基底细胞癌中p53，bcl-2及bax蛋白的表达
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37c医学网
作者：颜兰香 陈明亮① 余桂英
单位：第二附属医院皮肤科 长沙 410011 ①附属湘雅医院皮肤科
关键词：基底细胞癌；癌基因；凋亡；免疫组织化学
湖南医科大学学报990236 提 要 采用免疫组化法，检测了32例基底细胞癌中p53蛋白，bax蛋白和bcl-2蛋白的表达。结果显示：p53蛋白阳性表达13例(40.6%)，bcl-2蛋白阳性表达26例(81.2%)，bax蛋白阳性表达9例(28.1%)；bax和bcl-2蛋白两者表达呈负相关(r=-0.572,P<0.01)。提示基底细胞癌的发生、发展可能与细胞凋亡受抑制有关。
Expression of bcl-2, bax and p53 protein in the basal cell carcinomaYan Langxiang Chen Minglong Yu Guiying
, http://www.100md.com
(Department of Dermatology, The Second Affiliated Hospital, Hunan Medical University, Changsha 410011)
The expression of bcl-2, bax and p53 protein was studied in the basal cell carcinoma with 32 patients by immunohistochemical method. The results showed that bcl-2 protein was positive in 26 patients(81.2%), bax protein was positive in 9 patients(28.1%), and p53 protein was positive in 13 patients(40.6%); there is a negative correlation between the expression of bcl-2 and bax protein(P<0.05). These findings suggest that apoptosis is suppressed which might cause the production of basal cell carcinoma.
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Key words basal cell carcinoma; oncogene; apoptosis; immunohistochemistry
细胞凋亡是受基因调控的细胞自我消亡的过程，是机体维持自身稳定状态的重要机理之一。据报道一些基因与细胞凋亡调节密切相关，原癌基因bcl-2及其所编码的蛋白能抑制细胞凋亡，p53基因发生突变后所表达的蛋白亦有抑制细胞凋亡作用，而bcl-2家族中的另一成员bax蛋白促进细胞凋亡[2]。细胞凋亡调节紊乱与某些肿瘤发生与发展的关系已引起人们的关注，本研究采用免疫组化的方法，检测了基底细胞癌中bcl-2蛋白，p53蛋白及bax蛋白的表达，旨在探讨细胞凋亡与基底细胞癌发生、发展的关系。
1 材料和方法
1.1 材料 (1)标本 收集了本院和湘雅医院皮肤科1989年～1996年间保存的石蜡包埋组织块，经临床和组织病理学确诊为基底细胞癌，其中实体型21例，囊肿型4例，色素型4例，角化型2例，硬化型1例；男16例，女16例；年龄45～82(平均61)岁；病程1～26(平均5.5)年。(2)主要试剂 鼠抗人bcl-2，p53癌基因蛋白单克隆抗体，兔抗人bax癌基因蛋白抗体均购自Sigma公司，工作浓度均为(1/100)，生物素标记羊抗鼠IgG(1/300)，生物素标记羊抗兔IgG(1/300)和ABC试剂(1/500)均购自Sigma公司，DAB-HCl为瑞士进口分装。
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1.2 染色方法及结果判断 bcl-2, p53, bax癌基因蛋白染色方法均为常规ABC免疫组化方法。细胞浆和(或)细胞核出现淡棕黄色至深棕黄色颗粒者为阳性细胞。每张切片中bcl-2， p53, bax癌基因蛋白阳性细胞率≥10%～25%为弱阳性病例即“+”，阳性细胞率为25%～50%为中强度阳性病例即“++”，阳性细胞>50%为强阳性病例即“+++”，阳性细胞率<10%为阴性病例即“-”。经多次替代对照或阳性对照有效的p53,bcl-2和bax蛋白阳性的胰腺癌组织作为每次染色的阳性对照，以0.01M PBS液(pH7.4)替代一抗、二抗和ABC试剂作为每次染色的替代或阴性对照。
1.3 统计学处理 bcl-2, bax两蛋白在基底细胞癌中表达关系采用等级相关分析。
2 结果
2.1 p53,bcl-2,bax蛋白表达特征 p53蛋白阳性物质定位于胞核，偶见胞浆着色；bcl-2，bax蛋白阳性物质定位于胞浆，胞核无着色；三者阳性细胞率在癌组织中分布呈明显异质性。阳性对照的胰腺癌切片组织中p53,bcl-2,bax表达均阳性，替代或阴性对照的切片组织p53,bcl-2,bax蛋白表达均阴性。在32例基底细胞癌中，bcl-2蛋白表达阳性26例(81.2%)，其中强阳性6例，中度阳性8例，弱阳性12例；p53蛋白表达阳性13例(40.6%)，其中强阳性4例，中度阳性4例，弱阳性5例；bax蛋白表达阳性9例(28.1%)，其中强阳性2例，中度阳性2例，弱阳性5例。
