荷叶大豆及其合剂调脂活性部位的研究
作者：杜力军 孙虹 李敏 金文 徐丽珍
单位：杜力军 孙虹 李敏 金文 徐丽珍(中国医学科学院药用植物研究所 北京 100094)；杜力军(中国协和医科大学 药用植物研究所 北京 100094)
关键词：荷叶；大豆；调血脂
中草药000727摘 要 目的：通过体内外实验探讨荷叶大豆调脂的活性部位及其作用特点。方法：以急性高脂血症小鼠为整体模型观察药物对血清胆固醇及甘油三酯的影响。体外给药观察药物对肝细胞合成胆固醇的影响。结果：荷叶大豆的水提取部分及其生物碱和黄酮均有调脂作用。大豆黄酮对体外肝细胞合成胆固醇有抑制的趋势。结论：荷叶和大豆均有调脂作用，其主要活性部位在黄酮和生物碱，其作用特点在于促进胆固醇的代谢方面。
Studies on the Active Components in the Leaf of Nelumbo nucifera and Black Soybean and Their Mixture with Blood Lipid Regulating Effect
, http://www.100md.com
Du Lijun
(Institute of Medicinal Plant Developments, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College Beijing 100094)
Sun Hong
(Institute of Medicinal Plant Developments, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College Beijing 100094)
Li Min
(Institute of Medicinal Plant Developments, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College Beijing 100094)
, 百拇医药
Jin Wen
(Institute of Medicinal Plant Developments, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College Beijing 100094)
Xu Lizhen
(Institute of Medicinal Plant Developments, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College Beijing 100094)
Abstract To study the effect of the leaf of Nelumbo necifera Gaertn. and black soybean (Glycine soja Sieb. et Zucc.) on blood lipid level, in order to identify the active Components of the two herbs by experiments in vivo and in vitro. By determining the change of serum, cholesterol (TC) and triglyceride (TG) of acute hyperlipemic mouse model after drug administration. By culturing liver cells with the test drugs to assess the effect on TC synthesis. The aqueous extracts of both test drugs and their alkaloid and flavonoid contents could lower serum TC and TG levels of hyperlipemic mice and inhibit the synthesis of TC by liver cells in vitro. Both lotus leaf and soybean could lower blood lipid levels due to their water solublc active Component of flavonoids and alkaloids.
, http://www.100md.com
key words the leaf of Nelumbo necifera Gaertn. black soybean blood lipid
