肝细胞癌Ki-67抗原表达及其意义
作者：韩圣华 黄建富
单位：韩圣华(福建医科大学附属协和医院肝胆外科， 福建福州350001)；黄建富(福建医科大学附属协和医院肝胆外科， 福建福州350001)
关键词：肝细胞瘤/病理学；肝肿瘤/病理学；抗原；Ki-67
中国普通外科杂志000113 摘 要：目的 探讨Ki-67抗原表达与原发性肝细胞癌(HCC)临床病理因素的关系及其预后意义。方法 对20例正常肝组织、20例肝硬化组织、5例局灶性结节性增生(FNH)、85例HCC和85例癌旁组织Ki-67抗原表达进行免疫组化检测。结果 HCC的Ki-67抗原表达显著高于癌旁肝组织、肝硬化组织、正常肝组织及FNH(P<0.01)，Ki-67抗原的表达与肿瘤分化程度(P<0.01)、肿瘤大小(P<0.01)、门静脉有无瘤栓形成(P<0.01)、包膜是否完整(P<0.05)密切相关；而与术前AFP水平、HBsAg、病灶个数无关(P>0.05)；与预后密切相关，术后平均无瘤生存期Ki-67指数<200者为53个月，Ki-67指数≥200者为18个月(P<0.01)。结论 检测Ki-67抗原表达有助于鉴别HCC和FNH，Ki-67指数可能作为判断HCC的恶性程度及预后的指标。
, 百拇医药
分类号：R735.7；R730.261 文献标识码：A
文章编号：1005-6947(2000)01-0042-04
Significance of Ki-67 antigen expression in hepatocellular
carcinoma
HAN Sheng-hua HUANG Jian-fu
(Department of Hepatobiliary Surgery, Affiliated Union Hospital, Fujian Medical University, Fuzhou 350001，China)
Abstract：Objective To investigate the correlation of Ki-67 expression with both clinical pathological factors and prognosis of hepatocellular carcinoma(HCC). Methods Immunohistochemistry assay was adopted to detect Ki-67 antigen expression in normal liver tissues(20 cases), hepatic cirrhotic tissues(20 cases), focal nodular hyperplasia tissues(FNH, 5 cases), HCC tissues(85 cases) and its corresponding noncancer parenchyma tissues(85 cases) respectively. Results Ki-67 antigen expression level was significantly higher in HCC than that in corresponding noncancer parenchyma(P<0.01), hepatic cirrhotic tissues(P<0.01), normal hepatic tissues(P<0.01) and FNH(P<0.01). Ki-67 expression was also closely whether there was correlated with the tumor differentiation(P<0.01), tumor size(P<0.01) and tumor embolus in the portal vein(P<0.01) and tumor capsule existing(P<0.05), while no correlation of Ki-67 expression with preoperative AFP level, HBsAg or number of lesions(P>0.05) was found. Prognosis was also closely related with Ki-67 expression(P<0.01), showing a tumor free mean survival period of 53 months with Ki-67 index<200, and 18 months with Ki-67 index≥200. Conclusions Detection of Ki-67antigen expression helps to distinct HCC from FNH; and Ki-67 index can be used to predict the degree of malignancy of HCC and its prognosis.
