薄层扫描法测定黄柏胶囊中盐酸小檗碱的含量
作者：周晓英
单位：成都市第二药品检验所，四川 成都 610501
关键词：薄层扫描法；盐酸小檗碱；黄柏胶囊
成都中医药大学学报000324 摘 要： 目的：建立黄柏胶囊中盐酸小檗碱的含量测定方法。方法：采用双波长薄层扫描法，测定波长为428nm， 参比波长为520nm。结果：平均回收率为98.6%， RSD＝1.35%(n=6)，线形范围为0.45-2.28μɡ，r＝0.9998。结果：方法准确、简便、重复性好，适合该制剂中盐酸小檗碱的含量测定。
中图分类号： R284.2 文献标识码：A 文章编号：1004-0668(2000)03-0046-01
黄柏胶囊是常用中药制剂，由黄柏单味药提取物制成，其质量标准收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第5册 ，但无含量测定项目。目前市售黄柏药材质量差异大，时有将黄柏中盐酸小檗碱提取后作黄柏药材出售的情况，为更好地控制质量，采用双波长薄层扫描法测定黄柏胶囊中主要有效成分-盐酸小檗碱的含量。方法回收率高，重复性好，可为标准修定提供参考。
, 百拇医药
1 材料
岛津CS-9000型波长薄层扫描仪(日本)，定量毛细管(日本)，PBQ-薄层自动铺板器(重庆)；硅胶G(青岛海洋华工厂)，盐酸小檗碱对照品(中国药品生物制品鉴定所)，试药均为AR，黄柏胶囊均为四川科创制药有限公司生产。
2 方法与结果
2.1 供试品溶液与对照品溶液的制备
取黄柏胶囊内容物0.3 g，精密称定，置索式提取器中，加甲醇150 mL，提取至无色，回收甲醇至一定体积，移至50 mL容量瓶，用热甲醇洗净容器，洗液并入容量瓶，加甲醇至刻度，作为供试品溶液。另取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1 mL含0.4 mg的溶液，作为对照品溶液。
2.2 实验条件
(1)薄层条件：采用0.5%CMC-Na为粘合剂的的硅胶G板，105℃烘1 h。展开剂为正丁醇-冰乙酸-水(7-1-2)，展距10 cm。
, 百拇医药
(2)扫描条件：对盐酸小檗碱对照品和样品进行光谱扫描，结果均在428 nm有最大吸收，选择λs=428 nm 、λR=520 nm，双波长反射法锯齿扫描，狭缝=0.4×0.4 mm，检测信号为面积。
2.3 线型关系考察
精密量取对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 μL，分别点于同一薄层板上，按上述条件展开，扫描测定。结果表明在0.45～2.28 μg呈良好的线型关系，回归方程为Y=46940X+3520 r=0.9998。
2.4 精密度试验
(1)同板精密度：取供试品溶液，在同一薄层板上点5个斑点，分别测定面积峰，求得RSD为1.4%。
(2)异板精密度 取同一供试品溶液，分别点于5块薄层板上，测定含量，求得RSD=1.9%。
, 百拇医药
2.5 稳定性试验
取供试品溶液，点样，展开，挥干溶剂后每30 min扫描1次。结果4 h内基本稳定，RSD=1.4%。
2.6 重复性试验
取同一供试品5份，精密称定，分别按样品测定项下的方法测定，求得RSD=2.1%。
2.7 回收率试验
精密称取已知含量的供试品，分别精密加入盐酸小檗碱对照品，依法测定。结果见表1。
表1 回收率试验表
样品含量
(mg)
对照品加入量
, 百拇医药
(mg)
测得总量
(mg)
回收率
(%)
X(%)
RSD(%)
1
4.9265
4.1072
9.0250
99.79
2
, 百拇医药
5.2616
4.1072
9.3547
99.66
3
5.9565
5.1340
11.0370
98.96
98.59
1.3
4
5.9895
, 百拇医药
5.1340
10.9412
96.45
5
6.0102
6.1608
12.0335
97.77
6
6.5480
6.1608
12.6425
98.92
, http://www.100md.com
2.8 样品测定
精密吸取对照品溶液2 μL与4 μL， 供试品溶液4 μL ，分别交叉点于同一薄层板上，按上述条件展开，晾干，定位后扫描。结果见表2。
