：139.
3，徐国平，宋圃菊.茶叶阻断胃癌高发区人体内源性亚硝基脯氨酸合成.北京医科 大学学报，1991，23(2)：51.
4，赵丽军，印
，徐冠雄，等.酚类化合物抑制大鼠肝癌启动机理的研究.卫生 毒理学杂志，1995，9(1)：1.
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5，童 彤，程书钧，李秀琴，等.没食子酰表没食子对促癌物TPA抑制作用的研究 .癌变.畸变.突变，1992，4(1)：1.
6，曹明富，林植华，虞研原，等.茶多酚对细胞免疫功能的影响及抑瘤作用.现代 应用药学，1994，11(4)：4.
7，谭晓化，张亚历，周殿元，等.绿茶水提取物诱导体外培养的大肠癌LOVO细胞的 凋亡.癌症，1998，17(3)：171.
8，李仪奎主编，中药药理学实验方法.上海：上海科学技术出版社，1991.512.[ ZK)
9，遵义医学院肿瘤研究组病理生理小组.肿节风抗癌作用的初步实验研究-Ⅰ(肿 节风对L615细胞的直接破坏作用).遵义医学院学报，1978，(1)：30.
10，侯 敢，黄迪南，祝其锋.3种天然抗氧化剂对早幼粒白血病细胞(HL-60)的生 长抑制作用研究.湖南中医学院学报，1996，16(1)：49.
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11，胡贵舟，韩 驰，陈君石.茶对促癌物(TPA)诱发小鼠皮肤癌基因表达的影响. 卫生研究，1995，24(4)：273.
12，Bracke ME,Castronovo V,Van Cauwenberge RM,et al.The antiinvasiveflav onoid (+) catechin binds to laminin and abrogates the feect of laminin on cell m orphology and adhesion.Exp Cell Res,1987，173:193.
13，范贤骏，王云霞，冯素瑜.绿茶儿茶素对体外培养细胞生长的影响.中华肿瘤 杂志，1992，14(3)：190.
14，赵 燕，曹 进.茶多酚诱导人胃癌细胞凋亡.湖南医科大学学报，1997，22( 5)：384.
15，郑荣梁.自由基与癌.见：方允中，李文杰主编.自由基与酶.北京：科学出版 社，1989.270.
收稿日期：1999-02-08, http://www.100md.com
单位：广西医科大学药理学教研室 南宁 530021
关键词：没食子酰表没食子儿茶素；小鼠肝癌；小鼠肉瘤180；抗肿瘤
广西医科大学学报000203
摘要 目的：了解没食子酰表没食子儿茶素(EGCG)抗肿瘤作用。方法：用小鼠肉瘤180(S-180)、小鼠肝癌(Hep)为瘤株，对EGCG进 行体内外抗肿瘤药效试验和观察其对荷瘤小鼠免疫器官重量的影响。结果：EGCG灌胃80、40 mg/kg.d-1，连续7 d，对小鼠移植 性S-180实体瘤有明显抑制作用；80 mg/kg.d-1可延长Hep腹水癌小鼠生命；160、 80、40、20 mg/L的EGCG对S-180和Hep瘤细胞的体外存活有明显抑制；160、80、40、20、1 0 mg/L的EGCG可完全或部分灭活Hep瘤苗；除10 mg/L浓度组外，其余各浓度组亦可部分灭 活S-180瘤苗；80、40 mg/kg可增加荷瘤小鼠胸腺重量。结论：EGCG在实验条件下有一定抗肿瘤作用，能延缓免疫器官衰退 。
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中国图书资料分类法分类号 R965.1
STUDY OF ANTITUMOR EFFECT OF (-) EPIGALLOCATECHIN GALLATE
Liang Gang,Huang Renbin,Huang Zhiming
(Department of Pharmacology, Guangxi Medical University,Nanning 530021,China)
Abstract Objective:The purpose of this study was to understan d the anti-tumor effect of (-) epigallocatechin gattate,EGCG.Methods:The pharmacodynamic test of EGCG on sarcoma 180(S-180 ) hepato cacinoma (Hep)in mice or in vitro and the effect of EGCG on the weight of immunic organ of mice implanted tumor were observed.Results:The finding showed that the growth of transplanted S- 180 was significantly inhibited and that the lifetime of mice with Hepascitic ca rcinoma could be prolonged when EGCG were administered intragastioly to mice for 7days.EGCG could significantly inhibited the living cells of S-180 and Hep in vitro and decrease the rate of implant on tumor cells to mice.In addition,EGCG could also increase the weight of thymus in mice with tumor.Conclusion:These results suggested that EGCG have antitumor ef fect and can delay immunic organ failure.