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Key words： HEPATOMA/pathol；LIVER NEOPLASMS/pathol；ANTIGEN，Ki-67
CLC number： R735.7；R730.261 Document code： A ▲
肿瘤细胞增生程度是反映其生物学行为的重要参数，直接影响着临床治疗和预后，Ki-67是一种敏感而特异的增殖期细胞标记物，优于目前常用的增殖细胞核抗原(PCNA)[1]。我们应用免疫组织化学方法检测85例原发性肝细胞癌(HCC)Ki-67抗原的表达，并探讨其临床意义，报道如下。
1 材料和方法
1.1 研究对象及分组
1.1.1 肝癌组 85例肝癌为本科1990～1996年进行肝癌切除术的标本，均经病理证实为原发性肝细胞癌，组织选取癌与癌旁交界处。术前未经任何治疗。男79例，女6例。年龄21～77岁(平均51.56±11.45岁)。根据Edmondson分级法；所有病例均有完整随访资料。HCC的复发均获典型的影像学诊断(B超或/和CT)。随访自手术起，复发者的复发为观察终点，未复发者以最后随访日期为终点。85例患者在随访过程中有46例复发，截尾数据39例。
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1.1.2 癌旁肝组 85例癌旁肝组织，为肝癌组的癌旁肝组织。
1.1.3 肝硬化组 20例肝硬化组织，取自未合并肝癌的肝硬化患者，均为活检标本。
1.1.4 正常肝组 20例正常肝组织，取自肝破裂的肝组织。
1.1.5 局灶性结节性增生(FNH组) 5例FNH组织，均为手术切除经病理证实。
1.2 试剂
鼠抗人Ki-67单克隆抗体MIB1(即用型)、S-P免疫组化试剂盒购自福州迈新公司。
1.3 方法
石蜡标本4μm厚连续切片，免疫组化采用SP法，石蜡切片置0.01mmol/L柠檬酸缓冲液微波修复抗原，DAB显色，苏木素复染，脱水、透明、封片。已知阳性片作阳性对照，PBS替代一抗作阴性对照。
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1.4 结果判断
计数采用Ki-67指数[1](Ki-67 Labeling index-Ki-67 LI)，指每个标本低倍镜(×100)下观察并确定有代表性的Ki-67染色阳性视野，选择5个视野，在高倍镜(×400)下每个视野数200个肿瘤细胞，计算其阳性细胞总数即为Ki-67指数。
1.5 统计学处理
采用SPSS统计软件包进行，方差分析检验组间差异，生存曲线按Kaplan-Meier绘制，并计算平均无瘤生存时间，进行Log-rank时序检验，均以P<0.05为有统计学意义。
2 结 果
2.1 各组的Ki-67 LI
Ki-67定位于细胞核，阳性细胞可见细胞核染色为棕褐色或棕黄色，与被苏木素衬染成蓝色的阴性胞核区别明显。癌旁肝组织、肝硬化组织、正常肝组织的Ki-67指数均小于10，FNH的Ki-67指数为11.2±3.5，HCC的Ki-67指数为 199.2±107.7，差异具有显著性(P<0.001)。
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2.2 HCC的Ki-67 LI与临床病理因素的关系
HCC的Ki-67 LI与临床病理因素的关系见表1。
(1)门静脉瘤栓 门静脉瘤栓形成者(26例)的Ki-67 LI显著高于未形成门静脉瘤栓者(59例) (P<0.01)；
(2)肿瘤包膜 包膜不完整(包括无包膜) 者(40例)的Ki-67 LI显著高于包膜完整者(45例) (P<0.05)；
(3)肿块大小 ≤3cm者(20例)的Ki-67 LI显著高于低于5～10cm者(30例)(P<0.05)和>10cm者(17例)(P<0.01)；3～5cm(18例)者的Ki-67 LI显著低于 >10cm者(17例)(P<0.05)；
(4)肿瘤数目 病灶多发者(29例)的Ki-67 LI高于病灶单发者(56例)，但无显著差异(P>0.05)；
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(5)肿瘤分级 Ⅰ级者(15例)的Ki-67 LI显著低于Ⅱ级(51例)和Ⅲ，Ⅳ级者(19例)(P均<0.01)；
(6)HBsAg 阳性者(69例)的Ki-67 LI与阴性者(16例)无显著差异(P>0.05)；
(7)AFP 术前AFP<400μg/L者(55例)的Ki-67 LI与AFP≥400μg/L者(30例)无显著差异(P>0.05)。
表1 原发性肝细胞癌的Ki-67指数与临床病理因素的关系 临床病理因素
例数
Ki-67指数
(均数±标准差)
P值
, 百拇医药
肿瘤大小(cm)
≤3
20
155.4±85.91)
3～5
18
175.2±80.42)
5～10
30
215.2±111.43)
, 百拇医药
>10
17
258.5±119.04)
<0.01
AFP(μg/L)
<400
55
185.5±94.31)
, 百拇医药
≥400
30
