蟾蜍上腭离体法评价药物的纤毛毒性及影响因素
作者：顾文涛 武冬梅 赵志龙 张德利 崔景斌
单位：顾文涛(哈尔滨工业大学医院)；武冬梅(佳木斯大学化学与药学院)；赵志龙(佳木斯大学化学与药学院)；张德利(佳木斯大学化学与药学院)；崔景斌(佳木斯大学化学与药学院)
关键词：鼻腔给药；纤毛毒性
黑龙江医药科学000109
提要 目的：以盐酸吗啉胍为模型药评价药物的纤毛毒性及影响因素。方法：用光学显微镜观察离体蟾蜍上腭纤毛在药物溶液作用下持续摆动时间，以此作为指标考查纤毛毒性受盐酸吗啉胍药液的浓度、溶液pH和渗透压的影响。结果：纤毛毒性受药液浓度、溶液pH和渗透压影响较大。结论：鼻腔给药制剂涉及鼻粘膜纤毛毒性问题，应予充分重视。
Evaluation of ciliotoxicity of drug and affecting factors with isolated toad palate
, 百拇医药
Gu Wentao,et al
Abstract Objective:To evaluate ciliotoxicity of drug and affecting factors with moroxydine chloride as model drug.Method:To examine the mucocilia of isolated tode palate and recorded the lasting time of ciliary movement with an optical microscope after application of drug solutions and take it as index to study the influence of concentration,pH and osmslarity of drug solutions on the ciliotoxicity.Results:Ciliary movement was easily affected by factors above.Conclusion:Care must be taken in developing any nasal dosage form to ensuve its least ciliotoxicity.
, 百拇医药
Key words intranasal administration;ciliotoxicity
近年来研究发现，鼻腔给药可避免肠—肝的首过作用，并且由于鼻腔粘膜下血管、淋巴管丰富，对药物有较好的吸收作用，可有效地提高药物的生物利用度，达到全身治疗的作用。但这种给药方式可能产生对鼻粘膜纤毛的毒性问题，严重者可影响鼻腔的正常生理功能。因此，对纤毛毒性研究是鼻腔给药的一项重要内容。本研究以盐酸吗啉胍(moroxydine chloride)为模型药，研究了药物浓度，pH及渗透压对纤毛毒性的影响。
1 材料与方法
1.1 材料
光学显微镜(XSB-1青岛光学仪器厂)；蛙板；层析缸；记时器等。盐酸吗啉胍(佳木斯大学药物分析教研室提供)；氢氧化钠、盐酸、氯化钠等均为分析纯试剂。中华大蟾蜍、体重30～40g，雌雄不限(佳木斯大学动物室提供)。
, http://www.100md.com
1.2 方法
将蟾蜍仰卧固定于蛙板上，用止血钳张开其口腔，用手术剪分离上腭粘膜，取约3mm×3mm的粘膜，生理盐水洗净血块及杂物，将其平铺于载玻片上，于粘膜表面滴加0.2ml药物溶液，盖上盖玻片，40倍显微镜下观察粘膜纤毛的摆动情况，随后置于加有少量蒸馏水的层析缸中，密闭，使水蒸气近饱和状态，环境温度20℃～25℃。此后每隔适当时间取出标本，显微镜观察，如纤毛继续摆动则放回层析缸中，直至纤毛摆动停止，记录从给药开始至纤毛摆动停止所持续的时间。纤毛摆动停止后，用生理盐水冲洗粘膜上的药液，继续观察粘膜摆动是否恢复，记录恢复摆动试品的持续摆动时间。以上实验中，取一块同一只蟾蜍上腭的粘膜，以生理盐水同时作自身对照。
