用壳聚糖作澄清剂制备化斑口服液
作者：宋炳生 李汉保 谢虞升
单位：南京军区南京总医院 210002
关键词：
中草药000721 化斑口服液是由赤芍、白芍、珍珠母、夏枯草等多味中药组成，具有滋补肝肾、理气、化瘀等功能，临床用于黄褐斑、雀斑、色素沉着等有较好的疗效。原生产工艺采用水煎醇沉法，需耗用大量酒精，成本较高，现改用壳聚糖作澄清剂代替醇沉法工艺[1]，取得了较好的澄清效果，为考察其对有效成分有无影响，采用TLC法比较了两种工艺中的芍药等的层析行为有无差异，并用HPLC法[2]比较了两种工艺所得产品中芍药苷的含量。
1 仪器与试药
1.1 仪器：P200高压恒流泵、不锈钢柱(柱长 25 cm，内径 4.6 mm)、UV200紫外可变波长检测器、WDL-色谱工作站(中国科学院大连化学物理研究所 国家色谱中心产品)。
, 百拇医药
1.2 试药：芍药苷对照品：中国药品生物制品检定所，壳聚糖：上海华凯科技贸易公司，甲醇：色谱纯。
2 实验方法及结果
2.1 对照品溶液的制备：取减压干燥至恒重的芍药苷一定量，精密称定，用50%甲醇配成一定浓度的溶液 (51.6 μg/mL)。
2.2 壳聚糖溶液的配制：取壳聚糖用1%的醋酸液配成1%的溶液。
2.3 供试品溶液的制备
2.3.1 化斑口服液的制备：按处方称取各药，水煎3次，煎液合并，浓缩成药水比为1∶1备用。
2.3.2 供试液的制备：取化斑口服液 5 mL 3 份，分别置3支试管中，第1管不加澄清剂，第2管加乙醇 5 mL，第3管加壳聚糖液 0.5 mL，摇匀放置，第3管 80 ℃加热 10 min，各管离心 10 min (3 000 r/min)，取上清液用正丁醇萃取4次，合并正丁醇液，挥去溶剂，残渣加 50%甲醇溶解，滤入 25 mL 量瓶中，并用同一溶剂洗涤容器及滤器，滤入量瓶中并定容至刻度，摇匀，为原液。取原液 1 mL 置 10 mL量瓶中，用50 %甲醇定容至刻度，摇匀，并以 0.45 μm滤膜滤过，作供试液用。
, 百拇医药
2.3.3 空白供试液的制备：按2.3.1化斑口服液的制备法，处方中除去赤、白芍后的其余药物依法制备，制成空白供试液。
2.4 芍药苷的TLC检识[3]：薄层板：硅胶 G-CMC-Na板，点样：取批号1供试品原液及对照液各 10 μL，展开剂：氯仿-甲醇-乙酸乙酯(8∶4∶1)，显色剂：10%硫酸液。置氨蒸气饱和下展开后烘数分钟，置紫外光灯 (365 nm)下检视，样品色谱与对照品色谱在相应位置上，显相同颜色的斑点，另两个批号显相同的结果。
2.5 色谱条件：色谱柱 Spherisorb C18 5μm，柱长 25 cm，内径4.6mm，流动相 50%甲醇，检测波长 225 nm，流速 0.8 mL/min，柱前压 12 Mpa，进样 10 μL，芍药苷色谱峰保留时间 4.69 min，供试品在同一保留时间有同样的峰，而空白对照无此峰。
, http://www.100md.com 2.6 标准曲线的制备：取芍药苷对照液 (51.6 μg/mL)0.3，0.6，0.9，10 μL，测定峰面积。
回归方程 Y=872.5 X-8 056(μg),r=0.9994
2.7 精密度试验：取上项4号对照液，分别进样 10 μL，共6次，测得峰面积为99 270，RSD=1.56%(n=6)。
2.8 加样回收试验：精密量取供试液(含芍药苷15.24 μg/mL)，分别精密加入芍药苷对照液(10.43 μg/mL)，混匀后进样 10 μL，测得加样回收率为 100.8%，RSD=1.6%(n=6)。
2.9 供试品测定：取供试品液，进样 10 μL，按外标法，由回归方程计算含量，结果见表1。
表1 化斑口服液芍药苷比较 批号
, 百拇医药
澄清剂
峰面积
含量(μg/mL)
1
不加
941 920
120.89
乙醇
845 460
109.83
壳聚糖
76 765
97.22
, 百拇医药
2
不加
102 200
126.37
乙醇
77 870
98.48
壳聚糖
100 500
124.42
3
不加
96 060
, http://www.100md.com
119.32
乙醇
80 860
101.90
壳聚糖
74 690
94.84
3 讨论
3.1 用澄清剂处理过的药液与乙醇沉淀的药液及未经澄清的药液，经薄层层析检测相比较，在相同的位置上，样品与对照品有相同颜色的斑点，颜色、大小似无差别。也就是说对这一种成分影响不大。
3.2 在本试验条件下，含多味中药的复方制剂中的芍药苷仍能获得较好的分离，空白样品无干扰峰，平均加样回收率为 100.8%，RSD 在 2.0%以内。
, http://www.100md.com
3.3 HPLC 测定结果证明，壳聚糖澄清剂对芍药苷的含量与醇沉法比较无明显差异，澄清效果均较理想，证明天然澄清剂可以代替乙醇作澄清剂。对其它成分有无影响，有待进一步研究。
参考文献
1，钱亚南，刘信顺，张先芬，等.中草药，1995，26(7)：349
2，倪 健，任天池.中草药，1995，26(12)：637
3，刘训红，王玉玺，房克慧，等.中药材薄层色谱鉴别.天津：天津科学技术出版社，1989：90
(1999-07-20收稿), http://www.100md.com
单位：南京军区南京总医院 210002
