瑞巴匹特对胃粘膜保护作用的实验研究
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37c医学网
作者：李兆申 湛先保 宛新建 魏绍华 许国铭 朱锡英△ 姚 远△
单位：
关键词：瑞巴匹特；胃粘膜血流量；胃损伤
第三军医大学学报ACTA ACADEMIAE MEDICINAE MILITARIS TERTIAE1999年 第21卷 第1期 VOL 提 要：目的检测正常乳腺组织、乳腺囊性病不典型增生组织和乳腺癌组织中转铁蛋白受体(TrfR)的表达。方法：采用免疫组织化学研究方法。结果：正常乳腺组织无TrfR表达，乳腺囊性病不典型增生Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级，乳腺癌组织分化Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级TrfR表达阳性率分别为8.3%、23.1%、30.0%、35.7%、66.7%和78.6%。乳腺癌不同组织学类型中TrfR表达无显著差异，但分化程度Ⅰ级与Ⅲ级相差显著。随着乳腺囊性病不典型增生程度加重TrfR阳性率增加，提示随着乳腺囊性病不典型增生程度的加重其细胞代谢增强、细胞增殖加剧。结论：通过对TrfR的检测可望为临床监测乳腺癌前病变提供新的手段。
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中图法分类号：R737.9
Significance of expression of transferrin receptor in tissue of atypical hyperplasia of the mammary gland and breast cancer
Liao Kelong, Guo Zhongqi
(Department of Cardiothoracic Surgery, Southwest Hospital, Third Military Medical University, Chongqing, 400038)
Abstract Objective: To explore the significance of expression of transferrin receptor (TrfR) in tissue of atypical hyperplasia of the mammary gland and breast cancer. Methods: ABC immunohistochemistry was used. Results: ①The positive rates of the expression of TrfR in the tissue of cystic hyperplasia of the mammary gland with atypical hyperplasia grades Ⅰ, Ⅱ and Ⅲ and breast cancer with histological differentiation grades Ⅰ, Ⅱ and Ⅲ were 8.3%, 23.1%, 30.0%, 35.7%, 66.7% and 78.6% respectively. ②In tissue of breast cancer, the positive rates of TrfR expression were not related to the types of histological classification of the tumor. However, they were significantly correlated to the differentiation grades of the tumor. Conclusion: TrfR expression is an important index of reference to clinical surveillance of the precancerous lesions of the mammary gland.
, 百拇医药
Key words mammary gland; breast cancer; transferrin receptor; immunohistochemistry
转铁蛋白受体(Transferrin receptor，TrfR)是细胞膜上的一种糖蛋白，被认为是转化增殖细胞和肿瘤细胞表面的特殊标志，在肿瘤发生中有重要作用[1]。本研究通过检测TrfR在乳腺囊性病不典型增生及乳腺癌中的表达，旨在探讨TrfR在乳腺囊性病不典型增生癌变过程中的意义。
1 材料与方法
1.1 材料来源
标本取自我校新桥医院和西南医院手术切除的女性乳腺标本。其中正常乳腺组织10例，取自乳腺纤维腺瘤旁正常组织。乳腺囊性增生35例，乳腺癌40例。年龄：正常乳腺组：20～34岁，平均27.4岁；乳腺囊性增生组：24～47岁，平均37.3岁；乳癌组：26～70岁，平均46.4岁。各组标本诊断均经病理检查证实。
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1.2 组织学观察方法
标本分两部分，一部分经10%福尔马林固定，常规石蜡包埋切片HE染色、光镜下观察，按标准进行病理组织学诊断、分级并分类。另一部分保存于液氮中留作免疫组化检测。
1.3 乳腺囊性病不典型增生程度分级与乳腺癌的组织学类型、分化程度评定标准
根据Page[2]的分级标准，将乳腺导管或腺泡上皮细胞增生程度分为三级，其中Ⅰ级为一般性增生，Ⅱ、Ⅲ级为不典型增生。乳腺癌的组织学类型和分化程度根据文献中规定的标准进行评定[3]。
1.4 TrfR免疫组化检测染色方法及阳性判断标准
采用ABC法进行检测。液氮保存的乳腺癌、囊性病不典型增生及正常乳腺标本经冰冻切片，丙酮固定，滴加马血清以封闭非特异性抗体。加入第一抗体(TrfR单克隆抗体购自中国医学科学院血液研究所，ABC试剂盒购自北京中山生物技术有限公司)，37℃湿盒内孵育2h，加入第二抗体，37℃湿盒内孵育1h，加入ABC复合物，37℃湿盒内孵育30 min。以上各步间均经PBS液洗3次，每次5min。加入DAB染色2min，PBS洗液中止显色。经苏木精复染，切片经脱水、透明、封片后光镜下观察。用PBS替代第一抗体作为阴性对照。阳性标准：光镜下细胞膜、细胞浆或细胞核呈黄色至棕色染色为阳性，细胞膜、细胞浆无色而细胞核蓝染为阴性。