传统医学认为荷叶具有清暑利湿，升发清阳，止血的作用。近年的研究表明，荷叶内的黄酮具有调血脂活性。临床用荷叶水煎剂口服有一定的调脂作用[1]。大豆古代即有入药的记载，且多以黑豆入药。如李时珍在《本草纲目》中指出：大豆有黑黄褐青斑数色，黑者名乌豆，可入药及充食，作豉。黄者可作腐，榨油，造酱。余但可作腐及炒食而已。又黑大豆具有“制诸风热，活血，解诸毒”的作用。
近年来对大豆的研究逐渐增多，如从大豆皂苷，大豆磷脂和大豆异黄酮等就抗肿瘤、抗炎、心肌动作电位等方面进行了探讨。但对于其调脂作用的临床及实验研究则较少报道。二药配伍其调脂作用及其活性部位的分布更未见报道。故对此进行研究，对于阐明二药及其配伍的调脂作用及其可能的物质基础都具有重要的理论意义。
, 百拇医药
1 材料
1.1 药物：大豆、荷叶及其配伍水提取物由徐州百谷神生物工程有限公司提供。其中生物碱和黄酮部分由本所植物化学研究室制备。
1.2 实验动物：KM小鼠，购自中国医学科学院实验动物所，合格证号：(96)01-3001，体重(31.84±6.99) g、(21.49±0.44) g。
1.3 试剂与测试仪器：总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)试剂盒购自北京中生生物工程高技术公司，批号分别为：990101，990211，按试剂盒要求进行测试。以ZX-1A型半自动生化分析仪测试(北京中生生物工程高技术公司生产)。
2 方法
2.1 不同药物对急性高脂血症小鼠血脂代谢的作用：将小鼠随机分组，并给予不同剂量的药物3 d。于第3天每只ip 50%蛋黄液0.5 ml，注射后24 h摘眼球取血，分离血清，测TC和TG。
, 百拇医药
2.2 不同药物对体外培养肝细胞合成胆固醇的作用[2]。取胎小鼠，75%乙醇浸泡3 min。无菌取肝脏，分离肝细胞，将其调整至1×108cell/mL，用24孔板5%CO2、37 ℃培养。每孔 1 mL，48 h 后换入无血清培养液，16 h 后加入不同浓度的药物，每孔加入血清0.1 mL。继续培养 24 h，取培养液测 TC，将细胞冻融后分离上清液测 TC。每剂量做3复孔。
2.3 对照组及给药途径：对照组给予等体积生理盐水。阳性对照药为辛伐它汀(simvastatin)，规格：5 mg/片，批号：98015，美国默沙东药厂生产。整体试验均为口服给药。给药体积 0.2 mL/10 g体重。
2.4 试验数据：以 EXCEl 软件处理，组间 t 检验。
3 结果
, 百拇医药
3.1 荷叶大豆水提物及有效部位对血脂代谢的作用：见表1，2。
表1 不同药物水提取部分对TC和
TG的影响(
±s,n=6) 分组
药物
剂量
(g/kg)
TC
(mmol/L)
TG
(mmol/L)
, 百拇医药 模型
生理盐水
-
11.96±2.59
1.86±0.47
模型
辛伐它汀
0.0023
9.84±1.22
1.76±0.14
模型
荷叶水部分
3.2
, 百拇医药
12.80±2.29
1.47±0.26
模型
荷叶水部分
0.8
12.79±2.42
1.37±0.08*
模型
荷叶大豆水部分
3.2
10.29±2.77
2.07±0.87
, 百拇医药
模型
荷叶大豆水部分
0.8
10.64±2.36
1.36±0.12*
模型
大豆水部分
3.2
8.68±1.69*
1.55±0.13
模型
大豆水部分
, 百拇医药
0.8
9.29±2.51
1.71±0.55
正常
生理盐水
-
6.19±0.72**
1.29±0.04*
与模型+生理盐水组相比：*P<0.05 **P<0.01表2 不同药物有放部位对小鼠TC和
TG的影响(±s,n=8) 分组
, 百拇医药
药物
剂量
(g/kg)
TC
(mmol/L)
TG
(mmol/L)
正常
生理盐水
-
4.56±1.39**
0.81±0.37
, 百拇医药 模型
生理盐水
-
7.17±1.07
1.03±0.15
模型
荷叶大豆黄酮
800
6.57±0.99
0.92±0.05
模型
荷叶大豆黄酮
200
, 百拇医药
5.74±0.79**
0.96±0.18
模型
荷叶大豆生物碱
100
1.37±0.48
1.01±0.18
模型
荷叶大豆生物碱
25
7.43±0.77
0.71±0.34*
, http://www.100md.com
模型
荷叶黄酮
800
9.66±2.21
1.10±0.27
模型
荷叶黄酮
200
7.37±1.03
0.91±0.09*
模型
荷叶生物碱
, http://www.100md.com
