晚期妊娠引产产妇及其新生儿血浆中的米非司酮浓度测定
作者：高晨 赵志刚 王越 罗劲松 任淑萍
单位：高晨 赵志刚 王越 罗劲松 任淑萍(北京天坛医院 100050)
关键词：米非司酮；HPLC；妊娠晚期；新生儿
药物分析杂志000217 摘要 目的：研究米非司酮用于晚期妊娠引产对新生儿的影响，评价其对母婴的安全性。方法：采用高效液相色谱法测定产妇及新生儿血浆中的米非司酮浓度。结果：服药组产妇产程活跃期血浆中的米非司酮浓度为(323±137)ng.mL-1、脐血浓度为(95.9±51.0)ng.mL-1，其新生儿出生后24 h的血药浓度为(39.8±20.7)ng.mL-1，均与对照组有显著差异(P<0.05)，且脐血浓度与产妇产程活跃期血浆中的米非司酮浓度成正相关，相关系数为0.72，脐/母血药浓度比值为0.30。出生后72 h血药浓度(27.7±9.9)ng.mL-1与对照组比无显著差异(P>0.05)。结论：该研究为米非司酮用于晚期妊娠引产的安全性提供一定的科学依据。
, 百拇医药
HPLC Assay for Mifepristone in Plasma of Parturient and Their Newborns
Gao Chen, Zhao Zhigang, Wang Yue and Ren Shuping
(Tiantan Hospital, Beijing 100050)
Abstract Objective：To study the effect upon the newborns after the parturient treatment with mifepristone.Methods:The concentration of mifepristone in the plasma of parturient，their newborns and umbilical cord was assayed with HPLC.Results:After administrated with mifepristone, the parturient, umbilical plasma level and their newborns’ plasma concentration 24 h and 72 h after their birth were detected to be (323±137)ng.mL-1, (95.9±51.0)ng.mL-1，(39.8±20.7)ng.mL-1;compared with control group, the difference were statistically significant; and 72 h after their birth was (27.7±9.9)ng.mL-1, there wasnt significant difference with control group ；the umbilical plasma concentration had positive correlation with the maternal, the ratio of umbilical/maternal mifepristone level was 0.30,the correlation coefficient was 0.72.Conclusion:This study will provide a scientific basis for the safety of using mifepristone on parturient.
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Key words mifepristone, HPLC, newborn, parturient
米非司酮用于晚期妊娠引产现已得到较广泛的研究[1,2]，但关于米非司酮用于晚期妊娠引产对新生儿的安全性是主要待研究问题[3]。本文用HPLC法测定产妇静脉血、脐血、新生儿血浆中的米非司酮浓度，通过随机对照研究阐述了3者之间的关系，并对服用与未服用米非司酮产妇所生新生儿血浆中米非司酮的浓度进行了比较，为评价药物安全性及临床用药提供参考。
1 药品与试剂
米非司酮对照品(北京第三制药厂，含量85.0% ，批号971115)；米非司酮片(北京第三制药厂，每片50 mg)；米索前列醇片(西尔大药厂 每片200 μg)；甲醇(色谱纯 )；乙腈(色谱纯)；正己烷、二氯甲烷(分析纯)重蒸后使用。
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2 仪器和色谱条件
Waters 510泵；Waters 484 UV检测器；色谱柱 :OUYA-RP18(4.6 mm×150 mm)；流动相：甲醇-乙腈-水(42∶28∶30)，pH=4.7；流速1.0 mL。min-1；检测波长302 nm；进样量20 μL。
3 对照品储备液
取米非司酮对照品适量,用甲醇溶解制成100 μg。mL-1的溶液, 4 ℃冷藏备用。临用时，用甲醇配制成所需浓度的标准液。
4 受试者
38名健康初产妇及其新生儿。经产妇同意，随机将38名健康初产妇分为服药组和对照组各19名。产妇年龄24～30岁，妊娠38～41周，经体检肝、肾和心功能正常。单胎头位，有引产指征。
