干扰素α－1b对人眼Tenon囊成纤维细胞增殖抑制的实验研究
作者：黄楚龙 蓝育青 杨智宽 林明楷
单位：中山医科大学中山眼科中心，广州市510060
关键词：干扰素α-1b;成纤维细胞；MTT法
中国药房000607
摘要：目的：观察国产干扰素α-1b(赛若金)对人眼Tenon囊成纤维细胞增殖的抑制作用。方法：取人眼Tenon囊成纤维细胞进行体外培养，传3代后用MTT法检测干扰素α-1b对人眼Tenon囊成纤维细胞增殖的抑制作用。结果：干扰素α-1b对人眼Tenon囊成纤维细胞生长有明显的抑制作用，106IU/ml作用组的OD值为(0.1109±0.0585)与对照组(0.2535±0.0502)之间有极显著性差异(P<0.01)，作用组的抑制率为56.25%。结论：国产干扰素α-1b对人眼Tenon囊成纤维细胞增殖有明显的抑制作用。
, 百拇医药
中图分类号：R97文献标识码：B文章编号：1001-0408(2000)06-0253-02
Experimental Study of Inhibiting Effect of Interferon- alpha 1b on Proliferation of Human Tenon Capsule Fibroblasts
HUANG Chulong LAN Yuqing YANG Zhikuan LIN Mingkai
(Zhongshan Ophthalmic Center,Sun Yat- sen University of Medical Sciences,Guangzhou 510060)
ABSTRACT： OBJECTIVE： To observe the inhibiting effect of Interferon- alpha 1b(IFNα - 1b)on proliferation of human tenon capsule fibroblasts.METHODS： Human tenon capsule fibroblasts were cultured in vitro and MTT method was used to detect the inhibiting effect of IFNα - 1b on human tenon capsule fibroblasts.RESULTS： There was significant difference in OD values between 106IU/ml group(0.1 109± 0.0 585)and control group(0.2 535± 0.0 502),the inhibition rate in IFN group was 56.25% .CONCLUSION： IFNα - 1b has significant effect on inhibiting proliferation of human tenon capsule fibroblasts.
, 百拇医药
KEY WORDS： Interferonα - 1b； fibroblast； MTT method
干扰素α作为免疫调节药物而用于抗病毒治疗的研究和应用已有30多年历史，近年的研究发现，干扰素α除了抗病毒作用以外，尚有抗纤维增殖的作用。本文通过体外培养人Tenon囊成纤维细胞，用MTT法检测干扰素α对其增殖的抑制作用，以探讨干扰素α在青光眼术后抗滤过泡纤维化的应用价值。
1 材料与方法
1.1 主要试剂：干扰素α-1b(商品名为赛若金)：100万IU/支，由深圳科兴生物制品有限公司生产，中山医科大学眼科中心药剂科提供；噻唑兰(MTT)：Sigma公司产品，使用前以PBS溶解，浓度为5mg/ml；二甲基亚砜(DMSO)：天津化学试剂厂生产；胎牛血清(FBS)：杭州四季青生物工程材料研究所生产；DMEM培养基：Gibco公司生产。
, http://www.100md.com
1.2 主要仪器：二氧化碳培养箱：SLSHELLABUSA；超净工作台；SW-CJ-IF，苏州；培养板：Nunclon产品；倒置相差显微镜，Leica；酶联免疫检测仪：METERTECH960。
1.3 人眼Tenon囊成纤维细胞体外培养：青光眼患者手术时取Tenon囊组织，常规处理后，将其煎成(1×1)mm3大小若干块，加入24孔培养板用含15%FBS的DMEM培养液入37℃、5%CO2的培养箱培养，细胞用0.125%的胰蛋白酶进行消化传代，取传3代后细胞进行实验。