100
6.89±0.61
0.85±0.05**
模型
荷叶生物碱
25
6.80±1.03
0.79±0.09**
模型
大豆黄酮
200
5.88±0.71*
, 百拇医药
0.97±0.04
模型
大豆黄酮
50
6.54±0.23
1.25±0.28
模型
辛伐它汀
2.3
4.84±0.36**
1.26±0.24
与模型+生理盐水组相比：*P<0.05 **P<0.01
, 百拇医药
3.2 不同药物有效部位对胆固醇合成的作用：见表3。
表3 不同药物有效部位对体外培养肝细胞
合成TC的影响(±s,n=3) 分组
药物
终浓度
(mg/mL)
TC(mmol/L)
冻融前
冻融后
无血浆培养
, 百拇医药 生理盐水
-
0.335±0.043*
0.313±0.068*
血浆培养
生理盐水
-
0.844±0.114
0.228±0.038
血浆培养
荷叶大豆黄酮
0.1
, 百拇医药
0.934±0.162
0.203±0.025
血浆培养
荷叶大豆生物碱
0.1
1.002±0.113
0.196±0.043
血浆培养
荷叶大豆生物碱
0.025
0.969±0.242
0.224±0.030
, 百拇医药
血浆培养
荷叶黄酮
0.4
1.214±0.168*
0.146±0.051*
血浆培养
荷叶黄酮
0.1
0.912±0.267
0.277±0.104
血浆培养
荷叶生物碱
, 百拇医药
0.1
0.887±0.132
0.189±0.035
血浆培养
荷叶生物碱
0.025
1.013±0.138
0.201±0.038
血浆培养
大豆黄酮
0.2
0.688±0.199△
, 百拇医药
0.301±0.069
血浆培养
大豆黄酮
0.05
0.763±0.102
0.233±0.009
血浆培养
辛伐它汀
0.011
0.819±0.128
0.217±0.003
与血浆培养+生理盐水组相比：*P<0.05 △P<0.3
, 百拇医药
4 讨论
荷叶和大豆的调脂作用近年来逐渐引起人们的注意。有人将荷叶粗提取物开发为调脂药物并以生物碱作为质控指标[3]。徐州百谷神生物工程有限公司则将二药配伍开发为调脂饮料。对大豆研究则主要集中在磷脂和皂苷部分。其作用多为抗氧化和抗肿瘤作用[4，5]。对于黄酮和生物碱的研究较少报道。为此，我们以急性高脂血症小鼠模型为主，对这两种成分进行了初筛。研究结果表明，水提部分大豆和荷叶均表现出一定的活性，其中以大豆作用明显。荷叶黄酮及生物碱，荷叶大豆的生物碱部分对急性高脂血症小鼠的TG有明显的抑制作用。大豆黄酮，荷叶黄酮和二药配伍的黄酮部分均对小鼠高胆固醇表现出明显的抑制作用。提示其降脂活性部位在黄酮和生物碱部分。
研究表明，肝细胞在无血清条件下培养6～16 h胞内TC合成酶活性明显增强，加入血清可促使TC合成[2]。体外培养肝细胞合成TC试验表明，荷叶黄酮和大豆黄酮均表现了一定的活性。大豆黄酮使肝细胞培养液及细胞内TC都有所降低。并呈一定的量效关系。表明对肝细胞TC合成有一定的抑制趋势。而荷叶黄酮在使肝细胞内TC降低的同时又使培养液TC明显升高。这一内外含量分离的现象有待于进一步研究。
, http://www.100md.com
荷叶大豆的水提取部分及生物碱部分，荷叶黄酮部分对TG均没有表现出明显的量效关系，且出现大剂量无效而小剂量有效的现象。例如，荷叶大豆水部分TG大剂量组(3.2 g/kg)为(2.07±0.87)mmol/L，其标准差为0.87，为均数的42.03%。对照组为(1.86±0.47)mmol/L，小剂量组(0.8 g/kg)为(1.36±0.12)mmol/L。分析其原因，可能与个体差异有关。同时也提示，大剂量未必就一定能表现出明显的活性。这些有待于进一步研究。
荷叶大豆主要表现在促进脂类代谢方面，对其合成的抑制作用较弱。其主要活性部位集中在黄酮上，其次是生物碱。
杜力军 男，教授，1990年毕业于成都中医药大学药学院，获医学博士学位。1992年军事医 学科学院毒物药物研究所访问研究。现任中国医学科学院中国协和医科大学药用植物研究所药理二室主任。研究方向：心脑血管药理。近五年来先后负责和承担国家及院课题9项。获 国家中医药科技进步奖1项。在国内外杂志上发表论文30 余篇。
, http://www.100md.com
参考文献
1，李广勋.中药药理毒理与临床.天津：天津科技翻译出版公司，1992：68
2，赵水平.临床血脂学.长沙：湖南科技出版社，1997：417
3，许腊英，刘运苟，叶泽秀，等.湖北中医杂志，1996，18(4)：302
4，卫永第，陈荣杰.白求恩医科大学学报，1996，22(4)：350