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5 给药方法和标本收集
服药组产妇服用米非司酮100 mg,qd, 连服2 d,第4 d加米索前列醇片。于服用米非司酮前、产程活跃期(宫口开大3 cm以上)、婴儿出生时、出生后24及72 h抽取产妇静脉血、脐血、新生儿静脉血各3 mL，置于肝素管中，分离血浆后置-30 ℃冰箱中待测。对照组不给予米非司酮,于产程活跃期(宫口开大3 cm以上)及婴儿出生时、出生后24 h、72 h抽取产妇静脉血、脐血、新生儿静脉血,处理同上。
6 样品处理方法
取血浆样品1 mL，加入正己烷-二氯甲烷(7∶4)的处理液5 mL，振荡，离心。吸取上清液，下层重复处理。合并上清液，于68 ℃挥干， 残渣加100 μL甲醇溶解后进样20 μL。
7 结果
7.1 标准曲线建立 取空白血浆1 mL加入米非司酮标准液使血浆米非司酮浓度分别为10，100，200，300， 400，500 ng。mL-1。处理同样品，测定所得数据以峰面积为纵坐标、浓度为横坐标，经计算机回归得到线性回归方程为：
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Y=171.7X-373.2 r=0.998 7
色谱图见图1。
图1 色谱图
A.空白血浆 B.空白血浆+米非司酮
1.米非司酮
7.2 米非司酮的回收率测定和精密度试验 取空白血浆1 mL加入米非司酮标准液使血浆药物含量分别为50，200，400 ng。mL-1。处理同样品，处理后每个浓度分别在日内、日间重复进样，根据经血浆处理后的米非司酮标准曲线计算其相对回收率以及测定日内差和日间差，结果见表1。
表1 米非司酮相对回收率和精密度(n=4) 理论浓度
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/ng。mL-1
实测浓度
/ng。mL-1
相对回收率
±RSD/%
日内
RSD/%
日间
RSD/%
100
96.81
96.81±2.34
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1.4
3.4
200
202.1
101.0±1.76
1.5
3.2
400
394.1
98.52±1.60
1.3
2.3
7.3 米非司酮血药浓度 服药前静脉血中米非司酮浓度为(23.2±13.0)ng。mL-1，服药组活跃期产妇静脉血中药物浓度为(323±137) ng。mL-1，对照组为(112±51.0)ng。mL-1；服药组脐血中药物浓度为(95.9±49.3)ng。mL-1，对照组为(35.0±20.0)ng。mL-1；服药组产妇的新生儿出生后24 h血药浓度为(39.8±20.7)ng。mL-1，对照组为(26.7±11.6)ng。mL-1；服药组新生儿出生后72 h血药浓度为(27.7±9.9)ng。mL-1， 对照组为(21.5±11.9)ng。mL-1。服药组产妇活跃期、脐血及其新生儿出生后24 h血药浓度与对照组有显著差异(P<0.05), 出生后72 h血药浓度与对照组无显著差异。脐血浓度与产程活跃期血浆中的米非司酮浓度呈正相关，相关系数为0.72，脐/母血药比值为0.30。以出生时间t为横坐标，以米非司酮浓度C为纵坐标作图，见图2。
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图2 新生儿米非司酮血药浓度比较图
1.服药组 2.对照组
7.4 引产效果及新生儿结局 服药组及对照组促宫颈成熟有效率分别为100%和80%，引产总有效率分别为 92.10%和76.66% ，2组间比较差异具显著性(P<0.05)。2组产后出血，新生儿平均体重，Apgar评分及羊水性状比较均无显著差异(P>0.05)。
8 讨论
8.1 文献〔4,5〕报道过多种米非司酮HPLC测定方法,多数采用干冰-丙酮浴冷冻的方法提取米非司酮及其代谢产物，操作复杂。以正己烷-二氯甲烷的混合液提取米非司酮及其代谢产物的改进方法操作简便，且同样可以得到较好的精密度,保证待测样品中药物浓度在线性范围内。
8.2 并用药物米索前列醇剂量小、药物代谢快、血浆药物浓度很低，本实验条件无法检出该剂量下血浆中的米索前列醇[6]。
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8.3 未服药产妇在分娩时体内产生少量内源性米非司酮，其浓度远远小于服药组，服药组的促宫颈成熟有效率和引产有效率均显著高于对照组，说明服药组产妇血浆米非司酮浓度为有效药物作用浓度，米非司酮具有促宫颈成熟及引产作用。
8.4 结果显示产妇口服米非司酮可透过胎盘屏障，与文献[7，8]报道相符，透过量与产程活跃期的血药浓度呈正相关，并影响新生儿的血药浓度，使脐血和新生儿的24 h血药浓度明显高于对照组， 72 h血药浓度降至与对照组无显著差异, 新生儿结局良好，但对新生儿是否有远期影响，尚待进一步研究、随访。
参考文献
1，Frydman R, Baton C, Lelaidier C, et al. Mifepristone for induction of labor .Lancet, 1991,337：488
