不同抗凝剂、血浆影响葡萄球菌玻片法血浆凝固酶试验的评价
作者：王露霞 石凌波 徐德兴 刘刃 陆勤
单位：王露霞 石凌波 徐德兴 刘刃 (广州军区广州总医院检验科，广州，510010)；陆勤 (解放军458医院检验科，广州，510602)
关键词：葡萄球菌；血浆凝固酶；抗凝剂
不同抗凝剂 摘要：目的 探讨玻片法血浆葡萄球菌凝固酶试验的最佳血浆、抗凝剂和稀释度并解决假阳性问题，提高其检测的敏感性和特异性。方法 用EDTA、肝素钠及以草酸盐抗凝及稀释度不同的人、兔血浆对200株葡萄球菌试管法进行玻片法血浆凝固酶试验，以试管法为金标准作分析比较。结果 分别用EDTA抗凝的兔血浆、肝素钠抗凝的兔血浆及草酸盐抗凝的人血浆，在不同的稀释度时其诊断的敏感性和特异性各不相同，以EDTA抗凝的兔血浆为最佳，但是EDTA抗凝的兔血浆原液和最佳稀释度无明显差异。结论 血浆浓度及采用何种血浆、何种抗凝剂直接影响玻片法血浆凝固酶试验的诊断效率。三种抗凝血浆最佳稀释度范围均为1:16～1:32。
, 百拇医药
中图分类号：R446.5
血浆凝固酶试验是鉴定金黄色葡萄球菌的主要试验，其优点是快速、简便，但易出现假阳性。试管法虽然准确可靠，但繁琐复杂、反应时间长。为此，我们用人、兔的不同抗凝血浆和稀释血浆对临床分离的200株葡萄球菌进行玻片法血浆凝固酶试验，以试管法为金标准，探讨玻片法血浆凝固酶试验的最佳血浆、抗凝剂和稀释度，从而解决了假阳性问题。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 菌株来源 200株葡萄球菌从本院临床病人的血、伤口分泌物、前列腺液、引流液、脑脊液、尿及咽拭子分离所得。
1.1.2 参考菌株 金黄色葡萄球菌ATCC25923,表皮葡萄球菌A2TCC26069。
, 百拇医药 1.1.3 仪器与试剂 Vitek-AMS 自动微生物分析仪，法国Bio Meriec公司制造；AMS专用革兰氏阳性菌鉴定卡(GPI卡)；混合人血浆、家兔血浆；1%草酸盐(北京生化试剂厂)；250 U/ml肝素钠(上海生物化学制药厂)；108 mg/L EDAT-Na2(北京化工厂)。
1.1.4《医学试验评价系统软件》由本科研制提供。
1.2 方法
1.2.1 常规菌株鉴定 革兰氏染色镜检， 触酶试验，菌落形态，溶血状态，葡萄糖O-F试验，甘露醇发酵试验，耐热DNA及生化反应。菌落鉴定按《全国临床检验操作规程》(第二版)。
1.2.2 玻片法 血浆原液、1:2、1:4、1:8、1:16、1:32、1:64和1:128于清洁玻片上，各挑取2个葡萄球菌落与上述血浆混合，10 s内观察结果，出现肉眼可见的粗大颗粒或小凝块为阳性，否则为阴性。以标准株金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球作阳性与阴性对照，并以同样的方法用生理盐水作空白对照。
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1.2.3 试管法 取无菌试管7支，分别加血浆原液、1:2、1:4、1:8、1:16、1:32、1:64稀释血浆各0.5 ml，各管加待检的生理盐水菌悬液0.5 ml(菌液的浓度为一个麦氏单位)。实际的稀释度分别为1:2、1:4、1:8、1:16、1:32、1:64和1:128，混匀后放置37 ℃水浴中，每30 min观察一次结果，阳性多在30 min到2 h出现凝固。阴性均在24 h内仍不出现凝固。同样以标准菌株金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌作阳性、阴性对照，并以同样的方法用生理盐水作空白对照。
2 结果
2.1 在200株葡萄球菌中EDTA抗凝的兔血浆、肝素钠抗凝的兔血浆和草酸盐抗凝的人血浆在不同的稀释度，其诊断的敏感性和特异性各不相同。EDTA抗凝血浆原液敏感性94%、特异性93%，1:16和1:32敏感性100%，特异性99%；肝素钠抗凝血浆原液敏感性94%、特异性78%,1:16和1:32敏感性100%，特异性99%；草酸盐抗凝人血浆原液敏感性94%，特异性48%，1:16和1:32敏感性100%，特异性99%。可见不同抗凝剂的人、兔血浆最佳稀释范围均在1:161:32。
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3 讨论