224.1±124.2
>0.05
HBsAg
阳性
69
197.3±100.7
阴性
16
, 百拇医药 222.1±142.4
>0.05
病理分级
Ⅰ级
15
105.2±91.61)
Ⅱ级
51
195.2±77.14)
, 百拇医药
Ⅲ，Ⅳ级
19
284.3±124.24)
<0.01
门静脉瘤栓
有
26
290.3±102.9
无
59
, 百拇医药
159.0±81.7
<0.01
包膜
完整
45
171.4±79.5
不完整+无包膜
40
230.5±125.2
<0.05
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病灶个数
多发
29
234.2±133.2
单发
56
181.1±86.6
>0.05
注：各组间两两比较，1)与3)P<0.05；1)与4)P<0.01；2)与4)P<0.05
2.3 HCC的Ki-67 LI与预后的关系
, http://www.100md.com
术后平均无瘤生存期Ki-67 LI<200(低增殖组)为53个月，Ki-67 LI≥200(增殖组)为18个月，两者差异显著(P<0.001)(表2，附图)。
附图 Ki-67指数与HCC患者累计术后无瘤生存率的关系(Kaplan-Meier生存曲线，Log-rank检验，P<0.001)
表2 原发性肝细胞癌的Ki-67指数与术后平均无瘤生存期的关系 Ki-67
指数
例数
复发
例数
平均无瘤生存时间
, http://www.100md.com
(月)
95%的
可信区间
<200
41
17
53
41～66
≥200
44
26
18
12～24
, 百拇医药
合计
85
46
37
29～46
注： P<0.001
3 讨 论
Ki-67抗原是一种与细胞周期相关的增殖细胞核抗原，与细胞DNA半保留复制相偶连，在有丝分裂的G1，G2，M，S期都表达，其中G2，M期表达最强，G0期不表达[2]。应用Ki-67的反义寡核苷酸能抑制EM-9细胞系的增生，提示Ki-67可能是保持细胞增殖所必须的。Ki-67抗原可能是一类新的与细胞周期相关的细胞核非组织蛋白[3]。早期Ki-67抗原表达检测仅限于新鲜冰冻切片的研究。最近，Cattoretti等以Ki-67抗原的重组部分作为免疫原设计出的MIB1单克隆抗体，经抗原修复后，可应用于石蜡切片的研究[4]。
, 百拇医药
本组资料显示，HCC的Ki-67 LI与分化程度呈显著负相关，即HCC分化程度越差，Ki-67 LI越高，提示Ki-67 LI能较好地反映HCC分化程度，是判断HCC增殖状态的良好指标。HCC的Ki-67 LI显著高于正常肝组织、肝硬化组织、FNH、癌旁肝组织；即使分化程度好的HCC的Ki-67 LI也显著高于良性病变，提示肿瘤的发生与细胞增殖的增加有密切关系，检测Ki-67 LI有助于鉴别良、恶性肿瘤，特别是对于肝穿活检标本，标本量较少者，更具有重要的鉴别诊断意义。这与Nolte[1]等的观点一致。
肿瘤生长不仅是病变体积的增长，更重要的是细胞增殖性质发生变化，本组≤3cm者Ki-67 LI明显低于>5cm者，与多数肝癌的生物学特性似以3cm为界限这一观点相符[5]。肿瘤细胞的增殖活性增加，可能导致肿瘤中多克隆亚群的发展，其中一些亚群具有侵袭和转移能力[6]。门静脉瘤栓形成和包膜不完整(包括无包膜)者Ki-67 LI显著高于无门静脉瘤栓和包膜完整者，提示增殖活性与肿瘤的侵袭性相关，Ki-67 LI可能作为判断肝癌生物学行为的良好指标。多数肝癌为单克隆起源，2个以上结节的存在以肝内播散的可能性较大[7]，但本组发现Ki-67 LI与肿瘤数目无明显关系，这可能与目前的检测手段尚难以发现的肿瘤微小转移灶有关；另外也反映了肿瘤的转移可能涉及到其他影响因素，如细胞凋亡等；此外，与部分HCC为多中心发生也有关系。
, 百拇医药
高增殖HCC术后无瘤生存期显著差于低增殖HCC，与Ng[8]等的研究结果相似。原发性肝癌术后肿瘤复发多见于肝内，多为单中心来源，与原发肿瘤残余的复发有关[7]。提示高增殖HCC存在肝内微小转移灶的可能性大于低增殖者，进一步说明HCC增殖活性与侵袭性相关，Ki-67指数可能作为HCC预后指标。■
作者简介：韩圣华(1971-)，男，福建平潭人，福建医科大学附属协和
医院住院医师，硕士，从事肝胆疾病方面研究。
参考文献：
[1]Nolte M, Werner M, Nasarek A, et al. Expression of proliferation associated antigens and detection of numerical chromosome aberrations in primary human liver tumors: relevance to tumor characteristics and prognosis[J]. J Clin Pathol, 1998,51(1):47～51
, http://www.100md.com