, 百拇医药
Key words (-)epigallocatechin；EGCG；hepatocacinoma；sarcoma1 80;antitumor
从绿茶提取的多酚化合物(Polyphenol compunds)中含有多种儿茶素(Catechin)。这些 儿茶素类物质中包括多种(+)儿茶素和(-)表儿茶素[(-)-Epicatechin,EC]。它们具有多 种生理功能，如抗氧化、清除自由基、抗衰老等作用[1，2]。近来有研究还表明， 绿茶或茶多酚具有明显的防癌和抗癌作用，能诱导肿瘤细胞凋亡和延缓荷瘤动物免疫器官衰 退的作用[3～7]。为进一步确定绿茶多酚类提取物的抗肿瘤作用是否和其中的表儿 茶素主要成分有关，本实验直接用纯的没食子酰表没食子儿茶素(-)-(Epigallocatechin gallate,EGCG)，观察其体内外抗小鼠肿瘤的作用和对荷瘤小鼠免疫器官重量的影响。
1 材 料
, 百拇医药
1.1 药物：没食子酰表没食子儿茶素(Epigallocatechingallate,EGCG)，纯度>98%，由广西医科大学化学教研室提供。注射用环磷酰胺(CTX)，200mg/瓶，上海华联制药有限公司(961111)产品。
1.2 动物：昆明种小白鼠，广西医科大学实验动物中心提供，普通级。
1.3 瘤株：小鼠肝癌(Hep)，小鼠肉瘤(S-180)由广西肿瘤防治研究所药理室提供。
1.4 培养液：RPMI-1640；Hank's液。
2 方法与结果
2.1 对小鼠移值性S-180实体瘤的影响：选取健康小鼠50只，体质量18～21g。每鼠右腋窝皮下接种1∶3S-180细胞悬液0.2ml，次日称重后随机分成5组，每组10只，雌雄各半。各组给药剂量及途径：阴性对照组给生理盐水(NS)，阳性对照组隔日给CTX20mg/kg,EGCG高、中、低剂量组分别给120、60、30mg/kg，灌胃给药，每天1次，连续给药7d。
, 百拇医药
给药结 束后次日处死小鼠，然后剥取瘤块并称重，计算其抑瘤率[8]。按同样方法重复试 验一次。结果：EGCG高、中剂量组平均瘤重低于阴性对照组(P<0.05)，但低剂量与阴 性对照组比较无显著差异；重复试验结果相同。提示对小鼠移植性S-180实体瘤有抑制作用 ，见表1。
2.2 对小鼠移植性Hep腹水瘤的影响：选取健康小鼠75只，体质量18～21 g，雌雄各半，每 鼠腹腔接种1∶3 Hep细胞悬液0.2 ml，次日根据性别、体质量随机分成5组，分组及给药方 法同实验1。给药结束后记录各组动物存活时间，计算生命延长率[8]。重复实验两 次。 结果：EGCG高剂量组的平均存活时间与阴性对照组比较有显著性差异(P<0.05)；重复 试验结果相同。表明EGCG有一定延长Hep腹水癌小鼠生命的作用，见表2。
2.3 对小鼠移植性肿瘤细胞体外存活的影响(台盼蓝染色法)：将EGCG用细胞培养液(RPMI 1640)按实验所需浓度逐管稀释为5个浓度，用细胞培养液将S-180和Hep瘤细胞制成细胞悬 液，空白对照用等量细胞培养液稀释。置37℃温育6 h，台盼蓝染色计数瘤细胞蓝染率，与 对照组比较，计算抑瘤率[9,10]。结果如表3所示，EGCG 5个浓度组的S-180和Hep 瘤细胞的蓝染率均明显高于空白对照组(P<0.01)，且呈剂量依赖性地递增，在对应浓 度组中，以Hep瘤细胞蓝染率高于S-180。对S-180和Hep的50%抑瘤浓度(IC50)分别为40 mg /L和20 mg/L。提示EGCG对S-180和Hep瘤细胞的体外存活有明显抑制作用。
, 百拇医药