1.4 实验方法：取对数生长期细胞，以每孔2×104个/200μl接种于96孔培养板内，24h后加入不同浓度(分别为102IU、103IU、104IU、105IU、106IU/ml)的干扰素α-1b溶液，对照组加入等量的培养液，每个浓度及对照组均设10个平行孔。继续培养48h后，加入MTT20μl，4h后吸去培养液，每孔加入DMSO100μl，振荡器上振荡5min～10min，在酶联免疫吸附仪上测定490nm处光吸收值(OD值)。按下式计算抑制率：抑制率=(1—用药组OD值/对照组OD值)×100%。
, http://www.100md.com
1.5 统计方法：用SPSS软件进行分析，计算均值、标准差，配对t检验。
2 结果
2.1 干扰素α-1b对成纤维细胞生长的抑制作用：倒置相差显微镜观察发现：加入干扰素α-1b后，细胞生长受到抑制，以高剂量组表现最为明显。
2.2 干扰素α-1b对成纤维细胞生长的抑制作用：MTT检查结果见表1。
表1 干扰素α-1b对成纤维细胞生长抑制作用的
MTT检查结果
孔数
OD值
抑制率%
, 百拇医药
P值
正常对照组
10
0.2535±0.0502
干扰素α-1b 106组
10
0.1109±0.0585
56.25
0.003*
干扰素α-1b 105组
10
, http://www.100md.com 0.2303±0.312
9.15
0.117
干扰素α-1b 104组
10
0.2438±0.0276
3.83
0.515
干扰素α-1b 103组
10
0.2382±0.0382
6.04
, http://www.100md.com
0.153
干扰素α-1b 102组
10
0.2452±0.0346
3.27
0.387
*差异有极显著性
3 讨论
干扰素α是临床常用的药物，与干扰素γ主要是抗纤维增殖的作用不同的是，干扰素α主要是作为增强机体的免疫功能而用于病毒性肝炎等疾病的治疗[1]。新近的研究表明，干扰素α具有抗纤维增殖的作用，其可能的机制包括有拮抗某些生长因子的作用，抑制成纤维细胞增殖、趋化和胶原的合成，对新生血管也有抑制作用[2]。干扰素α又分为1b及2b两种类型，已有报道干扰素α-2b对人Tenon囊成纤维细胞有抑制作用，在102～106IU/ml范围内抑制率随浓度的增加而增强[4]。另有学者用3HTdR法检测干扰素α-2b对体外培养的人眼Tenon囊成纤维细胞的作用，发现在10～10000IU/ml浓度下，其抑制作用呈剂量依赖性[3]。本研究采用MTT的方法观察国产干扰素α-1b对人Tenon囊成纤维细胞的影响，结果发现，国产干扰素α-1b(赛若金)对人Tenon囊成纤维细胞有明显的抑制作用。加入赛若金组的成纤维细胞的生长受到抑制，以高剂量组表现最为明显，106IU/ml组的抑制率高达56.25%，与文献报道[4]的美国产干扰素α-2b该浓度组51.54%的抑制率相近，但低浓度组的抑制作用表现不明显。
, http://www.100md.com
在眼科领域，青光眼是严重危害人类健康的不可逆致盲眼病，滤过手术是其治疗的措施之一，但滤过手术后的纤维增殖常导致滤过泡的纤维化而使手术失败[5]。因此，寻找高效、无毒的抗纤维增殖药物是眼科医师努力的方向。本研究结果为国产干扰素α-1b用于抗纤维增殖提供了实验依据，为青光眼术后抗滤过泡的纤维增殖提供了新的手段。
参 考 文 献 ：
1，Adelmn- girll BC.Inhibition of fibroblast chemotaxis by recominant human interferon γ and interferon a[J]. J Cellular Physiology,1987,130： 270.
2，Low SQ.Interferon- γ inhibits collegen synthesis by human tenons capsule fibroblast in vitro[J].Invest Op_ hthalmol Vis Sci,1991,32:2 964.
, 百拇医药
3，Gillies M.Interferon- alpha 2b inhibits proliferation of human tenon capsule fibroblasts[J].Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol,1993,231:118.
4，张秀兰，彭大伟干扰素α-2b对人眼Tenon囊成纤维细胞的增殖抑制[J].眼科学报，1998，14：195
5，Skuat RL.Wound healing in glaucoma filtering surgery [J].Surv Ophthalmol,1987,32:149.