, 百拇医药
1.5 统计方法
各组间差异用χ2检验。
2 结果
2.1 组织学观察
正常乳腺组织10例，乳腺囊性病不典型增生Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级各12、13、10例，乳腺癌组织分化程度Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级分别为14、12、14例，乳腺癌组织学分类：单纯癌12例、髓样癌8例、浸润性导管癌13例、硬癌7例。
2.2 免疫组化检测
正常乳腺组织为阴性。乳腺囊性病不典型增生Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级中TrfR阳性率结果分别为8.3%、23.1%、30.0%，不典型增生Ⅰ级多为弱阳性染色；不典型增生Ⅱ、Ⅲ级多为强阳性染色。乳腺癌阳性率为62.5%，并多呈强阳性染色。随恶性程度增高TrfR阳性病例增多，Ⅰ级与Ⅲ级比较相差显著(P<0.05)，见表1。不同组织学类型的乳腺癌TrfR阳性率差别不明显，见表2。典型的阳性细胞着色颗粒位于细胞膜上和细胞浆内，偶尔可在细胞核内见到染色颗粒，见图1、2。
, 百拇医药
图1 乳腺囊性增生病不典型增生Ⅲ级，乳腺导管TrfR表达阳性 (ABC×100)
Fig 1 Positive expression of transferrin receptor in the ductal epithelia of breast in cystic
hyperplasia of breast with atypical hyperplasia Ⅲ (ABC×100)
图2 乳腺浸润性导管癌，癌细胞TrfR表达阳性 (ABC×100)
Fig 2 Positive expression of transferrin receptor in the cancer cell of infiltrating
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ductal carcinoma of breast (ABC×100)
表1 不同乳腺组织TrfR检测结果
Tab 1 Expression of the TrfR in different breast tissues Group
n
No. positive
%
Normal breast
10
0
0.0
, 百拇医药
Atypical hyperplasia grade Ⅰ
12
1
8.3
Atypical hyperplasia grade Ⅱ
13
3
23.1
Atypical hyperplasia grade Ⅲ
10
3
30.0
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Breast cancer grade Ⅰ
14
5
35.7
Breast cancer grade Ⅱ
12
8
66.7
Breast cancer grade Ⅲ
14
12
85.6
, 百拇医药
表2 不同组织学类型乳腺癌组织中TrfR的检测结果
Tab 2 Expression of the TrfR in different histological
classification of breast cancer Histological classification
n
No. positive
%
Simple carcinoma
12
8
66.7
, 百拇医药
Medullary carcinoma
8
5
62.5
Infiltrating ductial carcinoma
13
8
61.5
Scirrhous carcinoma
7
4
57.1
, 百拇医药
3 讨论
TrfR是细胞膜表面上的一种糖蛋白，其基因被定位在第3对染色体上[4]。TrfR的功能为介导转铁蛋白将铁离子转移入细胞内。在细胞的增殖过程中，铁离子的需要量增加，细胞表面的TrfR也相应增多。生长迅速的正常细胞、转化增殖细胞及肿瘤细胞表面的TrfR含量高，而分化终末期细胞的TrfR含量却很低。已有的研究表明，前列腺癌组织的TrfR含量较前列腺增生组织高10～30倍[5]，肺癌TrfR含量与它们的分化程度密切相关，分化低者TrfR含量高，分化高者TrfR含量低[6，7]。
目前对不同乳腺组织中TrfR含量的研究不多，对被认为是癌前病变的乳腺囊性病不典型增生组织中的TrfR的研究尚未见报到。从本组材料观测发现正常乳腺组织中无TrfR存在，免疫组化染色呈阴性。在乳腺囊性病不典型增生Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级中TrfR的阳性率分别为8.3%、23.1%、30.0%。说明在乳腺囊性病不典型增生期细胞代谢增强，铁离子的需要量增加，随不典型增生程度加重阳性率逐渐增高，表明乳腺上皮细胞增生程度加剧。通过对乳腺囊性病不典型增生细胞的TrfR进行检测，对判断乳腺细胞增生程度有指导意义。随着不典型增生程度加重，TrfR阳性率升高，也提示了该病变的癌变机率随之增加。因而通过对乳腺囊性病不典型增生细胞TrfR的检测可能为临床监测其癌变提供新的参考手段。
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本组检测乳腺癌标本中TrfR阳性率达62.5%。不同组织学类型间TrfR阳性率差别不显著，但随组织学分化程度分级增高其TrfR有增高的趋势，其中Ⅰ级与Ⅱ级比较相差显著。表明随着乳腺癌恶性程度的增高，其细胞的代谢及增殖活跃。理论上TrfR应分布在细胞膜上，本组材料观测发现部分细胞浆内TrfR也呈现阳性，可能是为满足细胞增生需要而在粗面内质网内新合成了TrfR，所以细胞浆内出现TrfR可能从另一方面反映了肿瘤细胞的增殖状态。少数细胞核内出现TrfR的原因尚待进一步研究。
作者简介：廖克龙，男，34岁，讲师，主治医师，硕士
参考文献
