RP-HPLC测定治伤消瘀丸中士的宁的含量
作者：郭社民
单位：河南省濮阳市药品检验所 457000
关键词：
治伤消瘀丸是由马钱子 治伤消瘀丸是由马钱子、麻黄等十三味中药材与自然铜粉组成的复方制剂，具有消瘀退肿的功能，广泛用于骨骼与关节损伤和瘀肿疼痛。其中马钱子所含的士的宁为主要有效成份，且有剧毒。原质量标准[1]中未建立士的宁含量测定方法，本文采用高效液相色谱法测定样品中士的宁的含量，方法简便，结果满意。
1 仪器与试药
LC-5A高效液相色谱仪，SPD-6A检测器(日本岛津)；士的宁对照品(中国药品生物制品检定所供)；磷酸二氢钾、甲醇、氯仿等均为分析纯。
2 实验方法与结果
, http://www.100md.com
2.1 色谱条件 色谱柱：μ Bondapak C18柱(5.0mm×150mm)；流动相：甲醇-0.01mol/L磷酸二氢钾(27∶73)，用10%磷酸溶液调节至pH2.5；流速：0.7ml/min，检测波长为254nm；柱温：室温。
2.2 线性关系试验 精密称取士的宁对照品约10mg，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得对照品溶液。分别精密量取对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、2.0、4.0ml置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得系列标准溶液，依次精密量取10μl注入液相色谱仪，记录峰面积，以峰面积(A)对浓度(C)回归，得回归方程为：C=-0.0531+6.42×10-7A，r=0.9998，结果表明，士的宁的浓度在0.02～0.40mg/ml范围内，与峰面积呈良好的线性关系。
2.3 精密度试验 精密吸取标准溶液(0.1mg/ml)10μl，重复进样6次，峰面积积分值的RSD为0.43%。
, 百拇医药
2.4 重现性试验 对同批样品，按样品制备方法，平行制备6份，依法测定，含量值的RSD为1.85%。
2.5 回收率试验 分别精密称取已测知含量的样品一定量，精密定量加入士的宁对照品溶液，按样品测定方法制备供试液，依法测定，测得回收率平均值：98.60%，RSD为0.72%(n=5)。
2.6 样品含量测定 对照品溶液的配制：精密称取士的宁对照品10mg，置100ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
供试品溶液的制备：取本品20g研细，取细粉约5g，精密称定，置100ml具塞三角瓶中，加浓氨试液2ml润湿后，精密加入氯仿50ml，振摇30分钟，浸泡24小时，滤过，精密量取续滤液25ml，置分液漏斗中，用0.5mol/L硫酸溶液萃取3次，每次15ml，合并提取液，滤过，用少量0.5mol/L硫酸液洗涤滤器，将滤液全部转入50ml量瓶中，再用0.5mol/L硫酸液稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。
, 百拇医药
分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，以外标法计算样品的含量，结果见表，色谱图见图。
表 样品测定结果(n=3)
批 号
971002
971003
971004
971005
971101
含量(mg/g)
0.84
0.83
, 百拇医药
0.86
0.85
0.84
图 液相色谱图
(1)阴性对照品 (2)士的宁对照品 (3)样品：a.士的宁峰
3 讨论
3.1 在治伤消瘀丸中，不仅含有生物碱士的宁，同时含有马钱子碱、麻黄碱等多种生物碱，为了很好地分离和测定士的宁，色谱法的选择很重要，反相色谱法与正相色谱法相比具有分离效果好，灵敏度高，流动相易选择，操作简便等优点，且适合生物碱的分离分析[2]，因此选用反相高效液相色谱法。在本色谱条件下，士的宁的保留时间为14.43min，经阴性对照试验结果表明其它组份对士的宁的测定无干扰。
3.2 经稳定性试验，结果表明供试液在48小时内无变化。本方法可用来控制治伤消瘀丸中士的宁的含量。
参考文献
1 卫生部药品标准.中药成方制剂.第十册，1995：98
2 王俊德，商振华，郁蕴璐，等.高效液相色谱法.北京：中国石化出版社，1992：119、279, 百拇医药
单位：河南省濮阳市药品检验所 457000
关键词：