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2.2 bcl-2和bax蛋白两者表达关系 26例bcl-2阳性病例中bax阳性3例，6例bcl-2阴性病例中bax均为阳性，两蛋白表达呈负相关(r=-0.572,P<0.01)。
3 讨论
bcl-2原癌基因于1985年在人类滤泡性B淋巴瘤的染色体上易位t(14;18)被发现，是抑制细胞凋亡的主要基因[1]。bcl-2基因所编码的bcl-2蛋白是一种膜结合蛋白，定位于线粒体膜、核膜、内质网上，在细胞的激活和发育过程中表达，在成熟或走向凋亡的细胞中不表达，复层鳞状上皮中仅在基底细胞中表达，在其余的角朊细胞中不表达[2，3]。bax蛋白与bcl-2蛋白作用相反，促进细胞凋亡。有研究表明[3]，bcl-2蛋白与bax蛋白两者的平衡调节着细胞的存亡。当bcl-2蛋白占优势时，所有的bax蛋白被结合而剩余的bcl-2蛋白发挥凋亡抑制作用，细胞存活；反之，bax多于bcl-2时，bax蛋白便介导细胞死亡。本研究32例基底细胞癌组织中有26例(81.2%)bcl-2蛋白表达阳性，这一结果与国外有关研究一致[4，6]。9例bax蛋白(28.1%)表达阳性。bcl-2与bax蛋白表达呈负相关，bcl-2蛋白高表达，bax蛋白低表达提示了基底细胞癌中细胞凋亡受到抑制；因而推测基底细胞癌的发生可能与细胞凋亡受到抑制，细胞大量存活及生存时间延长，细胞数目增多、聚积有关。
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野生型p53是一种具有抑癌功能的核酸蛋白，为位于17号染色体上的p53抑瘤基因所编码，能激活或抑制某些基因的转录，当DNA受到损伤时，野生型p53蛋白诱导细胞进入G1期，抑制细胞增殖，直到修复损伤的DNA；不能得到及时修复的损伤细胞，在p53介导下进入细胞凋亡途径[7]。野生型p53蛋白半衰期短，一般用免疫组化方法检测不到，而突变型p53蛋白半衰期较长，常在细胞核内聚积，因此，用免疫组化方法检测到的p53蛋白为突变型p53。本研究检测了32例基底细胞癌中p53的表达，其 中有13例出现阳性表达，由此可认为基底细胞癌中存在着突变型p53蛋白，这一结果 与Rady P[5]所研究的结果相似。基底细胞癌是起源于表皮角朊细胞的恶性肿瘤，肿块主要发生在体表的暴露部位，紫外线过量地照射，导致皮肤的角朊细胞的DNA损伤，而突变的p53蛋白不能修复损伤的DNA，丧失了抑癌功能，同时参与了抑制细胞凋亡过程。故推测p53基因的突变也与基底细胞癌的发生、发展有关。
综上所述，基底细胞癌组织中bcl-2蛋白高表达，bax蛋白低表达，突变型p53蛋白的存在，提示了细胞凋亡受抑制，细胞凋亡受抑制可能与基底细胞癌的发生密切相关。
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本研究检测bcl-2，bax,p53蛋白免疫组化技术承蒙本院胆道研究室杨竹林副研究员指导，特此致谢
中国图书分类号 R73.261
参考文献
[1]Jsujimoto Y, Cossman J, Jaffe E, et al. Involvement of the bcl-2 gene in human follicular lymphoma. Science, 1985,228:1440-1443
[2]Williams GT. Programmed cell death: apoptosis and oncognenesis. Cell, 1991,65:1097-1098
[3]Lu QL, Poulsom R, Wong L, et al. Bel-1 expression in adult and embryonic non-haematopoetic tissues. J Pathol, 1993,169:431-437
, 百拇医药
[4]Verhageh ME, Sanders CJ, Arends JW. Expression of the apoptosis suppressing protein bcl-2 in non-melanoma skin cancer. Br J Dermatol, 1995,132:740-744
[5]Rady P, Scinicariello F, Wagner RF. p53 mutations in basal cell carcinomas. Cancer Res, 1992,52:3804-3806
[6]Norbert MW, Rob JW, Christian WH, et al. bcl-2 vs p53 protein expression and apoptotic rate in human nonmelanoma skin cancers. Arch Dermatol, 1997,135:599-602
[7]Gottlied TM, Oren M. p53 in growth cantrol and neoplasia. Biochim Biophys Acta, 1996,1287:77-79