[1] Prior R, Fillet G, Gautan S, et al. Transferrin receptor expression in tumor of the human nervous system: relation to tumor type,grading and tumor growth fraction. Virchows Arch A, 1990,416(3):491
, 百拇医药
[2] Page D L. Cancer risk assesment in benign breast biopsies. Human Pathol,1986,17(5):871
[3] 李树玲.乳腺癌.中华人民共和国卫生部医政司编.中国常见恶性肿瘤诊治规范(第八分册).北京：北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，1991.25～29
[4] Newman R, Vernon K, Habil M, et al. The transferrin receptor. Trends Biochem Sci,1982,7(8):397
[5] Shionoya K. The study of relationship between proliferative activity and expressed transferrin receptor content in cancer cells. Kokubyo Gakkai Zasshi,1994,61(4):580
, 百拇医药
[6] Whitney J F, Clark J M, Griffin T W, et al. Transferrin receptor expression in nonsmall cell lung cancer. Histopathologic and clinical correlates. Cancer,1995,176(1):20
[7] Dowlati A, Loo M, Bury T, et al. Soluble and cell-associated transferrin receptor in lung cancer. Br J Cancer,1997,75(12):1802
收稿：1998-01-13；修回：1998-10-27, 百拇医药
单位：
关键词：瑞巴匹特；胃粘膜血流量；胃损伤
第三军医大学学报ACTA ACADEMIAE MEDICINAE MILITARIS TERTIAE1999年 第21卷 第1期 VOL 提 要：目的检测正常乳腺组织、乳腺囊性病不典型增生组织和乳腺癌组织中转铁蛋白受体(TrfR)的表达。方法：采用免疫组织化学研究方法。结果：正常乳腺组织无TrfR表达，乳腺囊性病不典型增生Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级，乳腺癌组织分化Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级TrfR表达阳性率分别为8.3%、23.1%、30.0%、35.7%、66.7%和78.6%。乳腺癌不同组织学类型中TrfR表达无显著差异，但分化程度Ⅰ级与Ⅲ级相差显著。随着乳腺囊性病不典型增生程度加重TrfR阳性率增加，提示随着乳腺囊性病不典型增生程度的加重其细胞代谢增强、细胞增殖加剧。结论：通过对TrfR的检测可望为临床监测乳腺癌前病变提供新的手段。
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中图法分类号：R737.9
Significance of expression of transferrin receptor in tissue of atypical hyperplasia of the mammary gland and breast cancer
Liao Kelong, Guo Zhongqi
(Department of Cardiothoracic Surgery, Southwest Hospital, Third Military Medical University, Chongqing, 400038)
Abstract Objective: To explore the significance of expression of transferrin receptor (TrfR) in tissue of atypical hyperplasia of the mammary gland and breast cancer. Methods: ABC immunohistochemistry was used. Results: ①The positive rates of the expression of TrfR in the tissue of cystic hyperplasia of the mammary gland with atypical hyperplasia grades Ⅰ, Ⅱ and Ⅲ and breast cancer with histological differentiation grades Ⅰ, Ⅱ and Ⅲ were 8.3%, 23.1%, 30.0%, 35.7%, 66.7% and 78.6% respectively. ②In tissue of breast cancer, the positive rates of TrfR expression were not related to the types of histological classification of the tumor. However, they were significantly correlated to the differentiation grades of the tumor. Conclusion: TrfR expression is an important index of reference to clinical surveillance of the precancerous lesions of the mammary gland.