2.4 对小鼠S-180和Hep瘤苗活性的影响：制备的S-180和Hep瘤细胞悬液浓度及EGCG浓度 比同实验3。将不含和含上述5个浓度比的EGCG瘤细胞悬液置37℃温育1.5 h，制成瘤苗。按 每鼠3×106个/0.1 ml瘤细胞的量，接种S-180瘤苗于小鼠右腋窝皮下，Hep瘤苗则接种 于小鼠腹腔，两瘤种各剂量组每组接种10只，观察其是否发病。按同样方法重复试验1次。 结果如表4，20至160 mg/L的EGCG可部分灭能S-180瘤苗，灭能作用随EGCG剂量增加而增强 ，10 mg/L的EGCG对S-180瘤苗无灭能作用，两实验结果相同；对于Hep瘤苗，第1次实验16 0 mg/L的EGCG组可完全灭能，第二次实验80 mg/L EGCG组也可完全灭能瘤苗，其余EGCG浓度 组仅能部分灭能瘤苗，灭能作用亦随剂量增加而增强。对照组两次实验均无灭能S-180和He p瘤苗作用。提示EGCG对S-180和Hep瘤苗活性有抑制作用。
2.5 对荷瘤小鼠免疫器官重量的影响：给药方式，EGCG剂量和给药时间同实验1，于接种S -180荷瘤小鼠停药24 h后称体质量和胸腺、脾脏的湿重，按文献[8]计算胸腺指数 和脾指数。结果：EGCG大、中剂量组的胸腺指数较阴性对照组明显增加(P<0.01或0.0 5)，低剂量组无显著差异；3个EGCG剂量组的脾脏指数与阴性对照组比较，无显著差异；CTX 组的胸腺和脾脏指数均低于阴性对照组(P<0.01)。提示：EGCG可增加S-180荷瘤小鼠 胸腺重量，见表5。
, 百拇医药
表1 EGCG对小鼠移植性S-180实体瘤的影响(
±s) 实验次数
组别
药量
(mg/kg)
动物数
(始/末)
瘤重
(m/g)
抑 瘤率
(%)
, http://www.100md.com
1
NS
/
10/10
1.24±0.51
CTX
20
10/10
0.70±0.26**
43.5
EGCG
80
10/10
, 百拇医药
0.76±0.30*
38.7
EGCG
40
10/10
0.85±0.39*
31.5
EGCG
20
10/10
0.94±0.29
24.2
, http://www.100md.com
2
NS
/
10/10
1.19±0.32
CTX
20
10/10
0.64±0.23**
46.2
EGCG
80
10/10
, http://www.100md.com
0.70±0.20**
41.2
EGCG
40
10/10
0.72±0.29**
39.5
EGCG
20
10/10
0.99±0.34
16.8
, http://www.100md.com
与阴性对照组比较，*P<0.05，**P<0.01表2、EGCG对小鼠移植性Hep腹水瘤影响(
±s) 实验次数
组别
药量
(mg/kg)
动物数
(n)
平均生存时间
(t/d )
生命延长
率(%)
, 百拇医药
1
NS
/
15
10.1±2.8
CTX
20
15
12.2±4.0
20.8
EGCG
80
15
, 百拇医药
14.0±3.5*
38.8
EGCG
40
15
12.2±3.5
20.8
EGCG
20
15
11.8±3.6
16.8
2
, 百拇医药
NS
/
15
9.7±2.5
CTX
20
15
11.9±3.7
22.7
EGCG
80
15
13.5±4.1*
, 百拇医药
39.2
EGCG
40
15
12.3±3.8
26.8
EGCG
20
15
11.6±2.7
19.5
与阴性对照组比较，*P<0.05表3 EGCG对小鼠移植性肿瘤细胞体外存活的影响 组别
, 百拇医药
药物浓度
(ρB/mg。L-1)
瘤细胞数
(个/ml)
S-180
Hep
蓝染率
(%)
抑瘤率
(%)
蓝染率
(%)
, 百拇医药
抑瘤率
(%)
对照
0
3×107
8.3
5.7
EGCG
160
3×107
76.8**
68.5
, 百拇医药
89.2**
83.5
EGCG
80
3×107
68.2**