表2 样品含量测定 批 号
980101
990401
990501
991001
含量(mg/粒)
16.68
15.44
19.96
, 百拇医药
15.02
RSD(%)
1.9
2.1
2.4
1.5
3 讨论
3.1 目前在含盐酸小檗碱的中成药质量标准中，含量测定多采用柱层析分离、紫外分光光度法测定的方法，分离效果较差，多存在空白干扰，不能准确地测定盐酸小檗碱的含量。近年来，对薄层荧光扫描法测定盐酸小檗碱含量的研究报道较多，此法灵敏度高，特别适合测定含量较低的物质。考虑“黄柏胶囊”的盐酸小檗碱含量较高，我们采用了一般的分光光度计检测器，用未配置荧光检测器的仪器也可测定。
3.2 本实验过程中，曾参照文献对提取、展开、扫描条件进行了比较选择：(1)分别采用盐酸-甲醇(1∶100)与甲醇作为提取溶剂，测定结果无明显差异；(2)用《中国药典》1995年版黄柏项下的展开剂A：苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-浓氨试液(6∶3∶1.5∶1.5∶0.5)，及展开剂B：乙酸乙酯- 无水乙醇-甲酸(6∶2∶1) 试验，结果室温变化对展开效果影响较大，展开剂A在点样量稍大的情况下，还产生拖尾现象，而我们采用的展开剂展开效果好，并且稳定，宜于推广。
, http://www.100md.com
3.3 本法分离效果好、测定结果准确、重复性好、简便、易行，可作为“黄柏胶囊”质量标准的含量测定方法。
作者简介：周晓英，女，1961年9月生；主管中药师；研究方向：中药检验和中药质量研究。
参考文献
1，中华人民共和国卫生部.中国药典Ⅰ部[M].广州：广东科学技术出版社，1995.
2，王宝王.中成药质量标准与标准物质研究[M].北京：中国医药科技出版社，1994.114，144，271
(收稿日期：2000-07-05), http://www.100md.com
单位：成都市第二药品检验所，四川 成都 610501
关键词：薄层扫描法；盐酸小檗碱；黄柏胶囊
成都中医药大学学报000324 摘 要： 目的：建立黄柏胶囊中盐酸小檗碱的含量测定方法。方法：采用双波长薄层扫描法，测定波长为428nm， 参比波长为520nm。结果：平均回收率为98.6%， RSD＝1.35%(n=6)，线形范围为0.45-2.28μɡ，r＝0.9998。结果：方法准确、简便、重复性好，适合该制剂中盐酸小檗碱的含量测定。
中图分类号： R284.2 文献标识码：A 文章编号：1004-0668(2000)03-0046-01
黄柏胶囊是常用中药制剂，由黄柏单味药提取物制成，其质量标准收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第5册 ，但无含量测定项目。目前市售黄柏药材质量差异大，时有将黄柏中盐酸小檗碱提取后作黄柏药材出售的情况，为更好地控制质量，采用双波长薄层扫描法测定黄柏胶囊中主要有效成分-盐酸小檗碱的含量。方法回收率高，重复性好，可为标准修定提供参考。
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1 材料
岛津CS-9000型波长薄层扫描仪(日本)，定量毛细管(日本)，PBQ-薄层自动铺板器(重庆)；硅胶G(青岛海洋华工厂)，盐酸小檗碱对照品(中国药品生物制品鉴定所)，试药均为AR，黄柏胶囊均为四川科创制药有限公司生产。
2 方法与结果
2.1 供试品溶液与对照品溶液的制备
取黄柏胶囊内容物0.3 g，精密称定，置索式提取器中，加甲醇150 mL，提取至无色，回收甲醇至一定体积，移至50 mL容量瓶，用热甲醇洗净容器，洗液并入容量瓶，加甲醇至刻度，作为供试品溶液。另取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1 mL含0.4 mg的溶液，作为对照品溶液。
2.2 实验条件
(1)薄层条件：采用0.5%CMC-Na为粘合剂的的硅胶G板，105℃烘1 h。展开剂为正丁醇-冰乙酸-水(7-1-2)，展距10 cm。
, 百拇医药