, http://www.100md.com 2，Lelaidier C, Baton C, Benifla JI, et al. Mifepristone for labor induction after previous casarean section. Br J Obstet Gynecol, 1994,101:501
3，苏慧，李莪，翁梨驹等. 米非司酮用于足月妊娠引产的临床观察.中华妇产科杂志,1996,31(11):676
4，叶智厚，张国庆，白秀梅等. 高效液相色谱法测定人体血液中RU486含量.色谱,1987,5(3):179
5，邵庆翔，桑国卫，姜丽霞等 .抗孕激素米非司酮及其代谢产物的药代动力学.中国临床药理学杂志, 1993,9 (3):144
6，Karim MJ .Antiulcer prostaglandin misoprostol ：single multiple dose pharmacokinetic prafile .Prostaglandins,1987,33(Suppl):40
, http://www.100md.com
7， Hill NCW, Selinger M , Feroguson J, et al. The placental transfer of mifepristone during the second trimester and its influence upon maternal and fetal steroid concentration .Br J Obstet gynecol, 1990,97:406
8，Frydman R，Taylor S，Ulmann A. Transplacental passage of mifepristone. Lancet, 1985, 2:1019
(本文于1999年4月16日收到), 百拇医药
单位：高晨 赵志刚 王越 罗劲松 任淑萍(北京天坛医院 100050)
关键词：米非司酮；HPLC；妊娠晚期；新生儿
药物分析杂志000217 摘要 目的：研究米非司酮用于晚期妊娠引产对新生儿的影响，评价其对母婴的安全性。方法：采用高效液相色谱法测定产妇及新生儿血浆中的米非司酮浓度。结果：服药组产妇产程活跃期血浆中的米非司酮浓度为(323±137)ng.mL-1、脐血浓度为(95.9±51.0)ng.mL-1，其新生儿出生后24 h的血药浓度为(39.8±20.7)ng.mL-1，均与对照组有显著差异(P<0.05)，且脐血浓度与产妇产程活跃期血浆中的米非司酮浓度成正相关，相关系数为0.72，脐/母血药浓度比值为0.30。出生后72 h血药浓度(27.7±9.9)ng.mL-1与对照组比无显著差异(P>0.05)。结论：该研究为米非司酮用于晚期妊娠引产的安全性提供一定的科学依据。
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HPLC Assay for Mifepristone in Plasma of Parturient and Their Newborns
Gao Chen, Zhao Zhigang, Wang Yue and Ren Shuping
(Tiantan Hospital, Beijing 100050)
Abstract Objective：To study the effect upon the newborns after the parturient treatment with mifepristone.Methods:The concentration of mifepristone in the plasma of parturient，their newborns and umbilical cord was assayed with HPLC.Results:After administrated with mifepristone, the parturient, umbilical plasma level and their newborns’ plasma concentration 24 h and 72 h after their birth were detected to be (323±137)ng.mL-1, (95.9±51.0)ng.mL-1，(39.8±20.7)ng.mL-1;compared with control group, the difference were statistically significant; and 72 h after their birth was (27.7±9.9)ng.mL-1, there wasnt significant difference with control group ；the umbilical plasma concentration had positive correlation with the maternal, the ratio of umbilical/maternal mifepristone level was 0.30,the correlation coefficient was 0.72.Conclusion:This study will provide a scientific basis for the safety of using mifepristone on parturient.