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Key words mammary gland; breast cancer; transferrin receptor; immunohistochemistry
转铁蛋白受体(Transferrin receptor，TrfR)是细胞膜上的一种糖蛋白，被认为是转化增殖细胞和肿瘤细胞表面的特殊标志，在肿瘤发生中有重要作用[1]。本研究通过检测TrfR在乳腺囊性病不典型增生及乳腺癌中的表达，旨在探讨TrfR在乳腺囊性病不典型增生癌变过程中的意义。
1 材料与方法
1.1 材料来源
标本取自我校新桥医院和西南医院手术切除的女性乳腺标本。其中正常乳腺组织10例，取自乳腺纤维腺瘤旁正常组织。乳腺囊性增生35例，乳腺癌40例。年龄：正常乳腺组：20～34岁，平均27.4岁；乳腺囊性增生组：24～47岁，平均37.3岁；乳癌组：26～70岁，平均46.4岁。各组标本诊断均经病理检查证实。
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1.2 组织学观察方法
标本分两部分，一部分经10%福尔马林固定，常规石蜡包埋切片HE染色、光镜下观察，按标准进行病理组织学诊断、分级并分类。另一部分保存于液氮中留作免疫组化检测。
1.3 乳腺囊性病不典型增生程度分级与乳腺癌的组织学类型、分化程度评定标准
根据Page[2]的分级标准，将乳腺导管或腺泡上皮细胞增生程度分为三级，其中Ⅰ级为一般性增生，Ⅱ、Ⅲ级为不典型增生。乳腺癌的组织学类型和分化程度根据文献中规定的标准进行评定[3]。
1.4 TrfR免疫组化检测染色方法及阳性判断标准
采用ABC法进行检测。液氮保存的乳腺癌、囊性病不典型增生及正常乳腺标本经冰冻切片，丙酮固定，滴加马血清以封闭非特异性抗体。加入第一抗体(TrfR单克隆抗体购自中国医学科学院血液研究所，ABC试剂盒购自北京中山生物技术有限公司)，37℃湿盒内孵育2h，加入第二抗体，37℃湿盒内孵育1h，加入ABC复合物，37℃湿盒内孵育30 min。以上各步间均经PBS液洗3次，每次5min。加入DAB染色2min，PBS洗液中止显色。经苏木精复染，切片经脱水、透明、封片后光镜下观察。用PBS替代第一抗体作为阴性对照。阳性标准：光镜下细胞膜、细胞浆或细胞核呈黄色至棕色染色为阳性，细胞膜、细胞浆无色而细胞核蓝染为阴性。
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1.5 统计方法
各组间差异用χ2检验。
2 结果
2.1 组织学观察
正常乳腺组织10例，乳腺囊性病不典型增生Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级各12、13、10例，乳腺癌组织分化程度Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级分别为14、12、14例，乳腺癌组织学分类：单纯癌12例、髓样癌8例、浸润性导管癌13例、硬癌7例。
2.2 免疫组化检测
正常乳腺组织为阴性。乳腺囊性病不典型增生Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级中TrfR阳性率结果分别为8.3%、23.1%、30.0%，不典型增生Ⅰ级多为弱阳性染色；不典型增生Ⅱ、Ⅲ级多为强阳性染色。乳腺癌阳性率为62.5%，并多呈强阳性染色。随恶性程度增高TrfR阳性病例增多，Ⅰ级与Ⅲ级比较相差显著(P<0.05)，见表1。不同组织学类型的乳腺癌TrfR阳性率差别不明显，见表2。典型的阳性细胞着色颗粒位于细胞膜上和细胞浆内，偶尔可在细胞核内见到染色颗粒，见图1、2。
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图1 乳腺囊性增生病不典型增生Ⅲ级，乳腺导管TrfR表达阳性 (ABC×100)
Fig 1 Positive expression of transferrin receptor in the ductal epithelia of breast in cystic
hyperplasia of breast with atypical hyperplasia Ⅲ (ABC×100)
图2 乳腺浸润性导管癌，癌细胞TrfR表达阳性 (ABC×100)
Fig 2 Positive expression of transferrin receptor in the cancer cell of infiltrating
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ductal carcinoma of breast (ABC×100)
表1 不同乳腺组织TrfR检测结果
Tab 1 Expression of the TrfR in different breast tissues Group
n
No. positive
%
Normal breast
10
0
0.0
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Atypical hyperplasia grade Ⅰ
12
1
8.3
Atypical hyperplasia grade Ⅱ
13
3
23.1
Atypical hyperplasia grade Ⅲ
10
3
30.0
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Breast cancer grade Ⅰ
14
5
35.7