2 实验结果
2.1 不同浓度的盐酸吗啉胍水溶液及生理盐水溶液对纤毛摆动的影响
分别用蒸馏水和生理盐水配制盐酸吗啉胍系列浓度溶液，0.1%，0.5%，1.0%，2.5%，3.0%，5.0%，7.0%。依上法操作，结果见表1。将不同浓度药液的纤毛持续摆动时间与相应的药物浓度作图，图略。
, 百拇医药
表1 离体蟾蜍上腭分别给予盐酸吗啡胍蒸馏水及
生理盐水溶液后纤毛摆动时间(
±s,n=3)
盐酸吗啉胍浓度(%)
给药后纤毛摆动时间(min)
蒸馏水溶液
生理盐水溶液
7.0
313±19
108±18
5.0
, 百拇医药 297±22
136±11
3.0
281±17
243±101
2.5
219±20
293±53
1.0
197±18
409±24
0.5
90±30
, 百拇医药
501±19
0.1
81±431
529±40
0.0
55±29
608±30
结果表明：盐酸吗啉胍蒸馏水溶液浓度越大，纤毛摆动时间越长。生理盐水溶液结果则相反。
2.2 渗透压对纤毛摆动时间的影响
配制不同浓度的氯化钠溶液0.5%，0.9%，1.8%，2.5%，依上法操作，结果见表2。
表2 离体蟾蜍上腭给予氯化钠溶液后
, 百拇医药
纤毛摆动时间(±s,n=3)
氯化钠浓度(%)
给药后纤毛摆动时间(min)
2.5
307±13
1.8
358±48
0.9
608±30
0.5
559±108
, 百拇医药
0.2
538±63
结果表明：0.9%氯化钠溶液(生理盐水)纤毛持续摆动时间最长，浓度过高、过低都降低纤毛摆动时间。
2.3 pH对纤毛摆动的影响
配制pH分别为5，6，7，8，10的0.9%氯化钠溶液，依上法操作，结果见表3。
表3 离体蟾蜍上腭给予不同pH值0.9%氯化钠
溶液后纤毛摆动时间(±s,n=3)
pH
给药后纤毛摆动时间(min)
, 百拇医药
5.0
52±6.0
6.0
228±13
7.0
608±30
8.0
321±20
10
85±9.0
结果表明：pH为7的溶液纤毛摆动时间最长，pH过高、过低都低纤毛摆动时间。
3 讨论
, http://www.100md.com
药物对鼻粘膜的毒性主要表现为对粘膜上纤毛的毒性，首先是对纤毛摆动的影响。实验结果表明：对纤毛的毒性大小，除与药物本身及其浓度有关外，还明显受被试药液的渗透压及pH等条件的影响，对于鼻腔给药制剂应予充分的重视。盐酸吗啉胍蒸馏水溶液纤毛毒性在0～7%范围内随浓度的增高而降低，(见表1)。说明低浓度药液渗透压低而致纤毛毒性增强，但浓度超过10%，可使纤毛摆动立即停止。而用生理盐水配制的盐酸吗啉胍药液则随药物浓度增高，纤毛毒性也随之增强，因该溶液中消除了低浓度药液的渗透压因素对纤毛摆动的影响。该药液在药物浓度超过10%时也可使纤毛摆动立即停止。渗透压和pH两因素对纤毛的毒性影响是很明显的，偏离生理条件、毒性都会相应增强。盐酸吗啉胍溶液实际呈弱酸性，但由于其酸性不强，相对其渗透压来说影响不大。有些药物的纤毛毒性是可逆的，采用蟾蜍上腭离体法能区别药物纤毛毒性的可逆与否。如实验中发现20%盐酸吗啉胍溶液虽然可使摆动立即停止，但经生理盐水淋洗后，纤毛摆动恢复，为可逆性影响。而据报道[1]，1%盐酸普萘洛尔溶液对纤毛摆动的影响是不可逆的，使该药不适合作鼻腔给药制剂中的填加剂。因此，对溶液型制剂，蟾蜍上腭离体法为一种简便、可靠的评价方法。
参考文献
1，蒋新国,崔景斌,方晓玲,等.药物的鼻粘膜纤毛毒性及评价方法,药学学报,1995,30:848