(收稿日期：2000-09-25), http://www.100md.com
单位：中山医科大学中山眼科中心，广州市510060
关键词：干扰素α-1b;成纤维细胞；MTT法
中国药房000607
摘要：目的：观察国产干扰素α-1b(赛若金)对人眼Tenon囊成纤维细胞增殖的抑制作用。方法：取人眼Tenon囊成纤维细胞进行体外培养，传3代后用MTT法检测干扰素α-1b对人眼Tenon囊成纤维细胞增殖的抑制作用。结果：干扰素α-1b对人眼Tenon囊成纤维细胞生长有明显的抑制作用，106IU/ml作用组的OD值为(0.1109±0.0585)与对照组(0.2535±0.0502)之间有极显著性差异(P<0.01)，作用组的抑制率为56.25%。结论：国产干扰素α-1b对人眼Tenon囊成纤维细胞增殖有明显的抑制作用。
, 百拇医药
中图分类号：R97文献标识码：B文章编号：1001-0408(2000)06-0253-02
Experimental Study of Inhibiting Effect of Interferon- alpha 1b on Proliferation of Human Tenon Capsule Fibroblasts
HUANG Chulong LAN Yuqing YANG Zhikuan LIN Mingkai
(Zhongshan Ophthalmic Center,Sun Yat- sen University of Medical Sciences,Guangzhou 510060)
ABSTRACT： OBJECTIVE： To observe the inhibiting effect of Interferon- alpha 1b(IFNα - 1b)on proliferation of human tenon capsule fibroblasts.METHODS： Human tenon capsule fibroblasts were cultured in vitro and MTT method was used to detect the inhibiting effect of IFNα - 1b on human tenon capsule fibroblasts.RESULTS： There was significant difference in OD values between 106IU/ml group(0.1 109± 0.0 585)and control group(0.2 535± 0.0 502),the inhibition rate in IFN group was 56.25% .CONCLUSION： IFNα - 1b has significant effect on inhibiting proliferation of human tenon capsule fibroblasts.
, 百拇医药
KEY WORDS： Interferonα - 1b； fibroblast； MTT method
干扰素α作为免疫调节药物而用于抗病毒治疗的研究和应用已有30多年历史，近年的研究发现，干扰素α除了抗病毒作用以外，尚有抗纤维增殖的作用。本文通过体外培养人Tenon囊成纤维细胞，用MTT法检测干扰素α对其增殖的抑制作用，以探讨干扰素α在青光眼术后抗滤过泡纤维化的应用价值。
1 材料与方法
1.1 主要试剂：干扰素α-1b(商品名为赛若金)：100万IU/支，由深圳科兴生物制品有限公司生产，中山医科大学眼科中心药剂科提供；噻唑兰(MTT)：Sigma公司产品，使用前以PBS溶解，浓度为5mg/ml；二甲基亚砜(DMSO)：天津化学试剂厂生产；胎牛血清(FBS)：杭州四季青生物工程材料研究所生产；DMEM培养基：Gibco公司生产。
, http://www.100md.com
1.2 主要仪器：二氧化碳培养箱：SLSHELLABUSA；超净工作台；SW-CJ-IF，苏州；培养板：Nunclon产品；倒置相差显微镜，Leica；酶联免疫检测仪：METERTECH960。
1.3 人眼Tenon囊成纤维细胞体外培养：青光眼患者手术时取Tenon囊组织，常规处理后，将其煎成(1×1)mm3大小若干块，加入24孔培养板用含15%FBS的DMEM培养液入37℃、5%CO2的培养箱培养，细胞用0.125%的胰蛋白酶进行消化传代，取传3代后细胞进行实验。