收稿日期：1998-12-29, 百拇医药(颜兰香 陈明亮① 余桂英)
单位：第二附属医院皮肤科 长沙 410011 ①附属湘雅医院皮肤科
关键词：基底细胞癌；癌基因；凋亡；免疫组织化学
湖南医科大学学报990236 提 要 采用免疫组化法，检测了32例基底细胞癌中p53蛋白，bax蛋白和bcl-2蛋白的表达。结果显示：p53蛋白阳性表达13例(40.6%)，bcl-2蛋白阳性表达26例(81.2%)，bax蛋白阳性表达9例(28.1%)；bax和bcl-2蛋白两者表达呈负相关(r=-0.572,P<0.01)。提示基底细胞癌的发生、发展可能与细胞凋亡受抑制有关。
Expression of bcl-2, bax and p53 protein in the basal cell carcinomaYan Langxiang Chen Minglong Yu Guiying
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(Department of Dermatology, The Second Affiliated Hospital, Hunan Medical University, Changsha 410011)
The expression of bcl-2, bax and p53 protein was studied in the basal cell carcinoma with 32 patients by immunohistochemical method. The results showed that bcl-2 protein was positive in 26 patients(81.2%), bax protein was positive in 9 patients(28.1%), and p53 protein was positive in 13 patients(40.6%); there is a negative correlation between the expression of bcl-2 and bax protein(P<0.05). These findings suggest that apoptosis is suppressed which might cause the production of basal cell carcinoma.
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Key words basal cell carcinoma; oncogene; apoptosis; immunohistochemistry
细胞凋亡是受基因调控的细胞自我消亡的过程，是机体维持自身稳定状态的重要机理之一。据报道一些基因与细胞凋亡调节密切相关，原癌基因bcl-2及其所编码的蛋白能抑制细胞凋亡，p53基因发生突变后所表达的蛋白亦有抑制细胞凋亡作用，而bcl-2家族中的另一成员bax蛋白促进细胞凋亡[2]。细胞凋亡调节紊乱与某些肿瘤发生与发展的关系已引起人们的关注，本研究采用免疫组化的方法，检测了基底细胞癌中bcl-2蛋白，p53蛋白及bax蛋白的表达，旨在探讨细胞凋亡与基底细胞癌发生、发展的关系。
1 材料和方法
1.1 材料 (1)标本 收集了本院和湘雅医院皮肤科1989年～1996年间保存的石蜡包埋组织块，经临床和组织病理学确诊为基底细胞癌，其中实体型21例，囊肿型4例，色素型4例，角化型2例，硬化型1例；男16例，女16例；年龄45～82(平均61)岁；病程1～26(平均5.5)年。(2)主要试剂 鼠抗人bcl-2，p53癌基因蛋白单克隆抗体，兔抗人bax癌基因蛋白抗体均购自Sigma公司，工作浓度均为(1/100)，生物素标记羊抗鼠IgG(1/300)，生物素标记羊抗兔IgG(1/300)和ABC试剂(1/500)均购自Sigma公司，DAB-HCl为瑞士进口分装。
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1.2 染色方法及结果判断 bcl-2, p53, bax癌基因蛋白染色方法均为常规ABC免疫组化方法。细胞浆和(或)细胞核出现淡棕黄色至深棕黄色颗粒者为阳性细胞。每张切片中bcl-2， p53, bax癌基因蛋白阳性细胞率≥10%～25%为弱阳性病例即“+”，阳性细胞率为25%～50%为中强度阳性病例即“++”，阳性细胞>50%为强阳性病例即“+++”，阳性细胞率<10%为阴性病例即“-”。经多次替代对照或阳性对照有效的p53,bcl-2和bax蛋白阳性的胰腺癌组织作为每次染色的阳性对照，以0.01M PBS液(pH7.4)替代一抗、二抗和ABC试剂作为每次染色的替代或阴性对照。
1.3 统计学处理 bcl-2, bax两蛋白在基底细胞癌中表达关系采用等级相关分析。
2 结果
2.1 p53,bcl-2,bax蛋白表达特征 p53蛋白阳性物质定位于胞核，偶见胞浆着色；bcl-2，bax蛋白阳性物质定位于胞浆，胞核无着色；三者阳性细胞率在癌组织中分布呈明显异质性。阳性对照的胰腺癌切片组织中p53,bcl-2,bax表达均阳性，替代或阴性对照的切片组织p53,bcl-2,bax蛋白表达均阴性。在32例基底细胞癌中，bcl-2蛋白表达阳性26例(81.2%)，其中强阳性6例，中度阳性8例，弱阳性12例；p53蛋白表达阳性13例(40.6%)，其中强阳性4例，中度阳性4例，弱阳性5例；bax蛋白表达阳性9例(28.1%)，其中强阳性2例，中度阳性2例，弱阳性5例。