5，莫凤奎，朱澄云，黄松鹤，等.中国药物化学杂志，1997，7(2)：121
(1999-11-30收稿), http://www.100md.com
单位：杜力军 孙虹 李敏 金文 徐丽珍(中国医学科学院药用植物研究所 北京 100094)；杜力军(中国协和医科大学 药用植物研究所 北京 100094)
关键词：荷叶；大豆；调血脂
中草药000727摘 要 目的：通过体内外实验探讨荷叶大豆调脂的活性部位及其作用特点。方法：以急性高脂血症小鼠为整体模型观察药物对血清胆固醇及甘油三酯的影响。体外给药观察药物对肝细胞合成胆固醇的影响。结果：荷叶大豆的水提取部分及其生物碱和黄酮均有调脂作用。大豆黄酮对体外肝细胞合成胆固醇有抑制的趋势。结论：荷叶和大豆均有调脂作用，其主要活性部位在黄酮和生物碱，其作用特点在于促进胆固醇的代谢方面。
Studies on the Active Components in the Leaf of Nelumbo nucifera and Black Soybean and Their Mixture with Blood Lipid Regulating Effect
, http://www.100md.com
Du Lijun
(Institute of Medicinal Plant Developments, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College Beijing 100094)
Sun Hong
(Institute of Medicinal Plant Developments, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College Beijing 100094)
Li Min
(Institute of Medicinal Plant Developments, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College Beijing 100094)
, 百拇医药
Jin Wen
(Institute of Medicinal Plant Developments, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College Beijing 100094)
Xu Lizhen
(Institute of Medicinal Plant Developments, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College Beijing 100094)
Abstract To study the effect of the leaf of Nelumbo necifera Gaertn. and black soybean (Glycine soja Sieb. et Zucc.) on blood lipid level, in order to identify the active Components of the two herbs by experiments in vivo and in vitro. By determining the change of serum, cholesterol (TC) and triglyceride (TG) of acute hyperlipemic mouse model after drug administration. By culturing liver cells with the test drugs to assess the effect on TC synthesis. The aqueous extracts of both test drugs and their alkaloid and flavonoid contents could lower serum TC and TG levels of hyperlipemic mice and inhibit the synthesis of TC by liver cells in vitro. Both lotus leaf and soybean could lower blood lipid levels due to their water solublc active Component of flavonoids and alkaloids.