(2)扫描条件：对盐酸小檗碱对照品和样品进行光谱扫描，结果均在428 nm有最大吸收，选择λs=428 nm 、λR=520 nm，双波长反射法锯齿扫描，狭缝=0.4×0.4 mm，检测信号为面积。
2.3 线型关系考察
精密量取对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 μL，分别点于同一薄层板上，按上述条件展开，扫描测定。结果表明在0.45～2.28 μg呈良好的线型关系，回归方程为Y=46940X+3520 r=0.9998。
2.4 精密度试验
(1)同板精密度：取供试品溶液，在同一薄层板上点5个斑点，分别测定面积峰，求得RSD为1.4%。
(2)异板精密度 取同一供试品溶液，分别点于5块薄层板上，测定含量，求得RSD=1.9%。
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2.5 稳定性试验
取供试品溶液，点样，展开，挥干溶剂后每30 min扫描1次。结果4 h内基本稳定，RSD=1.4%。
2.6 重复性试验
取同一供试品5份，精密称定，分别按样品测定项下的方法测定，求得RSD=2.1%。
2.7 回收率试验
精密称取已知含量的供试品，分别精密加入盐酸小檗碱对照品，依法测定。结果见表1。
表1 回收率试验表
样品含量
(mg)
对照品加入量
, 百拇医药
(mg)
测得总量
(mg)
回收率
(%)
X(%)
RSD(%)
1
4.9265
4.1072
9.0250
99.79
2
, 百拇医药
5.2616
4.1072
9.3547
99.66
3
5.9565
5.1340
11.0370
98.96
98.59
1.3
4
5.9895
, 百拇医药
5.1340
10.9412
96.45
5
6.0102
6.1608
12.0335
97.77
6
6.5480
6.1608
12.6425
98.92
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2.8 样品测定
精密吸取对照品溶液2 μL与4 μL， 供试品溶液4 μL ，分别交叉点于同一薄层板上，按上述条件展开，晾干，定位后扫描。结果见表2。
表2 样品含量测定 批 号
980101
990401
990501
991001
含量(mg/粒)
16.68
15.44
19.96
, 百拇医药
15.02
RSD(%)
1.9
2.1
2.4
1.5
3 讨论
3.1 目前在含盐酸小檗碱的中成药质量标准中，含量测定多采用柱层析分离、紫外分光光度法测定的方法，分离效果较差，多存在空白干扰，不能准确地测定盐酸小檗碱的含量。近年来，对薄层荧光扫描法测定盐酸小檗碱含量的研究报道较多，此法灵敏度高，特别适合测定含量较低的物质。考虑“黄柏胶囊”的盐酸小檗碱含量较高，我们采用了一般的分光光度计检测器，用未配置荧光检测器的仪器也可测定。
3.2 本实验过程中，曾参照文献对提取、展开、扫描条件进行了比较选择：(1)分别采用盐酸-甲醇(1∶100)与甲醇作为提取溶剂，测定结果无明显差异；(2)用《中国药典》1995年版黄柏项下的展开剂A：苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-浓氨试液(6∶3∶1.5∶1.5∶0.5)，及展开剂B：乙酸乙酯- 无水乙醇-甲酸(6∶2∶1) 试验，结果室温变化对展开效果影响较大，展开剂A在点样量稍大的情况下，还产生拖尾现象，而我们采用的展开剂展开效果好，并且稳定，宜于推广。
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3.3 本法分离效果好、测定结果准确、重复性好、简便、易行，可作为“黄柏胶囊”质量标准的含量测定方法。
作者简介：周晓英，女，1961年9月生；主管中药师；研究方向：中药检验和中药质量研究。
参考文献
1，中华人民共和国卫生部.中国药典Ⅰ部[M].广州：广东科学技术出版社，1995.
2，王宝王.中成药质量标准与标准物质研究[M].北京：中国医药科技出版社，1994.114，144，271
(收稿日期：2000-07-05), http://www.100md.com