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Key words mifepristone, HPLC, newborn, parturient
米非司酮用于晚期妊娠引产现已得到较广泛的研究[1,2]，但关于米非司酮用于晚期妊娠引产对新生儿的安全性是主要待研究问题[3]。本文用HPLC法测定产妇静脉血、脐血、新生儿血浆中的米非司酮浓度，通过随机对照研究阐述了3者之间的关系，并对服用与未服用米非司酮产妇所生新生儿血浆中米非司酮的浓度进行了比较，为评价药物安全性及临床用药提供参考。
1 药品与试剂
米非司酮对照品(北京第三制药厂，含量85.0% ，批号971115)；米非司酮片(北京第三制药厂，每片50 mg)；米索前列醇片(西尔大药厂 每片200 μg)；甲醇(色谱纯 )；乙腈(色谱纯)；正己烷、二氯甲烷(分析纯)重蒸后使用。
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2 仪器和色谱条件
Waters 510泵；Waters 484 UV检测器；色谱柱 :OUYA-RP18(4.6 mm×150 mm)；流动相：甲醇-乙腈-水(42∶28∶30)，pH=4.7；流速1.0 mL。min-1；检测波长302 nm；进样量20 μL。
3 对照品储备液
取米非司酮对照品适量,用甲醇溶解制成100 μg。mL-1的溶液, 4 ℃冷藏备用。临用时，用甲醇配制成所需浓度的标准液。
4 受试者
38名健康初产妇及其新生儿。经产妇同意，随机将38名健康初产妇分为服药组和对照组各19名。产妇年龄24～30岁，妊娠38～41周，经体检肝、肾和心功能正常。单胎头位，有引产指征。
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5 给药方法和标本收集
服药组产妇服用米非司酮100 mg,qd, 连服2 d,第4 d加米索前列醇片。于服用米非司酮前、产程活跃期(宫口开大3 cm以上)、婴儿出生时、出生后24及72 h抽取产妇静脉血、脐血、新生儿静脉血各3 mL，置于肝素管中，分离血浆后置-30 ℃冰箱中待测。对照组不给予米非司酮,于产程活跃期(宫口开大3 cm以上)及婴儿出生时、出生后24 h、72 h抽取产妇静脉血、脐血、新生儿静脉血,处理同上。
6 样品处理方法
取血浆样品1 mL，加入正己烷-二氯甲烷(7∶4)的处理液5 mL，振荡，离心。吸取上清液，下层重复处理。合并上清液，于68 ℃挥干， 残渣加100 μL甲醇溶解后进样20 μL。
7 结果
7.1 标准曲线建立 取空白血浆1 mL加入米非司酮标准液使血浆米非司酮浓度分别为10，100，200，300， 400，500 ng。mL-1。处理同样品，测定所得数据以峰面积为纵坐标、浓度为横坐标，经计算机回归得到线性回归方程为：
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Y=171.7X-373.2 r=0.998 7
色谱图见图1。
图1 色谱图
A.空白血浆 B.空白血浆+米非司酮
1.米非司酮
7.2 米非司酮的回收率测定和精密度试验 取空白血浆1 mL加入米非司酮标准液使血浆药物含量分别为50，200，400 ng。mL-1。处理同样品，处理后每个浓度分别在日内、日间重复进样，根据经血浆处理后的米非司酮标准曲线计算其相对回收率以及测定日内差和日间差，结果见表1。
表1 米非司酮相对回收率和精密度(n=4) 理论浓度
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/ng。mL-1
实测浓度
/ng。mL-1
相对回收率
±RSD/%
日内
RSD/%
日间
RSD/%
100
96.81
96.81±2.34
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1.4
3.4
200
202.1
101.0±1.76
1.5
3.2
400
394.1
98.52±1.60
1.3
2.3