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key words the leaf of Nelumbo necifera Gaertn. black soybean blood lipid
传统医学认为荷叶具有清暑利湿，升发清阳，止血的作用。近年的研究表明，荷叶内的黄酮具有调血脂活性。临床用荷叶水煎剂口服有一定的调脂作用[1]。大豆古代即有入药的记载，且多以黑豆入药。如李时珍在《本草纲目》中指出：大豆有黑黄褐青斑数色，黑者名乌豆，可入药及充食，作豉。黄者可作腐，榨油，造酱。余但可作腐及炒食而已。又黑大豆具有“制诸风热，活血，解诸毒”的作用。
近年来对大豆的研究逐渐增多，如从大豆皂苷，大豆磷脂和大豆异黄酮等就抗肿瘤、抗炎、心肌动作电位等方面进行了探讨。但对于其调脂作用的临床及实验研究则较少报道。二药配伍其调脂作用及其活性部位的分布更未见报道。故对此进行研究，对于阐明二药及其配伍的调脂作用及其可能的物质基础都具有重要的理论意义。
, 百拇医药
1 材料
1.1 药物：大豆、荷叶及其配伍水提取物由徐州百谷神生物工程有限公司提供。其中生物碱和黄酮部分由本所植物化学研究室制备。
1.2 实验动物：KM小鼠，购自中国医学科学院实验动物所，合格证号：(96)01-3001，体重(31.84±6.99) g、(21.49±0.44) g。
1.3 试剂与测试仪器：总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)试剂盒购自北京中生生物工程高技术公司，批号分别为：990101，990211，按试剂盒要求进行测试。以ZX-1A型半自动生化分析仪测试(北京中生生物工程高技术公司生产)。
2 方法
2.1 不同药物对急性高脂血症小鼠血脂代谢的作用：将小鼠随机分组，并给予不同剂量的药物3 d。于第3天每只ip 50%蛋黄液0.5 ml，注射后24 h摘眼球取血，分离血清，测TC和TG。
, 百拇医药
2.2 不同药物对体外培养肝细胞合成胆固醇的作用[2]。取胎小鼠，75%乙醇浸泡3 min。无菌取肝脏，分离肝细胞，将其调整至1×108cell/mL，用24孔板5%CO2、37 ℃培养。每孔 1 mL，48 h 后换入无血清培养液，16 h 后加入不同浓度的药物，每孔加入血清0.1 mL。继续培养 24 h，取培养液测 TC，将细胞冻融后分离上清液测 TC。每剂量做3复孔。
2.3 对照组及给药途径：对照组给予等体积生理盐水。阳性对照药为辛伐它汀(simvastatin)，规格：5 mg/片，批号：98015，美国默沙东药厂生产。整体试验均为口服给药。给药体积 0.2 mL/10 g体重。
2.4 试验数据：以 EXCEl 软件处理，组间 t 检验。
3 结果
, 百拇医药
3.1 荷叶大豆水提物及有效部位对血脂代谢的作用：见表1，2。
表1 不同药物水提取部分对TC和
TG的影响(
±s,n=6) 分组药物
剂量
(g/kg)
TC
(mmol/L)
TG
(mmol/L)
, 百拇医药 模型
生理盐水
-
11.96±2.59
1.86±0.47
模型
辛伐它汀
0.0023
9.84±1.22
1.76±0.14
模型
荷叶水部分
3.2
, 百拇医药
12.80±2.29
1.47±0.26
模型
荷叶水部分
0.8
12.79±2.42
1.37±0.08*
模型
荷叶大豆水部分
3.2
10.29±2.77
2.07±0.87
, 百拇医药
模型
荷叶大豆水部分
0.8
10.64±2.36
1.36±0.12*
模型
大豆水部分
3.2
8.68±1.69*
1.55±0.13
模型
大豆水部分
, 百拇医药
0.8
9.29±2.51
1.71±0.55
正常
生理盐水
-
6.19±0.72**
1.29±0.04*
与模型+生理盐水组相比：*P<0.05 **P<0.01表2 不同药物有放部位对小鼠TC和
TG的影响(
±s,n=8) 分组, 百拇医药
药物
剂量
(g/kg)
TC
(mmol/L)
TG
(mmol/L)
正常
生理盐水
-
4.56±1.39**
0.81±0.37
, 百拇医药 模型
生理盐水
-
7.17±1.07
1.03±0.15
模型
荷叶大豆黄酮
800
6.57±0.99
0.92±0.05
模型
荷叶大豆黄酮
200
, 百拇医药
5.74±0.79**
0.96±0.18
模型
荷叶大豆生物碱
100
1.37±0.48
1.01±0.18
模型
荷叶大豆生物碱
25
7.43±0.77
0.71±0.34*
, http://www.100md.com
模型
荷叶黄酮
800
9.66±2.21
1.10±0.27
模型