59.9
85.3**
79.6
EGCG
40
3×107
, 百拇医药
62.5**
54.2
67.4**
61.7
EGCG
20
3×107
52.4**
44.1
58.6**
52.3
, 百拇医药 EGCG
10
3×107
28.6**
20.3
36.2**
30.5
与对照组比，**P<0.01表4 EGCG对小鼠S-180和Hep瘤苗活性的影响 实验
次数
组别
药物浓度
, http://www.100md.com
(ρB/mg。L-1)
瘤细胞数
(个/ml)
接种量
(个/0.1 ml)
动物数
(n)
S-180
Hep
接种后
发病数
, 百拇医药 灭 能
情况
接种后
发病数
灭能
情况
1
对照
0
3×107
3×106
10
10
, http://www.100md.com
未灭
10
未灭
EGCG
160
3×107
3×106
10
1
部分灭
0
完全灭
EGCG
, http://www.100md.com
80
3×107
3×106
10
2
部分灭
1
部分灭
EGCG
40
3×107
3×106
, 百拇医药
10
5
部分灭
3
部分灭
EGCG
20
3×107
3×106
10
6
部分灭
5
, 百拇医药
部分灭
EGCG
10
3×107
3×106
10
10
未灭
7
部分灭
2
对照
0
, http://www.100md.com
3×107
3×106
10
10
未 灭
10
未灭
EGCG
160
3×107
3×106
10
, 百拇医药
1
部分灭
0
完全灭
EGCG
80
3×107
3×106
10
3
部分灭
0
部分灭
, 百拇医药
EGCG
40
3×107
3×106
10
4
部分灭
2
部分灭
EGCG
20
3×107
, http://www.100md.com 3×106
10
8
部分灭
6
部分灭
EGCG
10
3×107
3×106
10
10
未灭
, http://www.100md.com
9
部分灭
表5 EGCG对荷瘤小鼠免疫器官重量的影响(
±s) 组别药物剂量
(mg/kg)
动物数
(n)
体质量
(m/g)
相对重量(mg/g体质量)
胸腺
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脾脏
NS
/
10
21.1±0.8
4.47±0.97
9.86±1.61
CTX
20
10
19.2±0.8
2.87±0.71**
, http://www.100md.com 7.65 ±1.52**
EGCG
80
10
20.9±0.8
6.03±0.46**
11.10 ±1.65
EGCG
40
10
20.7±0.8
5.30±0.62*
, http://www.100md.com
9.42±1.52
EGCG
20
10
20.9±0.9
5.11±0.23
9.74±1.02
与对照组比，*P<0.05，**P<0.01
3 讨 论
有报道，绿茶及其多酚化合物能阻断亚硝胺类和黄曲霉毒素B1等多种致癌物的化学致 癌 作用[3，4]，其主要成分儿茶素能抑制促癌剂引起的癌症正相关基因如C-fos，c -myc的基因表达[10]。绿茶多酚不仅可防癌，也有抗癌作用。茶多酚可抑制鼠MO4 细胞的侵袭性[12]，还可抑制小鼠荷瘤(S-180和EAC)的体内生长[5]以及 对多种动物及人肿瘤细胞的体外生长及存活起抑制作用[10，13] 。最近又有报道 ，绿茶水提物可诱导大肠癌LOVO细胞凋亡[7]，茶多酚则可诱导人胃癌细胞(MGC-8 03)凋亡[14]。由此可见，茶叶中的茶多酚是其抗肿瘤的主要活性成分，但茶多酚 是含有30多种化学成分的复合物，这些物质在参与抗肿瘤过程中所起的作用仍研究甚少。有 鉴于此，本研究进一步对抗氧化作用强的茶多酚单体成分之一的EGCG的抗肿瘤作用及其量效 关系进行了探讨。
