大鼠小肠循环液中替硝唑的差示分光光度测定法
作者：李晶 吴宏斌 陈义 史春胜
单位：李晶(佳木斯大学化学与药学院)；吴宏斌(佳木斯大学化学与药学院)；陈义(齐齐哈尔市医药公司)；史春胜(佳木斯中药厂)
关键词：替硝唑；差示分光光度法；酚红；大鼠小肠循环液
黑龙江医药科学000308 提要 目的：建立大鼠小肠液循环液中的替硝唑的测定方法。方法：采用差示分光光度法，测定波长为318nm和291nm，溶剂的pH分别为pH2和pH5。结果：标准曲线在4.8μg/ml-19.2μg/ml范围内呈良好的线性关系，高中低3个浓度的日内RSD小于1.65%，日间RSD小于2.28%，回收率为98.6%-101.7%。结论：该法可准确测定大鼠小肠循环液中的替硝唑。
Determination of tinidazole in rat small intestine circulation
, http://www.100md.com
solution using differential spectrophotometry
Li Jing, et al
Abstract Objective: To establish the determination of tinidazole in rat small intestine circulation solution. Methods: Differential spectrophotometry was used with wavelength of 291nm or 318nm with. The solvent pH as 2.0 or 5.0. Results: The calibration curve was linear between 4.8μg/ml to 19.2μg/ml. The relative standard deviations within a day and day to day were less than 1.65% and 2.28% at the three different concentrations. The recovery was 98.6% to 101.7%. Conclusion: Tinidazole in rat small intestine circulation solution can be determined accurately by this method.
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Key words tinidazole; differential spectrophotometry; phenol red; rat small intestine circulation solution
替硝唑(Tinidazole)是继甲硝唑后研制的硝基咪唑类抗厌氧菌及抗原虫新药，近年来被广泛用于临床。准确测定替硝唑在体小肠吸收模型回流液中的浓度，对进而为研究小肠吸收提供准备数据至关重要。根据替硝唑、回流模型中肠液和回流液体积标示物酚红的紫外吸收特征及差示分光光度法的特点[1,2]，我们建立了大鼠小肠循环液中替硝唑的测定方法。该方法简便准确，可排除肠液和酚红的干扰，结果满意。
1 仪器、试药与动物
UV-VIS 756型分光光度计(上分三厂)，RDB-Ⅱ蠕动泵(沙洲仪器仪表厂)；替硝唑(符合卫生部暂行标准，WS-192(X-160)-94)；酚红和其它试剂均为分析纯；pH2、pH5磷酸盐缓冲液，Kreb-Ringer营养液[3]；Wister大鼠(♂200～300g佳木斯大学动物室提供)。
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2 实验部分
2.1 试液的制备
2.1.1 贮备液
精密称取酚红0.1g置100ml容量瓶中，加适量水微热使其溶解，放置成室温后，加水至刻度作为贮备液I° 精密称取替硝唑0.48g置100ml量瓶中，加Krebs-Ringr营养液适量溶解后，加营养液至刻度，作为贮备Ⅱ。
2.1.2 回流液
按大鼠在体回流实验方法和要求[4,5]，装好循环装置，加50ml Krebs-ringer营养液，加搅拌子搅拌，水浴(37±0.5)℃保温，进行循环，分别于不同时间取样，作为空白肠循环液。精密吸取贮备液Ⅰ 2ml，置50ml量瓶中，加营养液至刻度，置循环装置中，循环2h后取样，作为肠循环液。
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2.2 测定方法
精密吸取待测液2份，每份0.2ml，各置具塞试管中，分别加入pH2和pH5缓冲液各4.8ml，混匀。以前者作为参比液，后者作为样品液在290nm和318nm处测定吸光度，代入工作方程计算出替硝唑浓度值。
2.3 差示光谱
替硝唑、酚红、小肠液的差示吸收光谱如图1。从中可见：替硝唑在318nm有最大吸收峰，在291nm具有零吸收；酚红及小肠液在上述波长处有一定的吸收，但两波长处吸收值相同；不同鼠的空白肠循环液的差示光谱未见差别。