关键词：
中草药000721 化斑口服液是由赤芍、白芍、珍珠母、夏枯草等多味中药组成，具有滋补肝肾、理气、化瘀等功能，临床用于黄褐斑、雀斑、色素沉着等有较好的疗效。原生产工艺采用水煎醇沉法，需耗用大量酒精，成本较高，现改用壳聚糖作澄清剂代替醇沉法工艺[1]，取得了较好的澄清效果，为考察其对有效成分有无影响，采用TLC法比较了两种工艺中的芍药等的层析行为有无差异，并用HPLC法[2]比较了两种工艺所得产品中芍药苷的含量。
1 仪器与试药
1.1 仪器：P200高压恒流泵、不锈钢柱(柱长 25 cm，内径 4.6 mm)、UV200紫外可变波长检测器、WDL-色谱工作站(中国科学院大连化学物理研究所 国家色谱中心产品)。
, 百拇医药
1.2 试药：芍药苷对照品：中国药品生物制品检定所，壳聚糖：上海华凯科技贸易公司，甲醇：色谱纯。
2 实验方法及结果
2.1 对照品溶液的制备：取减压干燥至恒重的芍药苷一定量，精密称定，用50%甲醇配成一定浓度的溶液 (51.6 μg/mL)。
2.2 壳聚糖溶液的配制：取壳聚糖用1%的醋酸液配成1%的溶液。
2.3 供试品溶液的制备
2.3.1 化斑口服液的制备：按处方称取各药，水煎3次，煎液合并，浓缩成药水比为1∶1备用。
2.3.2 供试液的制备：取化斑口服液 5 mL 3 份，分别置3支试管中，第1管不加澄清剂，第2管加乙醇 5 mL，第3管加壳聚糖液 0.5 mL，摇匀放置，第3管 80 ℃加热 10 min，各管离心 10 min (3 000 r/min)，取上清液用正丁醇萃取4次，合并正丁醇液，挥去溶剂，残渣加 50%甲醇溶解，滤入 25 mL 量瓶中，并用同一溶剂洗涤容器及滤器，滤入量瓶中并定容至刻度，摇匀，为原液。取原液 1 mL 置 10 mL量瓶中，用50 %甲醇定容至刻度，摇匀，并以 0.45 μm滤膜滤过，作供试液用。
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2.3.3 空白供试液的制备：按2.3.1化斑口服液的制备法，处方中除去赤、白芍后的其余药物依法制备，制成空白供试液。
2.4 芍药苷的TLC检识[3]：薄层板：硅胶 G-CMC-Na板，点样：取批号1供试品原液及对照液各 10 μL，展开剂：氯仿-甲醇-乙酸乙酯(8∶4∶1)，显色剂：10%硫酸液。置氨蒸气饱和下展开后烘数分钟，置紫外光灯 (365 nm)下检视，样品色谱与对照品色谱在相应位置上，显相同颜色的斑点，另两个批号显相同的结果。
2.5 色谱条件：色谱柱 Spherisorb C18 5μm，柱长 25 cm，内径4.6mm，流动相 50%甲醇，检测波长 225 nm，流速 0.8 mL/min，柱前压 12 Mpa，进样 10 μL，芍药苷色谱峰保留时间 4.69 min，供试品在同一保留时间有同样的峰，而空白对照无此峰。
, http://www.100md.com 2.6 标准曲线的制备：取芍药苷对照液 (51.6 μg/mL)0.3，0.6，0.9，10 μL，测定峰面积。
回归方程 Y=872.5 X-8 056(μg),r=0.9994
2.7 精密度试验：取上项4号对照液，分别进样 10 μL，共6次，测得峰面积为99 270，RSD=1.56%(n=6)。
2.8 加样回收试验：精密量取供试液(含芍药苷15.24 μg/mL)，分别精密加入芍药苷对照液(10.43 μg/mL)，混匀后进样 10 μL，测得加样回收率为 100.8%，RSD=1.6%(n=6)。
2.9 供试品测定：取供试品液，进样 10 μL，按外标法，由回归方程计算含量，结果见表1。
表1 化斑口服液芍药苷比较 批号
, 百拇医药
澄清剂
峰面积
含量(μg/mL)
1
不加
941 920
120.89
乙醇
845 460
109.83
壳聚糖
76 765
97.22
, 百拇医药
2
不加
102 200
126.37
乙醇
77 870
98.48
壳聚糖
100 500
124.42
3
不加
96 060
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119.32
乙醇
80 860
101.90
壳聚糖
74 690
94.84
3 讨论
3.1 用澄清剂处理过的药液与乙醇沉淀的药液及未经澄清的药液，经薄层层析检测相比较，在相同的位置上，样品与对照品有相同颜色的斑点，颜色、大小似无差别。也就是说对这一种成分影响不大。
3.2 在本试验条件下，含多味中药的复方制剂中的芍药苷仍能获得较好的分离，空白样品无干扰峰，平均加样回收率为 100.8%，RSD 在 2.0%以内。
, http://www.100md.com
3.3 HPLC 测定结果证明，壳聚糖澄清剂对芍药苷的含量与醇沉法比较无明显差异，澄清效果均较理想，证明天然澄清剂可以代替乙醇作澄清剂。对其它成分有无影响，有待进一步研究。
参考文献
1，钱亚南，刘信顺，张先芬，等.中草药，1995，26(7)：349
2，倪 健，任天池.中草药，1995，26(12)：637
3，刘训红，王玉玺，房克慧，等.中药材薄层色谱鉴别.天津：天津科学技术出版社，1989：90
(1999-07-20收稿), http://www.100md.com