[2]Gerdes J, Scwab U, Lemke H, et al. Production of a mouse monoclonal antibody reactive with a human nuclear antigen associated with cell proliferation[J]. Int J Cancer, 1983,31(1):13～20
[3]Schliiter C, Duchrow M, Wohelenburg C, et al. The cell proliferation-associated antigen of antibody Ki-67: a very large, ubiquitous unclear protein with numerous repeated elements, representing a new kind of cell cycle-maintaining proteins[J]. J Cell Biol, 1993,123(6):513～522
, http://www.100md.com
[4]Cattoretti G, Becker M, Key G, et al. Monoclonal antibodies against recombinant parts of the Ki-67 antigen (MIB1 and MIB3) detect proliferating cells in microwave-processed formalin-fixed paraffin sections[J]. J Pathol, 1992,168(4):357～363
[5]丛文铭，吴孟超，陈汉.小肝细胞癌的临床病理特点(附93例分析)[J].中华肿瘤杂志，1993，15(5)：372～374
[6]Ng IOL, Path MRC, Lai ECS, et al. Prognostic significance of proliferating cell nuclear antigen expression in hepatocellular carcinoma[J]. Cancer, 1994,73(9):2268～2274
, http://www.100md.com
[7]丛文铭，吴孟超，陈汉.DNA含量分析对复发肝细胞癌克隆来源及其临床意义的初步研究[J].临床肝胆病杂志，1993，9(1)：3～5
[8]Ng IOL, Path MRC, Na JIA, et al. Ki-67 antigen expression in hepatocellular carcinoma using monoclonal antibody MIBI, a comparison with proliferating cell nuclear antigen[J]. Am J Clin Pathol, 1995,104(3):313～318
收稿日期：1999-03-29
修改日期：1999-12-27, 百拇医药
单位：韩圣华(福建医科大学附属协和医院肝胆外科， 福建福州350001)；黄建富(福建医科大学附属协和医院肝胆外科， 福建福州350001)
关键词：肝细胞瘤/病理学；肝肿瘤/病理学；抗原；Ki-67
中国普通外科杂志000113 摘 要：目的 探讨Ki-67抗原表达与原发性肝细胞癌(HCC)临床病理因素的关系及其预后意义。方法 对20例正常肝组织、20例肝硬化组织、5例局灶性结节性增生(FNH)、85例HCC和85例癌旁组织Ki-67抗原表达进行免疫组化检测。结果 HCC的Ki-67抗原表达显著高于癌旁肝组织、肝硬化组织、正常肝组织及FNH(P<0.01)，Ki-67抗原的表达与肿瘤分化程度(P<0.01)、肿瘤大小(P<0.01)、门静脉有无瘤栓形成(P<0.01)、包膜是否完整(P<0.05)密切相关；而与术前AFP水平、HBsAg、病灶个数无关(P>0.05)；与预后密切相关，术后平均无瘤生存期Ki-67指数<200者为53个月，Ki-67指数≥200者为18个月(P<0.01)。结论 检测Ki-67抗原表达有助于鉴别HCC和FNH，Ki-67指数可能作为判断HCC的恶性程度及预后的指标。
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分类号：R735.7；R730.261 文献标识码：A
文章编号：1005-6947(2000)01-0042-04
Significance of Ki-67 antigen expression in hepatocellular
carcinoma
HAN Sheng-hua HUANG Jian-fu
(Department of Hepatobiliary Surgery, Affiliated Union Hospital, Fujian Medical University, Fuzhou 350001，China)