图1 紫外差示吸收光谱
1-替哨唑(10μg/ml) 2-酚红(4μg/ml) 3-小肠液
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2.4 吸光度加合性和稳定性
替硝唑、酚红、小肠液及三者混合液的测定表明，在pH2和pH5条件下291nm和318nm的吸光度加合性良好，混合液的吸光度2h内无改变。
2.5 线性与范围
由贮备液Ⅱ制备系列浓度替硝唑标准溶液。经测定得，在4.8μg/ml～19.2μg/ml浓度范围内，替硝唑的光度值A[△(△A318-△A291]与浓度C的线性关系良好。回归方程为：C=61.48A-0.9738 r=0.9993(n=7)
2.5 回收率和精密度
取贮备液Ⅱ及肠循环液，制备替硝唑浓度为0.12mg/ml、0.30mg/ml和0.48mg/ml 3种浓度溶液各10份。取3个浓度的替硝唑溶液各5份，于当日进行测定，计算日内RSD及回收率，3个浓度的其它5份置冰箱中冷藏，每隔1d进行测定，计算日间RSD及回收率。结果见附表。
, 百拇医药
附表 回收率和精密度结果(n=5) 加入量(μg/ml)
日内
日间
回收率(%)
RSD(%)
回收率(%)
RSD(%)
4.8
100.6
2.28
101.7
2.41
, 百拇医药
12.0
98.60
1.71
100.4
1.81
19.2
100.5
1.65
99.37
1.77
3 讨论
酚红及肠液在0.2mol/L HCl、pH2、pH5及pH8溶剂中的紫外光谱均不相同，在285～325nm波长范围内，pH2与pH5条件下的吸收光谱分别接近，而此时的替硝唑的紫外吸收有较大的改变，故选择pH2及pH5构造差示的条件。在所涉及的条件下，酚红与肠液在318nm的差示值均不为零，对测定有一定的干扰，故通过波长的方法加以排除。
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参考文献
1.陆彬.药剂学试验.北京:人民卫生出版社,1994;132～133
2.姚桂棣,安登魁.差示分光光度法在药物制剂分析上的应用,药物分析杂志,1984,4(4):250
3.崔景斌,吴文惠,胡晋.拉马宁碱大鼠小肠吸收的研究.沈阳药学院学报,1994,11(2):79～82
4.毛凤斐,屠锡德,朱家壁,等.黄芩甙大鼠吸收的研究、.南京药学院学报,1984,15(1):61～65
5.村田敏郎,有田隆一(朱家壁等译).生物药剂学.北京:人民卫生出版社,1979:50～51
(2000-01-19收稿 2000-03-20修回), 百拇医药
单位：李晶(佳木斯大学化学与药学院)；吴宏斌(佳木斯大学化学与药学院)；陈义(齐齐哈尔市医药公司)；史春胜(佳木斯中药厂)
关键词：替硝唑；差示分光光度法；酚红；大鼠小肠循环液
黑龙江医药科学000308 提要 目的：建立大鼠小肠液循环液中的替硝唑的测定方法。方法：采用差示分光光度法，测定波长为318nm和291nm，溶剂的pH分别为pH2和pH5。结果：标准曲线在4.8μg/ml-19.2μg/ml范围内呈良好的线性关系，高中低3个浓度的日内RSD小于1.65%，日间RSD小于2.28%，回收率为98.6%-101.7%。结论：该法可准确测定大鼠小肠循环液中的替硝唑。
Determination of tinidazole in rat small intestine circulation
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solution using differential spectrophotometry
Li Jing, et al
Abstract Objective: To establish the determination of tinidazole in rat small intestine circulation solution. Methods: Differential spectrophotometry was used with wavelength of 291nm or 318nm with. The solvent pH as 2.0 or 5.0. Results: The calibration curve was linear between 4.8μg/ml to 19.2μg/ml. The relative standard deviations within a day and day to day were less than 1.65% and 2.28% at the three different concentrations. The recovery was 98.6% to 101.7%. Conclusion: Tinidazole in rat small intestine circulation solution can be determined accurately by this method.