玻片法血浆凝固酶试验是鉴定金黄色葡萄球菌应用已久的方法。虽然此法快捷、简便、直观，但由于各实验室所用的血浆来源、抗凝剂不一致，使试验结果存在一定的差异。本实验室结果表明，EDTA抗凝的兔血浆，肝素钠抗凝的兔血浆与草酸盐抗凝的人血浆原液诊断的特异性分别为93%、78%和48%。这可能与不同的血浆中所含凝固酶反应因子(CRF)不同有关[1]。不同血浆、抗凝剂在同一稀释度下，其诊断的敏感性、特异性有很大的差别；即使是同一血浆，稀释度不同，其诊断的敏感性、特异性也有较大差别。但用EDTA抗凝的兔血浆做玻片法凝固酶试验，血浆原液与血浆最佳稀释度没有明显的差别。由于兔血浆的收集较人血浆的收集繁锁，大多数实验室都采用人血浆。然而，草酸盐抗凝的人血浆和肝素钠抗凝的兔血浆假阳性为51.5%(85/165)、22.4%(37/165)，故不应该用血浆原液来做玻片法凝固酶试验，应选用最佳稀释度，以降低假阳性。三者最佳稀释度范围均为1:16～1:32。有文献报道[2]，用肝素抗凝的兔血浆做凝固酶试验无假阳性结果，本实验与文献报道有差异。近几年来许多文献都报道玻片法凝固酶试验用新鲜的兔血浆或人血浆，没有注重强调血浆所用的抗凝剂，只有在《全国临床检验操作规程》上强调用EDTA抗凝的兔血浆为最好。从本实验结果来看，草酸盐抗凝的人血浆和肝素钠抗凝的兔血浆原液玻片法凝固酶试验都存在假阳性。
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本试验中观察到兔血浆要比人血浆凝集模式好，且出结果快。但兔血浆凝固酶试验在时间观察上也是非常关键的，必须在10 s内观察结果，如超过10 s可出现假阳性。建议：用草酸盐抗凝的人血浆及肝素钠抗凝的兔血浆做玻片法凝固酶试验时，最好将血浆稀释到1:16～1:32范围。
作者简介：王露霞,女,1960年出生,主管技师
参考文献
1 [英]J.F麦克法丁主编. 医学细菌生化实验鉴定手册，北京：人民卫生出版社，1985. 53～54
2 单得恩，王秀珍，张金艳. 不同种属加不同抗凝剂的血浆对金黄色葡萄球菌凝固酶试验结果的影响. 河北医学院学报，1994，15(1)：11
(收稿日期：1998-04-08), 百拇医药
单位：王露霞 石凌波 徐德兴 刘刃 (广州军区广州总医院检验科，广州，510010)；陆勤 (解放军458医院检验科，广州，510602)
关键词：葡萄球菌；血浆凝固酶；抗凝剂
不同抗凝剂 摘要：目的 探讨玻片法血浆葡萄球菌凝固酶试验的最佳血浆、抗凝剂和稀释度并解决假阳性问题，提高其检测的敏感性和特异性。方法 用EDTA、肝素钠及以草酸盐抗凝及稀释度不同的人、兔血浆对200株葡萄球菌试管法进行玻片法血浆凝固酶试验，以试管法为金标准作分析比较。结果 分别用EDTA抗凝的兔血浆、肝素钠抗凝的兔血浆及草酸盐抗凝的人血浆，在不同的稀释度时其诊断的敏感性和特异性各不相同，以EDTA抗凝的兔血浆为最佳，但是EDTA抗凝的兔血浆原液和最佳稀释度无明显差异。结论 血浆浓度及采用何种血浆、何种抗凝剂直接影响玻片法血浆凝固酶试验的诊断效率。三种抗凝血浆最佳稀释度范围均为1:16～1:32。
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中图分类号：R446.5
血浆凝固酶试验是鉴定金黄色葡萄球菌的主要试验，其优点是快速、简便，但易出现假阳性。试管法虽然准确可靠，但繁琐复杂、反应时间长。为此，我们用人、兔的不同抗凝血浆和稀释血浆对临床分离的200株葡萄球菌进行玻片法血浆凝固酶试验，以试管法为金标准，探讨玻片法血浆凝固酶试验的最佳血浆、抗凝剂和稀释度，从而解决了假阳性问题。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 菌株来源 200株葡萄球菌从本院临床病人的血、伤口分泌物、前列腺液、引流液、脑脊液、尿及咽拭子分离所得。
1.1.2 参考菌株 金黄色葡萄球菌ATCC25923,表皮葡萄球菌A2TCC26069。
, 百拇医药 1.1.3 仪器与试剂 Vitek-AMS 自动微生物分析仪，法国Bio Meriec公司制造；AMS专用革兰氏阳性菌鉴定卡(GPI卡)；混合人血浆、家兔血浆；1%草酸盐(北京生化试剂厂)；250 U/ml肝素钠(上海生物化学制药厂)；108 mg/L EDAT-Na2(北京化工厂)。
1.1.4《医学试验评价系统软件》由本科研制提供。