(收稿：1999-10-25), 百拇医药
单位：顾文涛(哈尔滨工业大学医院)；武冬梅(佳木斯大学化学与药学院)；赵志龙(佳木斯大学化学与药学院)；张德利(佳木斯大学化学与药学院)；崔景斌(佳木斯大学化学与药学院)
关键词：鼻腔给药；纤毛毒性
黑龙江医药科学000109
提要 目的：以盐酸吗啉胍为模型药评价药物的纤毛毒性及影响因素。方法：用光学显微镜观察离体蟾蜍上腭纤毛在药物溶液作用下持续摆动时间，以此作为指标考查纤毛毒性受盐酸吗啉胍药液的浓度、溶液pH和渗透压的影响。结果：纤毛毒性受药液浓度、溶液pH和渗透压影响较大。结论：鼻腔给药制剂涉及鼻粘膜纤毛毒性问题，应予充分重视。
Evaluation of ciliotoxicity of drug and affecting factors with isolated toad palate
, 百拇医药
Gu Wentao,et al
Abstract Objective:To evaluate ciliotoxicity of drug and affecting factors with moroxydine chloride as model drug.Method:To examine the mucocilia of isolated tode palate and recorded the lasting time of ciliary movement with an optical microscope after application of drug solutions and take it as index to study the influence of concentration,pH and osmslarity of drug solutions on the ciliotoxicity.Results:Ciliary movement was easily affected by factors above.Conclusion:Care must be taken in developing any nasal dosage form to ensuve its least ciliotoxicity.
, 百拇医药
Key words intranasal administration;ciliotoxicity
近年来研究发现，鼻腔给药可避免肠—肝的首过作用，并且由于鼻腔粘膜下血管、淋巴管丰富，对药物有较好的吸收作用，可有效地提高药物的生物利用度，达到全身治疗的作用。但这种给药方式可能产生对鼻粘膜纤毛的毒性问题，严重者可影响鼻腔的正常生理功能。因此，对纤毛毒性研究是鼻腔给药的一项重要内容。本研究以盐酸吗啉胍(moroxydine chloride)为模型药，研究了药物浓度，pH及渗透压对纤毛毒性的影响。
1 材料与方法
1.1 材料
光学显微镜(XSB-1青岛光学仪器厂)；蛙板；层析缸；记时器等。盐酸吗啉胍(佳木斯大学药物分析教研室提供)；氢氧化钠、盐酸、氯化钠等均为分析纯试剂。中华大蟾蜍、体重30～40g，雌雄不限(佳木斯大学动物室提供)。
, http://www.100md.com
1.2 方法
将蟾蜍仰卧固定于蛙板上，用止血钳张开其口腔，用手术剪分离上腭粘膜，取约3mm×3mm的粘膜，生理盐水洗净血块及杂物，将其平铺于载玻片上，于粘膜表面滴加0.2ml药物溶液，盖上盖玻片，40倍显微镜下观察粘膜纤毛的摆动情况，随后置于加有少量蒸馏水的层析缸中，密闭，使水蒸气近饱和状态，环境温度20℃～25℃。此后每隔适当时间取出标本，显微镜观察，如纤毛继续摆动则放回层析缸中，直至纤毛摆动停止，记录从给药开始至纤毛摆动停止所持续的时间。纤毛摆动停止后，用生理盐水冲洗粘膜上的药液，继续观察粘膜摆动是否恢复，记录恢复摆动试品的持续摆动时间。以上实验中，取一块同一只蟾蜍上腭的粘膜，以生理盐水同时作自身对照。