荷叶黄酮
200
7.37±1.03
0.91±0.09*
模型
荷叶生物碱
, http://www.100md.com
100
6.89±0.61
0.85±0.05**
模型
荷叶生物碱
25
6.80±1.03
0.79±0.09**
模型
大豆黄酮
200
5.88±0.71*
, 百拇医药
0.97±0.04
模型
大豆黄酮
50
6.54±0.23
1.25±0.28
模型
辛伐它汀
2.3
4.84±0.36**
1.26±0.24
与模型+生理盐水组相比：*P<0.05 **P<0.01
, 百拇医药
3.2 不同药物有效部位对胆固醇合成的作用：见表3。
表3 不同药物有效部位对体外培养肝细胞
合成TC的影响(
±s,n=3) 分组药物
终浓度
(mg/mL)
TC(mmol/L)
冻融前
冻融后
无血浆培养
, 百拇医药 生理盐水
-
0.335±0.043*
0.313±0.068*
血浆培养
生理盐水
-
0.844±0.114
0.228±0.038
血浆培养
荷叶大豆黄酮
0.1
, 百拇医药
0.934±0.162
0.203±0.025
血浆培养
荷叶大豆生物碱
0.1
1.002±0.113
0.196±0.043
血浆培养
荷叶大豆生物碱
0.025
0.969±0.242
0.224±0.030
, 百拇医药
血浆培养
荷叶黄酮
0.4
1.214±0.168*
0.146±0.051*
血浆培养
荷叶黄酮
0.1
0.912±0.267
0.277±0.104
血浆培养
荷叶生物碱
, 百拇医药
0.1
0.887±0.132
0.189±0.035
血浆培养
荷叶生物碱
0.025
1.013±0.138
0.201±0.038
血浆培养
大豆黄酮
0.2
0.688±0.199△
, 百拇医药
0.301±0.069
血浆培养
大豆黄酮
0.05
0.763±0.102
0.233±0.009
血浆培养
辛伐它汀
0.011
0.819±0.128
0.217±0.003
与血浆培养+生理盐水组相比：*P<0.05 △P<0.3
, 百拇医药
4 讨论
荷叶和大豆的调脂作用近年来逐渐引起人们的注意。有人将荷叶粗提取物开发为调脂药物并以生物碱作为质控指标[3]。徐州百谷神生物工程有限公司则将二药配伍开发为调脂饮料。对大豆研究则主要集中在磷脂和皂苷部分。其作用多为抗氧化和抗肿瘤作用[4，5]。对于黄酮和生物碱的研究较少报道。为此，我们以急性高脂血症小鼠模型为主，对这两种成分进行了初筛。研究结果表明，水提部分大豆和荷叶均表现出一定的活性，其中以大豆作用明显。荷叶黄酮及生物碱，荷叶大豆的生物碱部分对急性高脂血症小鼠的TG有明显的抑制作用。大豆黄酮，荷叶黄酮和二药配伍的黄酮部分均对小鼠高胆固醇表现出明显的抑制作用。提示其降脂活性部位在黄酮和生物碱部分。
研究表明，肝细胞在无血清条件下培养6～16 h胞内TC合成酶活性明显增强，加入血清可促使TC合成[2]。体外培养肝细胞合成TC试验表明，荷叶黄酮和大豆黄酮均表现了一定的活性。大豆黄酮使肝细胞培养液及细胞内TC都有所降低。并呈一定的量效关系。表明对肝细胞TC合成有一定的抑制趋势。而荷叶黄酮在使肝细胞内TC降低的同时又使培养液TC明显升高。这一内外含量分离的现象有待于进一步研究。
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荷叶大豆的水提取部分及生物碱部分，荷叶黄酮部分对TG均没有表现出明显的量效关系，且出现大剂量无效而小剂量有效的现象。例如，荷叶大豆水部分TG大剂量组(3.2 g/kg)为(2.07±0.87)mmol/L，其标准差为0.87，为均数的42.03%。对照组为(1.86±0.47)mmol/L，小剂量组(0.8 g/kg)为(1.36±0.12)mmol/L。分析其原因，可能与个体差异有关。同时也提示，大剂量未必就一定能表现出明显的活性。这些有待于进一步研究。
荷叶大豆主要表现在促进脂类代谢方面，对其合成的抑制作用较弱。其主要活性部位集中在黄酮上，其次是生物碱。
杜力军 男，教授，1990年毕业于成都中医药大学药学院，获医学博士学位。1992年军事医 学科学院毒物药物研究所访问研究。现任中国医学科学院中国协和医科大学药用植物研究所药理二室主任。研究方向：心脑血管药理。近五年来先后负责和承担国家及院课题9项。获 国家中医药科技进步奖1项。在国内外杂志上发表论文30 余篇。
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(1999-11-30收稿), http://www.100md.com