1.2 方法
1.2.1 常规菌株鉴定 革兰氏染色镜检， 触酶试验，菌落形态，溶血状态，葡萄糖O-F试验，甘露醇发酵试验，耐热DNA及生化反应。菌落鉴定按《全国临床检验操作规程》(第二版)。
1.2.2 玻片法 血浆原液、1:2、1:4、1:8、1:16、1:32、1:64和1:128于清洁玻片上，各挑取2个葡萄球菌落与上述血浆混合，10 s内观察结果，出现肉眼可见的粗大颗粒或小凝块为阳性，否则为阴性。以标准株金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球作阳性与阴性对照，并以同样的方法用生理盐水作空白对照。
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1.2.3 试管法 取无菌试管7支，分别加血浆原液、1:2、1:4、1:8、1:16、1:32、1:64稀释血浆各0.5 ml，各管加待检的生理盐水菌悬液0.5 ml(菌液的浓度为一个麦氏单位)。实际的稀释度分别为1:2、1:4、1:8、1:16、1:32、1:64和1:128，混匀后放置37 ℃水浴中，每30 min观察一次结果，阳性多在30 min到2 h出现凝固。阴性均在24 h内仍不出现凝固。同样以标准菌株金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌作阳性、阴性对照，并以同样的方法用生理盐水作空白对照。
2 结果
2.1 在200株葡萄球菌中EDTA抗凝的兔血浆、肝素钠抗凝的兔血浆和草酸盐抗凝的人血浆在不同的稀释度，其诊断的敏感性和特异性各不相同。EDTA抗凝血浆原液敏感性94%、特异性93%，1:16和1:32敏感性100%，特异性99%；肝素钠抗凝血浆原液敏感性94%、特异性78%,1:16和1:32敏感性100%，特异性99%；草酸盐抗凝人血浆原液敏感性94%，特异性48%，1:16和1:32敏感性100%，特异性99%。可见不同抗凝剂的人、兔血浆最佳稀释范围均在1:161:32。
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3 讨论
玻片法血浆凝固酶试验是鉴定金黄色葡萄球菌应用已久的方法。虽然此法快捷、简便、直观，但由于各实验室所用的血浆来源、抗凝剂不一致，使试验结果存在一定的差异。本实验室结果表明，EDTA抗凝的兔血浆，肝素钠抗凝的兔血浆与草酸盐抗凝的人血浆原液诊断的特异性分别为93%、78%和48%。这可能与不同的血浆中所含凝固酶反应因子(CRF)不同有关[1]。不同血浆、抗凝剂在同一稀释度下，其诊断的敏感性、特异性有很大的差别；即使是同一血浆，稀释度不同，其诊断的敏感性、特异性也有较大差别。但用EDTA抗凝的兔血浆做玻片法凝固酶试验，血浆原液与血浆最佳稀释度没有明显的差别。由于兔血浆的收集较人血浆的收集繁锁，大多数实验室都采用人血浆。然而，草酸盐抗凝的人血浆和肝素钠抗凝的兔血浆假阳性为51.5%(85/165)、22.4%(37/165)，故不应该用血浆原液来做玻片法凝固酶试验，应选用最佳稀释度，以降低假阳性。三者最佳稀释度范围均为1:16～1:32。有文献报道[2]，用肝素抗凝的兔血浆做凝固酶试验无假阳性结果，本实验与文献报道有差异。近几年来许多文献都报道玻片法凝固酶试验用新鲜的兔血浆或人血浆，没有注重强调血浆所用的抗凝剂，只有在《全国临床检验操作规程》上强调用EDTA抗凝的兔血浆为最好。从本实验结果来看，草酸盐抗凝的人血浆和肝素钠抗凝的兔血浆原液玻片法凝固酶试验都存在假阳性。
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本试验中观察到兔血浆要比人血浆凝集模式好，且出结果快。但兔血浆凝固酶试验在时间观察上也是非常关键的，必须在10 s内观察结果，如超过10 s可出现假阳性。建议：用草酸盐抗凝的人血浆及肝素钠抗凝的兔血浆做玻片法凝固酶试验时，最好将血浆稀释到1:16～1:32范围。
作者简介：王露霞,女,1960年出生,主管技师
参考文献
1 [英]J.F麦克法丁主编. 医学细菌生化实验鉴定手册，北京：人民卫生出版社，1985. 53～54
2 单得恩，王秀珍，张金艳. 不同种属加不同抗凝剂的血浆对金黄色葡萄球菌凝固酶试验结果的影响. 河北医学院学报，1994，15(1)：11
(收稿日期：1998-04-08), 百拇医药