2 实验结果
2.1 不同浓度的盐酸吗啉胍水溶液及生理盐水溶液对纤毛摆动的影响
分别用蒸馏水和生理盐水配制盐酸吗啉胍系列浓度溶液，0.1%，0.5%，1.0%，2.5%，3.0%，5.0%，7.0%。依上法操作，结果见表1。将不同浓度药液的纤毛持续摆动时间与相应的药物浓度作图，图略。
, 百拇医药
表1 离体蟾蜍上腭分别给予盐酸吗啡胍蒸馏水及
生理盐水溶液后纤毛摆动时间(
±s,n=3)盐酸吗啉胍浓度(%)
给药后纤毛摆动时间(min)
蒸馏水溶液
生理盐水溶液
7.0
313±19
108±18
5.0
, 百拇医药 297±22
136±11
3.0
281±17
243±101
2.5
219±20
293±53
1.0
197±18
409±24
0.5
90±30
, 百拇医药
501±19
0.1
81±431
529±40
0.0
55±29
608±30
结果表明：盐酸吗啉胍蒸馏水溶液浓度越大，纤毛摆动时间越长。生理盐水溶液结果则相反。
2.2 渗透压对纤毛摆动时间的影响
配制不同浓度的氯化钠溶液0.5%，0.9%，1.8%，2.5%，依上法操作，结果见表2。
表2 离体蟾蜍上腭给予氯化钠溶液后
, 百拇医药
纤毛摆动时间(
±s,n=3)氯化钠浓度(%)
给药后纤毛摆动时间(min)
2.5
307±13
1.8
358±48
0.9
608±30
0.5
559±108
, 百拇医药
0.2
538±63
结果表明：0.9%氯化钠溶液(生理盐水)纤毛持续摆动时间最长，浓度过高、过低都降低纤毛摆动时间。
2.3 pH对纤毛摆动的影响
配制pH分别为5，6，7，8，10的0.9%氯化钠溶液，依上法操作，结果见表3。
表3 离体蟾蜍上腭给予不同pH值0.9%氯化钠
溶液后纤毛摆动时间(
±s,n=3)pH
给药后纤毛摆动时间(min)
, 百拇医药
5.0
52±6.0
6.0
228±13
7.0
608±30
8.0
321±20
10
85±9.0
结果表明：pH为7的溶液纤毛摆动时间最长，pH过高、过低都低纤毛摆动时间。
3 讨论
, http://www.100md.com
药物对鼻粘膜的毒性主要表现为对粘膜上纤毛的毒性，首先是对纤毛摆动的影响。实验结果表明：对纤毛的毒性大小，除与药物本身及其浓度有关外，还明显受被试药液的渗透压及pH等条件的影响，对于鼻腔给药制剂应予充分的重视。盐酸吗啉胍蒸馏水溶液纤毛毒性在0～7%范围内随浓度的增高而降低，(见表1)。说明低浓度药液渗透压低而致纤毛毒性增强，但浓度超过10%，可使纤毛摆动立即停止。而用生理盐水配制的盐酸吗啉胍药液则随药物浓度增高，纤毛毒性也随之增强，因该溶液中消除了低浓度药液的渗透压因素对纤毛摆动的影响。该药液在药物浓度超过10%时也可使纤毛摆动立即停止。渗透压和pH两因素对纤毛的毒性影响是很明显的，偏离生理条件、毒性都会相应增强。盐酸吗啉胍溶液实际呈弱酸性，但由于其酸性不强，相对其渗透压来说影响不大。有些药物的纤毛毒性是可逆的，采用蟾蜍上腭离体法能区别药物纤毛毒性的可逆与否。如实验中发现20%盐酸吗啉胍溶液虽然可使摆动立即停止，但经生理盐水淋洗后，纤毛摆动恢复，为可逆性影响。而据报道[1]，1%盐酸普萘洛尔溶液对纤毛摆动的影响是不可逆的，使该药不适合作鼻腔给药制剂中的填加剂。因此，对溶液型制剂，蟾蜍上腭离体法为一种简便、可靠的评价方法。
参考文献
1，蒋新国,崔景斌,方晓玲,等.药物的鼻粘膜纤毛毒性及评价方法,药学学报,1995,30:848
(收稿：1999-10-25), 百拇医药