Abstract：Objective To investigate the correlation of Ki-67 expression with both clinical pathological factors and prognosis of hepatocellular carcinoma(HCC). Methods Immunohistochemistry assay was adopted to detect Ki-67 antigen expression in normal liver tissues(20 cases), hepatic cirrhotic tissues(20 cases), focal nodular hyperplasia tissues(FNH, 5 cases), HCC tissues(85 cases) and its corresponding noncancer parenchyma tissues(85 cases) respectively. Results Ki-67 antigen expression level was significantly higher in HCC than that in corresponding noncancer parenchyma(P<0.01), hepatic cirrhotic tissues(P<0.01), normal hepatic tissues(P<0.01) and FNH(P<0.01). Ki-67 expression was also closely whether there was correlated with the tumor differentiation(P<0.01), tumor size(P<0.01) and tumor embolus in the portal vein(P<0.01) and tumor capsule existing(P<0.05), while no correlation of Ki-67 expression with preoperative AFP level, HBsAg or number of lesions(P>0.05) was found. Prognosis was also closely related with Ki-67 expression(P<0.01), showing a tumor free mean survival period of 53 months with Ki-67 index<200, and 18 months with Ki-67 index≥200. Conclusions Detection of Ki-67antigen expression helps to distinct HCC from FNH; and Ki-67 index can be used to predict the degree of malignancy of HCC and its prognosis.
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Key words： HEPATOMA/pathol；LIVER NEOPLASMS/pathol；ANTIGEN，Ki-67
CLC number： R735.7；R730.261 Document code： A ▲
肿瘤细胞增生程度是反映其生物学行为的重要参数，直接影响着临床治疗和预后，Ki-67是一种敏感而特异的增殖期细胞标记物，优于目前常用的增殖细胞核抗原(PCNA)[1]。我们应用免疫组织化学方法检测85例原发性肝细胞癌(HCC)Ki-67抗原的表达，并探讨其临床意义，报道如下。
1 材料和方法
1.1 研究对象及分组
1.1.1 肝癌组 85例肝癌为本科1990～1996年进行肝癌切除术的标本，均经病理证实为原发性肝细胞癌，组织选取癌与癌旁交界处。术前未经任何治疗。男79例，女6例。年龄21～77岁(平均51.56±11.45岁)。根据Edmondson分级法；所有病例均有完整随访资料。HCC的复发均获典型的影像学诊断(B超或/和CT)。随访自手术起，复发者的复发为观察终点，未复发者以最后随访日期为终点。85例患者在随访过程中有46例复发，截尾数据39例。
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1.1.2 癌旁肝组 85例癌旁肝组织，为肝癌组的癌旁肝组织。
1.1.3 肝硬化组 20例肝硬化组织，取自未合并肝癌的肝硬化患者，均为活检标本。
1.1.4 正常肝组 20例正常肝组织，取自肝破裂的肝组织。
1.1.5 局灶性结节性增生(FNH组) 5例FNH组织，均为手术切除经病理证实。
1.2 试剂
鼠抗人Ki-67单克隆抗体MIB1(即用型)、S-P免疫组化试剂盒购自福州迈新公司。
1.3 方法
石蜡标本4μm厚连续切片，免疫组化采用SP法，石蜡切片置0.01mmol/L柠檬酸缓冲液微波修复抗原，DAB显色，苏木素复染，脱水、透明、封片。已知阳性片作阳性对照，PBS替代一抗作阴性对照。
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1.4 结果判断
计数采用Ki-67指数[1](Ki-67 Labeling index-Ki-67 LI)，指每个标本低倍镜(×100)下观察并确定有代表性的Ki-67染色阳性视野，选择5个视野，在高倍镜(×400)下每个视野数200个肿瘤细胞，计算其阳性细胞总数即为Ki-67指数。