治伤消瘀丸是由马钱子 治伤消瘀丸是由马钱子、麻黄等十三味中药材与自然铜粉组成的复方制剂，具有消瘀退肿的功能，广泛用于骨骼与关节损伤和瘀肿疼痛。其中马钱子所含的士的宁为主要有效成份，且有剧毒。原质量标准[1]中未建立士的宁含量测定方法，本文采用高效液相色谱法测定样品中士的宁的含量，方法简便，结果满意。
1 仪器与试药
LC-5A高效液相色谱仪，SPD-6A检测器(日本岛津)；士的宁对照品(中国药品生物制品检定所供)；磷酸二氢钾、甲醇、氯仿等均为分析纯。
2 实验方法与结果
, http://www.100md.com
2.1 色谱条件 色谱柱：μ Bondapak C18柱(5.0mm×150mm)；流动相：甲醇-0.01mol/L磷酸二氢钾(27∶73)，用10%磷酸溶液调节至pH2.5；流速：0.7ml/min，检测波长为254nm；柱温：室温。
2.2 线性关系试验 精密称取士的宁对照品约10mg，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得对照品溶液。分别精密量取对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、2.0、4.0ml置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得系列标准溶液，依次精密量取10μl注入液相色谱仪，记录峰面积，以峰面积(A)对浓度(C)回归，得回归方程为：C=-0.0531+6.42×10-7A，r=0.9998，结果表明，士的宁的浓度在0.02～0.40mg/ml范围内，与峰面积呈良好的线性关系。
2.3 精密度试验 精密吸取标准溶液(0.1mg/ml)10μl，重复进样6次，峰面积积分值的RSD为0.43%。
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2.4 重现性试验 对同批样品，按样品制备方法，平行制备6份，依法测定，含量值的RSD为1.85%。
2.5 回收率试验 分别精密称取已测知含量的样品一定量，精密定量加入士的宁对照品溶液，按样品测定方法制备供试液，依法测定，测得回收率平均值：98.60%，RSD为0.72%(n=5)。
2.6 样品含量测定 对照品溶液的配制：精密称取士的宁对照品10mg，置100ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
供试品溶液的制备：取本品20g研细，取细粉约5g，精密称定，置100ml具塞三角瓶中，加浓氨试液2ml润湿后，精密加入氯仿50ml，振摇30分钟，浸泡24小时，滤过，精密量取续滤液25ml，置分液漏斗中，用0.5mol/L硫酸溶液萃取3次，每次15ml，合并提取液，滤过，用少量0.5mol/L硫酸液洗涤滤器，将滤液全部转入50ml量瓶中，再用0.5mol/L硫酸液稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。
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分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，以外标法计算样品的含量，结果见表，色谱图见图。
表 样品测定结果(n=3)
批 号
971002
971003
971004
971005
971101
含量(mg/g)
0.84
0.83
, 百拇医药
0.86
0.85
0.84
图 液相色谱图
(1)阴性对照品 (2)士的宁对照品 (3)样品：a.士的宁峰
3 讨论
3.1 在治伤消瘀丸中，不仅含有生物碱士的宁，同时含有马钱子碱、麻黄碱等多种生物碱，为了很好地分离和测定士的宁，色谱法的选择很重要，反相色谱法与正相色谱法相比具有分离效果好，灵敏度高，流动相易选择，操作简便等优点，且适合生物碱的分离分析[2]，因此选用反相高效液相色谱法。在本色谱条件下，士的宁的保留时间为14.43min，经阴性对照试验结果表明其它组份对士的宁的测定无干扰。
3.2 经稳定性试验，结果表明供试液在48小时内无变化。本方法可用来控制治伤消瘀丸中士的宁的含量。
参考文献
1 卫生部药品标准.中药成方制剂.第十册，1995：98
2 王俊德，商振华，郁蕴璐，等.高效液相色谱法.北京：中国石化出版社，1992：119、279, 百拇医药