7.3 米非司酮血药浓度 服药前静脉血中米非司酮浓度为(23.2±13.0)ng。mL-1，服药组活跃期产妇静脉血中药物浓度为(323±137) ng。mL-1，对照组为(112±51.0)ng。mL-1；服药组脐血中药物浓度为(95.9±49.3)ng。mL-1，对照组为(35.0±20.0)ng。mL-1；服药组产妇的新生儿出生后24 h血药浓度为(39.8±20.7)ng。mL-1，对照组为(26.7±11.6)ng。mL-1；服药组新生儿出生后72 h血药浓度为(27.7±9.9)ng。mL-1， 对照组为(21.5±11.9)ng。mL-1。服药组产妇活跃期、脐血及其新生儿出生后24 h血药浓度与对照组有显著差异(P<0.05), 出生后72 h血药浓度与对照组无显著差异。脐血浓度与产程活跃期血浆中的米非司酮浓度呈正相关，相关系数为0.72，脐/母血药比值为0.30。以出生时间t为横坐标，以米非司酮浓度C为纵坐标作图，见图2。
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图2 新生儿米非司酮血药浓度比较图
1.服药组 2.对照组
7.4 引产效果及新生儿结局 服药组及对照组促宫颈成熟有效率分别为100%和80%，引产总有效率分别为 92.10%和76.66% ，2组间比较差异具显著性(P<0.05)。2组产后出血，新生儿平均体重，Apgar评分及羊水性状比较均无显著差异(P>0.05)。
8 讨论
8.1 文献〔4,5〕报道过多种米非司酮HPLC测定方法,多数采用干冰-丙酮浴冷冻的方法提取米非司酮及其代谢产物，操作复杂。以正己烷-二氯甲烷的混合液提取米非司酮及其代谢产物的改进方法操作简便，且同样可以得到较好的精密度,保证待测样品中药物浓度在线性范围内。
8.2 并用药物米索前列醇剂量小、药物代谢快、血浆药物浓度很低，本实验条件无法检出该剂量下血浆中的米索前列醇[6]。
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8.3 未服药产妇在分娩时体内产生少量内源性米非司酮，其浓度远远小于服药组，服药组的促宫颈成熟有效率和引产有效率均显著高于对照组，说明服药组产妇血浆米非司酮浓度为有效药物作用浓度，米非司酮具有促宫颈成熟及引产作用。
8.4 结果显示产妇口服米非司酮可透过胎盘屏障，与文献[7，8]报道相符，透过量与产程活跃期的血药浓度呈正相关，并影响新生儿的血药浓度，使脐血和新生儿的24 h血药浓度明显高于对照组， 72 h血药浓度降至与对照组无显著差异, 新生儿结局良好，但对新生儿是否有远期影响，尚待进一步研究、随访。
参考文献
1，Frydman R, Baton C, Lelaidier C, et al. Mifepristone for induction of labor .Lancet, 1991,337：488
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3，苏慧，李莪，翁梨驹等. 米非司酮用于足月妊娠引产的临床观察.中华妇产科杂志,1996,31(11):676
4，叶智厚，张国庆，白秀梅等. 高效液相色谱法测定人体血液中RU486含量.色谱,1987,5(3):179
5，邵庆翔，桑国卫，姜丽霞等 .抗孕激素米非司酮及其代谢产物的药代动力学.中国临床药理学杂志, 1993,9 (3):144
6，Karim MJ .Antiulcer prostaglandin misoprostol ：single multiple dose pharmacokinetic prafile .Prostaglandins,1987,33(Suppl):40
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7， Hill NCW, Selinger M , Feroguson J, et al. The placental transfer of mifepristone during the second trimester and its influence upon maternal and fetal steroid concentration .Br J Obstet gynecol, 1990,97:406
8，Frydman R，Taylor S，Ulmann A. Transplacental passage of mifepristone. Lancet, 1985, 2:1019
(本文于1999年4月16日收到), 百拇医药