1.5 统计学处理
采用SPSS统计软件包进行，方差分析检验组间差异，生存曲线按Kaplan-Meier绘制，并计算平均无瘤生存时间，进行Log-rank时序检验，均以P<0.05为有统计学意义。
2 结 果
2.1 各组的Ki-67 LI
Ki-67定位于细胞核，阳性细胞可见细胞核染色为棕褐色或棕黄色，与被苏木素衬染成蓝色的阴性胞核区别明显。癌旁肝组织、肝硬化组织、正常肝组织的Ki-67指数均小于10，FNH的Ki-67指数为11.2±3.5，HCC的Ki-67指数为 199.2±107.7，差异具有显著性(P<0.001)。
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2.2 HCC的Ki-67 LI与临床病理因素的关系
HCC的Ki-67 LI与临床病理因素的关系见表1。
(1)门静脉瘤栓 门静脉瘤栓形成者(26例)的Ki-67 LI显著高于未形成门静脉瘤栓者(59例) (P<0.01)；
(2)肿瘤包膜 包膜不完整(包括无包膜) 者(40例)的Ki-67 LI显著高于包膜完整者(45例) (P<0.05)；
(3)肿块大小 ≤3cm者(20例)的Ki-67 LI显著高于低于5～10cm者(30例)(P<0.05)和>10cm者(17例)(P<0.01)；3～5cm(18例)者的Ki-67 LI显著低于 >10cm者(17例)(P<0.05)；
(4)肿瘤数目 病灶多发者(29例)的Ki-67 LI高于病灶单发者(56例)，但无显著差异(P>0.05)；
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(5)肿瘤分级 Ⅰ级者(15例)的Ki-67 LI显著低于Ⅱ级(51例)和Ⅲ，Ⅳ级者(19例)(P均<0.01)；
(6)HBsAg 阳性者(69例)的Ki-67 LI与阴性者(16例)无显著差异(P>0.05)；
(7)AFP 术前AFP<400μg/L者(55例)的Ki-67 LI与AFP≥400μg/L者(30例)无显著差异(P>0.05)。
表1 原发性肝细胞癌的Ki-67指数与临床病理因素的关系 临床病理因素
例数
Ki-67指数
(均数±标准差)
P值
, 百拇医药
肿瘤大小(cm)
≤3
20
155.4±85.91)
3～5
18
175.2±80.42)
5～10
30
215.2±111.43)
, 百拇医药
>10
17
258.5±119.04)
<0.01
AFP(μg/L)
<400
55
185.5±94.31)
, 百拇医药
≥400
30
224.1±124.2
>0.05
HBsAg
阳性
69
197.3±100.7
阴性
16
, 百拇医药 222.1±142.4
>0.05
病理分级
Ⅰ级
15
105.2±91.61)
Ⅱ级
51
195.2±77.14)
, 百拇医药
Ⅲ，Ⅳ级
19
284.3±124.24)
<0.01
门静脉瘤栓
有
26
290.3±102.9
无
59
, 百拇医药
159.0±81.7
<0.01
包膜
完整
45
171.4±79.5
不完整+无包膜
40
230.5±125.2
<0.05
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病灶个数
多发
29
234.2±133.2
单发
56
181.1±86.6
>0.05
注：各组间两两比较，1)与3)P<0.05；1)与4)P<0.01；2)与4)P<0.05
2.3 HCC的Ki-67 LI与预后的关系
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术后平均无瘤生存期Ki-67 LI<200(低增殖组)为53个月，Ki-67 LI≥200(增殖组)为18个月，两者差异显著(P<0.001)(表2，附图)。
附图 Ki-67指数与HCC患者累计术后无瘤生存率的关系(Kaplan-Meier生存曲线，Log-rank检验，P<0.001)
表2 原发性肝细胞癌的Ki-67指数与术后平均无瘤生存期的关系 Ki-67
指数
例数
复发
例数
平均无瘤生存时间
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(月)
95%的
可信区间
<200
41
17
53
41～66
≥200
44
26
18
12～24
, 百拇医药
合计
85
46
37
29～46
注： P<0.001
3 讨 论
Ki-67抗原是一种与细胞周期相关的增殖细胞核抗原，与细胞DNA半保留复制相偶连，在有丝分裂的G1，G2，M，S期都表达，其中G2，M期表达最强，G0期不表达[2]。应用Ki-67的反义寡核苷酸能抑制EM-9细胞系的增生，提示Ki-67可能是保持细胞增殖所必须的。Ki-67抗原可能是一类新的与细胞周期相关的细胞核非组织蛋白[3]。早期Ki-67抗原表达检测仅限于新鲜冰冻切片的研究。最近，Cattoretti等以Ki-67抗原的重组部分作为免疫原设计出的MIB1单克隆抗体，经抗原修复后，可应用于石蜡切片的研究[4]。