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2.2 bcl-2和bax蛋白两者表达关系 26例bcl-2阳性病例中bax阳性3例，6例bcl-2阴性病例中bax均为阳性，两蛋白表达呈负相关(r=-0.572,P<0.01)。
3 讨论
bcl-2原癌基因于1985年在人类滤泡性B淋巴瘤的染色体上易位t(14;18)被发现，是抑制细胞凋亡的主要基因[1]。bcl-2基因所编码的bcl-2蛋白是一种膜结合蛋白，定位于线粒体膜、核膜、内质网上，在细胞的激活和发育过程中表达，在成熟或走向凋亡的细胞中不表达，复层鳞状上皮中仅在基底细胞中表达，在其余的角朊细胞中不表达[2，3]。bax蛋白与bcl-2蛋白作用相反，促进细胞凋亡。有研究表明[3]，bcl-2蛋白与bax蛋白两者的平衡调节着细胞的存亡。当bcl-2蛋白占优势时，所有的bax蛋白被结合而剩余的bcl-2蛋白发挥凋亡抑制作用，细胞存活；反之，bax多于bcl-2时，bax蛋白便介导细胞死亡。本研究32例基底细胞癌组织中有26例(81.2%)bcl-2蛋白表达阳性，这一结果与国外有关研究一致[4，6]。9例bax蛋白(28.1%)表达阳性。bcl-2与bax蛋白表达呈负相关，bcl-2蛋白高表达，bax蛋白低表达提示了基底细胞癌中细胞凋亡受到抑制；因而推测基底细胞癌的发生可能与细胞凋亡受到抑制，细胞大量存活及生存时间延长，细胞数目增多、聚积有关。
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野生型p53是一种具有抑癌功能的核酸蛋白，为位于17号染色体上的p53抑瘤基因所编码，能激活或抑制某些基因的转录，当DNA受到损伤时，野生型p53蛋白诱导细胞进入G1期，抑制细胞增殖，直到修复损伤的DNA；不能得到及时修复的损伤细胞，在p53介导下进入细胞凋亡途径[7]。野生型p53蛋白半衰期短，一般用免疫组化方法检测不到，而突变型p53蛋白半衰期较长，常在细胞核内聚积，因此，用免疫组化方法检测到的p53蛋白为突变型p53。本研究检测了32例基底细胞癌中p53的表达，其 中有13例出现阳性表达，由此可认为基底细胞癌中存在着突变型p53蛋白，这一结果 与Rady P[5]所研究的结果相似。基底细胞癌是起源于表皮角朊细胞的恶性肿瘤，肿块主要发生在体表的暴露部位，紫外线过量地照射，导致皮肤的角朊细胞的DNA损伤，而突变的p53蛋白不能修复损伤的DNA，丧失了抑癌功能，同时参与了抑制细胞凋亡过程。故推测p53基因的突变也与基底细胞癌的发生、发展有关。
综上所述，基底细胞癌组织中bcl-2蛋白高表达，bax蛋白低表达，突变型p53蛋白的存在，提示了细胞凋亡受抑制，细胞凋亡受抑制可能与基底细胞癌的发生密切相关。
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本研究检测bcl-2，bax,p53蛋白免疫组化技术承蒙本院胆道研究室杨竹林副研究员指导，特此致谢
中国图书分类号 R73.261
参考文献
[1]Jsujimoto Y, Cossman J, Jaffe E, et al. Involvement of the bcl-2 gene in human follicular lymphoma. Science, 1985,228:1440-1443
[2]Williams GT. Programmed cell death: apoptosis and oncognenesis. Cell, 1991,65:1097-1098
[3]Lu QL, Poulsom R, Wong L, et al. Bel-1 expression in adult and embryonic non-haematopoetic tissues. J Pathol, 1993,169:431-437
, 百拇医药
[4]Verhageh ME, Sanders CJ, Arends JW. Expression of the apoptosis suppressing protein bcl-2 in non-melanoma skin cancer. Br J Dermatol, 1995,132:740-744
[5]Rady P, Scinicariello F, Wagner RF. p53 mutations in basal cell carcinomas. Cancer Res, 1992,52:3804-3806
[6]Norbert MW, Rob JW, Christian WH, et al. bcl-2 vs p53 protein expression and apoptotic rate in human nonmelanoma skin cancers. Arch Dermatol, 1997,135:599-602
[7]Gottlied TM, Oren M. p53 in growth cantrol and neoplasia. Biochim Biophys Acta, 1996,1287:77-79
收稿日期：1998-12-29, 百拇医药(颜兰香 陈明亮① 余桂英)