Breast cancer grade Ⅱ
12
8
66.7
Breast cancer grade Ⅲ
14
12
85.6
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表2 不同组织学类型乳腺癌组织中TrfR的检测结果
Tab 2 Expression of the TrfR in different histological
classification of breast cancer Histological classification
n
No. positive
%
Simple carcinoma
12
8
66.7
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Medullary carcinoma
8
5
62.5
Infiltrating ductial carcinoma
13
8
61.5
Scirrhous carcinoma
7
4
57.1
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3 讨论
TrfR是细胞膜表面上的一种糖蛋白，其基因被定位在第3对染色体上[4]。TrfR的功能为介导转铁蛋白将铁离子转移入细胞内。在细胞的增殖过程中，铁离子的需要量增加，细胞表面的TrfR也相应增多。生长迅速的正常细胞、转化增殖细胞及肿瘤细胞表面的TrfR含量高，而分化终末期细胞的TrfR含量却很低。已有的研究表明，前列腺癌组织的TrfR含量较前列腺增生组织高10～30倍[5]，肺癌TrfR含量与它们的分化程度密切相关，分化低者TrfR含量高，分化高者TrfR含量低[6，7]。
目前对不同乳腺组织中TrfR含量的研究不多，对被认为是癌前病变的乳腺囊性病不典型增生组织中的TrfR的研究尚未见报到。从本组材料观测发现正常乳腺组织中无TrfR存在，免疫组化染色呈阴性。在乳腺囊性病不典型增生Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级中TrfR的阳性率分别为8.3%、23.1%、30.0%。说明在乳腺囊性病不典型增生期细胞代谢增强，铁离子的需要量增加，随不典型增生程度加重阳性率逐渐增高，表明乳腺上皮细胞增生程度加剧。通过对乳腺囊性病不典型增生细胞的TrfR进行检测，对判断乳腺细胞增生程度有指导意义。随着不典型增生程度加重，TrfR阳性率升高，也提示了该病变的癌变机率随之增加。因而通过对乳腺囊性病不典型增生细胞TrfR的检测可能为临床监测其癌变提供新的参考手段。
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本组检测乳腺癌标本中TrfR阳性率达62.5%。不同组织学类型间TrfR阳性率差别不显著，但随组织学分化程度分级增高其TrfR有增高的趋势，其中Ⅰ级与Ⅱ级比较相差显著。表明随着乳腺癌恶性程度的增高，其细胞的代谢及增殖活跃。理论上TrfR应分布在细胞膜上，本组材料观测发现部分细胞浆内TrfR也呈现阳性，可能是为满足细胞增生需要而在粗面内质网内新合成了TrfR，所以细胞浆内出现TrfR可能从另一方面反映了肿瘤细胞的增殖状态。少数细胞核内出现TrfR的原因尚待进一步研究。
作者简介：廖克龙，男，34岁，讲师，主治医师，硕士
参考文献
[1] Prior R, Fillet G, Gautan S, et al. Transferrin receptor expression in tumor of the human nervous system: relation to tumor type,grading and tumor growth fraction. Virchows Arch A, 1990,416(3):491
, 百拇医药
[2] Page D L. Cancer risk assesment in benign breast biopsies. Human Pathol,1986,17(5):871
[3] 李树玲.乳腺癌.中华人民共和国卫生部医政司编.中国常见恶性肿瘤诊治规范(第八分册).北京：北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，1991.25～29
[4] Newman R, Vernon K, Habil M, et al. The transferrin receptor. Trends Biochem Sci,1982,7(8):397
[5] Shionoya K. The study of relationship between proliferative activity and expressed transferrin receptor content in cancer cells. Kokubyo Gakkai Zasshi,1994,61(4):580
, 百拇医药
[6] Whitney J F, Clark J M, Griffin T W, et al. Transferrin receptor expression in nonsmall cell lung cancer. Histopathologic and clinical correlates. Cancer,1995,176(1):20
[7] Dowlati A, Loo M, Bury T, et al. Soluble and cell-associated transferrin receptor in lung cancer. Br J Cancer,1997,75(12):1802
收稿：1998-01-13；修回：1998-10-27, 百拇医药