1.4 实验方法：取对数生长期细胞，以每孔2×104个/200μl接种于96孔培养板内，24h后加入不同浓度(分别为102IU、103IU、104IU、105IU、106IU/ml)的干扰素α-1b溶液，对照组加入等量的培养液，每个浓度及对照组均设10个平行孔。继续培养48h后，加入MTT20μl，4h后吸去培养液，每孔加入DMSO100μl，振荡器上振荡5min～10min，在酶联免疫吸附仪上测定490nm处光吸收值(OD值)。按下式计算抑制率：抑制率=(1—用药组OD值/对照组OD值)×100%。
, http://www.100md.com
1.5 统计方法：用SPSS软件进行分析，计算均值、标准差，配对t检验。
2 结果
2.1 干扰素α-1b对成纤维细胞生长的抑制作用：倒置相差显微镜观察发现：加入干扰素α-1b后，细胞生长受到抑制，以高剂量组表现最为明显。
2.2 干扰素α-1b对成纤维细胞生长的抑制作用：MTT检查结果见表1。
表1 干扰素α-1b对成纤维细胞生长抑制作用的
MTT检查结果
孔数
OD值
抑制率%
, 百拇医药
P值
正常对照组
10
0.2535±0.0502
干扰素α-1b 106组
10
0.1109±0.0585
56.25
0.003*
干扰素α-1b 105组
10
, http://www.100md.com 0.2303±0.312
9.15
0.117
干扰素α-1b 104组
10
0.2438±0.0276
3.83
0.515
干扰素α-1b 103组
10
0.2382±0.0382
6.04
, http://www.100md.com
0.153
干扰素α-1b 102组
10
0.2452±0.0346
3.27
0.387
*差异有极显著性
3 讨论
干扰素α是临床常用的药物，与干扰素γ主要是抗纤维增殖的作用不同的是，干扰素α主要是作为增强机体的免疫功能而用于病毒性肝炎等疾病的治疗[1]。新近的研究表明，干扰素α具有抗纤维增殖的作用，其可能的机制包括有拮抗某些生长因子的作用，抑制成纤维细胞增殖、趋化和胶原的合成，对新生血管也有抑制作用[2]。干扰素α又分为1b及2b两种类型，已有报道干扰素α-2b对人Tenon囊成纤维细胞有抑制作用，在102～106IU/ml范围内抑制率随浓度的增加而增强[4]。另有学者用3HTdR法检测干扰素α-2b对体外培养的人眼Tenon囊成纤维细胞的作用，发现在10～10000IU/ml浓度下，其抑制作用呈剂量依赖性[3]。本研究采用MTT的方法观察国产干扰素α-1b对人Tenon囊成纤维细胞的影响，结果发现，国产干扰素α-1b(赛若金)对人Tenon囊成纤维细胞有明显的抑制作用。加入赛若金组的成纤维细胞的生长受到抑制，以高剂量组表现最为明显，106IU/ml组的抑制率高达56.25%，与文献报道[4]的美国产干扰素α-2b该浓度组51.54%的抑制率相近，但低浓度组的抑制作用表现不明显。
, http://www.100md.com
在眼科领域，青光眼是严重危害人类健康的不可逆致盲眼病，滤过手术是其治疗的措施之一，但滤过手术后的纤维增殖常导致滤过泡的纤维化而使手术失败[5]。因此，寻找高效、无毒的抗纤维增殖药物是眼科医师努力的方向。本研究结果为国产干扰素α-1b用于抗纤维增殖提供了实验依据，为青光眼术后抗滤过泡的纤维增殖提供了新的手段。
参 考 文 献 ：
1，Adelmn- girll BC.Inhibition of fibroblast chemotaxis by recominant human interferon γ and interferon a[J]. J Cellular Physiology,1987,130： 270.
2，Low SQ.Interferon- γ inhibits collegen synthesis by human tenons capsule fibroblast in vitro[J].Invest Op_ hthalmol Vis Sci,1991,32:2 964.
, 百拇医药
3，Gillies M.Interferon- alpha 2b inhibits proliferation of human tenon capsule fibroblasts[J].Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol,1993,231:118.
4，张秀兰，彭大伟干扰素α-2b对人眼Tenon囊成纤维细胞的增殖抑制[J].眼科学报，1998，14：195
5，Skuat RL.Wound healing in glaucoma filtering surgery [J].Surv Ophthalmol,1987,32:149.
(收稿日期：2000-09-25), http://www.100md.com