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Key words tinidazole; differential spectrophotometry; phenol red; rat small intestine circulation solution
替硝唑(Tinidazole)是继甲硝唑后研制的硝基咪唑类抗厌氧菌及抗原虫新药，近年来被广泛用于临床。准确测定替硝唑在体小肠吸收模型回流液中的浓度，对进而为研究小肠吸收提供准备数据至关重要。根据替硝唑、回流模型中肠液和回流液体积标示物酚红的紫外吸收特征及差示分光光度法的特点[1,2]，我们建立了大鼠小肠循环液中替硝唑的测定方法。该方法简便准确，可排除肠液和酚红的干扰，结果满意。
1 仪器、试药与动物
UV-VIS 756型分光光度计(上分三厂)，RDB-Ⅱ蠕动泵(沙洲仪器仪表厂)；替硝唑(符合卫生部暂行标准，WS-192(X-160)-94)；酚红和其它试剂均为分析纯；pH2、pH5磷酸盐缓冲液，Kreb-Ringer营养液[3]；Wister大鼠(♂200～300g佳木斯大学动物室提供)。
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2 实验部分
2.1 试液的制备
2.1.1 贮备液
精密称取酚红0.1g置100ml容量瓶中，加适量水微热使其溶解，放置成室温后，加水至刻度作为贮备液I° 精密称取替硝唑0.48g置100ml量瓶中，加Krebs-Ringr营养液适量溶解后，加营养液至刻度，作为贮备Ⅱ。
2.1.2 回流液
按大鼠在体回流实验方法和要求[4,5]，装好循环装置，加50ml Krebs-ringer营养液，加搅拌子搅拌，水浴(37±0.5)℃保温，进行循环，分别于不同时间取样，作为空白肠循环液。精密吸取贮备液Ⅰ 2ml，置50ml量瓶中，加营养液至刻度，置循环装置中，循环2h后取样，作为肠循环液。
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2.2 测定方法
精密吸取待测液2份，每份0.2ml，各置具塞试管中，分别加入pH2和pH5缓冲液各4.8ml，混匀。以前者作为参比液，后者作为样品液在290nm和318nm处测定吸光度，代入工作方程计算出替硝唑浓度值。
2.3 差示光谱
替硝唑、酚红、小肠液的差示吸收光谱如图1。从中可见：替硝唑在318nm有最大吸收峰，在291nm具有零吸收；酚红及小肠液在上述波长处有一定的吸收，但两波长处吸收值相同；不同鼠的空白肠循环液的差示光谱未见差别。
图1 紫外差示吸收光谱
1-替哨唑(10μg/ml) 2-酚红(4μg/ml) 3-小肠液
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2.4 吸光度加合性和稳定性
替硝唑、酚红、小肠液及三者混合液的测定表明，在pH2和pH5条件下291nm和318nm的吸光度加合性良好，混合液的吸光度2h内无改变。
2.5 线性与范围
由贮备液Ⅱ制备系列浓度替硝唑标准溶液。经测定得，在4.8μg/ml～19.2μg/ml浓度范围内，替硝唑的光度值A[△(△A318-△A291]与浓度C的线性关系良好。回归方程为：C=61.48A-0.9738 r=0.9993(n=7)
2.5 回收率和精密度
取贮备液Ⅱ及肠循环液，制备替硝唑浓度为0.12mg/ml、0.30mg/ml和0.48mg/ml 3种浓度溶液各10份。取3个浓度的替硝唑溶液各5份，于当日进行测定，计算日内RSD及回收率，3个浓度的其它5份置冰箱中冷藏，每隔1d进行测定，计算日间RSD及回收率。结果见附表。
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附表 回收率和精密度结果(n=5) 加入量(μg/ml)
日内
日间
回收率(%)
RSD(%)
回收率(%)
RSD(%)
4.8
100.6
2.28
101.7
2.41
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12.0
98.60
1.71
100.4
1.81
19.2
100.5
1.65
99.37
1.77
3 讨论
酚红及肠液在0.2mol/L HCl、pH2、pH5及pH8溶剂中的紫外光谱均不相同，在285～325nm波长范围内，pH2与pH5条件下的吸收光谱分别接近，而此时的替硝唑的紫外吸收有较大的改变，故选择pH2及pH5构造差示的条件。在所涉及的条件下，酚红与肠液在318nm的差示值均不为零，对测定有一定的干扰，故通过波长的方法加以排除。
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参考文献
1.陆彬.药剂学试验.北京:人民卫生出版社,1994;132～133
2.姚桂棣,安登魁.差示分光光度法在药物制剂分析上的应用,药物分析杂志,1984,4(4):250
3.崔景斌,吴文惠,胡晋.拉马宁碱大鼠小肠吸收的研究.沈阳药学院学报,1994,11(2):79～82
4.毛凤斐,屠锡德,朱家壁,等.黄芩甙大鼠吸收的研究、.南京药学院学报,1984,15(1):61～65
5.村田敏郎,有田隆一(朱家壁等译).生物药剂学.北京:人民卫生出版社,1979:50～51
(2000-01-19收稿 2000-03-20修回), 百拇医药