, 百拇医药
研究表明，EGCG可抑制小鼠荷瘤生长，并有一定延长荷瘤小鼠生命的作用。在体外亦可 抑制小鼠荷瘤细胞的存活率和明显降低其瘤苗活性。这与上述文献报道的茶多酚的抗肿瘤作 用是一致的。
有资料说明，癌的各个发展阶段以及癌的治疗等多个方面都与自由基反应密切相关，尤 其与活性氧联系密切[15]。EGCG在表儿茶素类化合物中，具有很强的抗氧化能力， 能清除体内多种自由基形成系统产生的自由基和活性氧[1]。故推测其抗肿瘤作用 可能与其抗氧化性质有关，但其确切的作用机制有待进一步探索。
许多抗肿瘤化疗药物如CTX，在发挥抗肿瘤作用的同时，也抑制机体的免疫机能，使免 疫器官衰退。茶多酚与此不同，它可增加荷瘤小鼠免疫器官重量，提高机体免疫功能[ 6]，因此还有扶正作用。本研究所用EGCG亦有相似作用，其对免疫功能的具体作用正待 研究。了解EGCG的抗肿瘤作用无疑对儿茶素的开发和利用有重要意义。
, 百拇医药
广西区科技厅科学研究与技术开发课题 (桂科攻9817091)
参 考 文 献
1，梁 钢，黄志明，洪息君.儿茶素3种成分的抗氧化作用研究.广西医科大学学 报，1998，15(1)：17.
2，梁 钢，黄志明，洪息君.茶多酚抗衰老的动物实验研究.广西医学院学报，19 93，10(2)：139.
3，徐国平，宋圃菊.茶叶阻断胃癌高发区人体内源性亚硝基脯氨酸合成.北京医科 大学学报，1991，23(2)：51.
4，赵丽军，印
，徐冠雄，等.酚类化合物抑制大鼠肝癌启动机理的研究.卫生 毒理学杂志，1995，9(1)：1., http://www.100md.com
5，童 彤，程书钧，李秀琴，等.没食子酰表没食子对促癌物TPA抑制作用的研究 .癌变.畸变.突变，1992，4(1)：1.
6，曹明富，林植华，虞研原，等.茶多酚对细胞免疫功能的影响及抑瘤作用.现代 应用药学，1994，11(4)：4.
7，谭晓化，张亚历，周殿元，等.绿茶水提取物诱导体外培养的大肠癌LOVO细胞的 凋亡.癌症，1998，17(3)：171.
8，李仪奎主编，中药药理学实验方法.上海：上海科学技术出版社，1991.512.[ ZK)
9，遵义医学院肿瘤研究组病理生理小组.肿节风抗癌作用的初步实验研究-Ⅰ(肿 节风对L615细胞的直接破坏作用).遵义医学院学报，1978，(1)：30.
10，侯 敢，黄迪南，祝其锋.3种天然抗氧化剂对早幼粒白血病细胞(HL-60)的生 长抑制作用研究.湖南中医学院学报，1996，16(1)：49.
, http://www.100md.com
11，胡贵舟，韩 驰，陈君石.茶对促癌物(TPA)诱发小鼠皮肤癌基因表达的影响. 卫生研究，1995，24(4)：273.
12，Bracke ME,Castronovo V,Van Cauwenberge RM,et al.The antiinvasiveflav onoid (+) catechin binds to laminin and abrogates the feect of laminin on cell m orphology and adhesion.Exp Cell Res,1987，173:193.
13，范贤骏，王云霞，冯素瑜.绿茶儿茶素对体外培养细胞生长的影响.中华肿瘤 杂志，1992，14(3)：190.
14，赵 燕，曹 进.茶多酚诱导人胃癌细胞凋亡.湖南医科大学学报，1997，22( 5)：384.
15，郑荣梁.自由基与癌.见：方允中，李文杰主编.自由基与酶.北京：科学出版 社，1989.270.
收稿日期：1999-02-08, http://www.100md.com