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本组资料显示，HCC的Ki-67 LI与分化程度呈显著负相关，即HCC分化程度越差，Ki-67 LI越高，提示Ki-67 LI能较好地反映HCC分化程度，是判断HCC增殖状态的良好指标。HCC的Ki-67 LI显著高于正常肝组织、肝硬化组织、FNH、癌旁肝组织；即使分化程度好的HCC的Ki-67 LI也显著高于良性病变，提示肿瘤的发生与细胞增殖的增加有密切关系，检测Ki-67 LI有助于鉴别良、恶性肿瘤，特别是对于肝穿活检标本，标本量较少者，更具有重要的鉴别诊断意义。这与Nolte[1]等的观点一致。
肿瘤生长不仅是病变体积的增长，更重要的是细胞增殖性质发生变化，本组≤3cm者Ki-67 LI明显低于>5cm者，与多数肝癌的生物学特性似以3cm为界限这一观点相符[5]。肿瘤细胞的增殖活性增加，可能导致肿瘤中多克隆亚群的发展，其中一些亚群具有侵袭和转移能力[6]。门静脉瘤栓形成和包膜不完整(包括无包膜)者Ki-67 LI显著高于无门静脉瘤栓和包膜完整者，提示增殖活性与肿瘤的侵袭性相关，Ki-67 LI可能作为判断肝癌生物学行为的良好指标。多数肝癌为单克隆起源，2个以上结节的存在以肝内播散的可能性较大[7]，但本组发现Ki-67 LI与肿瘤数目无明显关系，这可能与目前的检测手段尚难以发现的肿瘤微小转移灶有关；另外也反映了肿瘤的转移可能涉及到其他影响因素，如细胞凋亡等；此外，与部分HCC为多中心发生也有关系。
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高增殖HCC术后无瘤生存期显著差于低增殖HCC，与Ng[8]等的研究结果相似。原发性肝癌术后肿瘤复发多见于肝内，多为单中心来源，与原发肿瘤残余的复发有关[7]。提示高增殖HCC存在肝内微小转移灶的可能性大于低增殖者，进一步说明HCC增殖活性与侵袭性相关，Ki-67指数可能作为HCC预后指标。■
作者简介：韩圣华(1971-)，男，福建平潭人，福建医科大学附属协和
医院住院医师，硕士，从事肝胆疾病方面研究。
参考文献：
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[3]Schliiter C, Duchrow M, Wohelenburg C, et al. The cell proliferation-associated antigen of antibody Ki-67: a very large, ubiquitous unclear protein with numerous repeated elements, representing a new kind of cell cycle-maintaining proteins[J]. J Cell Biol, 1993,123(6):513～522
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[4]Cattoretti G, Becker M, Key G, et al. Monoclonal antibodies against recombinant parts of the Ki-67 antigen (MIB1 and MIB3) detect proliferating cells in microwave-processed formalin-fixed paraffin sections[J]. J Pathol, 1992,168(4):357～363
[5]丛文铭，吴孟超，陈汉.小肝细胞癌的临床病理特点(附93例分析)[J].中华肿瘤杂志，1993，15(5)：372～374
[6]Ng IOL, Path MRC, Lai ECS, et al. Prognostic significance of proliferating cell nuclear antigen expression in hepatocellular carcinoma[J]. Cancer, 1994,73(9):2268～2274
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[7]丛文铭，吴孟超，陈汉.DNA含量分析对复发肝细胞癌克隆来源及其临床意义的初步研究[J].临床肝胆病杂志，1993，9(1)：3～5
[8]Ng IOL, Path MRC, Na JIA, et al. Ki-67 antigen expression in hepatocellular carcinoma using monoclonal antibody MIBI, a comparison with proliferating cell nuclear antigen[J]. Am J Clin Pathol, 1995,104(3):313～318
收稿日期：1999-03-29
修改日期：1999-12-27, 百拇医药