血葡萄糖测定抗凝剂的评价和选择
作者：万雄萍 王豪 詹蓓蓓
单位：上海海员医院，上海200080
关键词：葡萄糖；抗凝剂
临床检验杂志990406 摘要 观察了在当前自动化分析条件下，血清葡萄糖测定结果明显偏低的现象。对肝素D-甘露糖、肝素D-甘露糖NaF和速效抗凝剂对血葡萄糖的保护作用以及对其它生化检查的适用性进行了探讨。HMF对血葡萄糖的保护作用良好，对其它生化检查的适用性较广。
为阻上血液标本中葡萄糖的体外分解，《全国临床检验操作规程》指明采用草酸钾-氟化钠作抗凝剂。随着自动生化分析仪的普及，有的实验室为求方便，采用血清样品一次完成包括血葡萄糖在内的成套生能较好阻止血葡萄糖体外分解，又能兼作其他检查的抗凝剂实属必要。兹将我们的有关实验结果报道如下。化检查，造成成批血葡萄糖结果人为偏低。因此，重申这一血葡萄糖分析前的质控措施，寻找既
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1抗凝管配制 肝素D-甘露糖(HM)抗凝管：每管加60 g/L D-甘露糖溶液300 μl，再加6250 kU/L肝素钠注射液5 μl，肝素D-甘露糖氟化钠(HMF)抗凝管：每管加含有60 g/L D-甘露糖和2 g/L NaF的水溶液300 μl，再加6250 kU/L肝素钠注射液5 μl；速效抗凝剂(QAAC)抗凝管：以柠檬酸：柠檬酸钠：EDTA.2Na：NaF=3.4：1.6：4.8：0.2的比例[1]，配制成每升含总溶质100 g的水溶液，每管加300 μl。各管均置37°C烘干。
1.2 血标本留取 取2名志愿供血者静脉血液，各分装3 ml于不含和含上述抗凝剂的各管内，用于观察血葡萄糖体外分解速率。抗凝血液中抗凝剂含量为：HM管含肝素10 kU/L,D-甘露糖6 g/L；HMF管含肝素10 kU/L，D-甘露糖6 g/L，NaF 0.2 g/L；QAAC管含总溶质10 g/L。另取受检者(n=23)静脉血液，每例取3 ml加于HMF管，另取3 ml不加抗凝剂，作其它生化检查对照试验用。
, 百拇医药
1.3 测定项目与试剂 血葡萄糖(Glu,HK法)和肌酐(Cr,酶法)试剂盒系朗道公司产品；ALP、GGT、LD、Mg、iP试剂盒系慈城生化试剂厂产品；α-L-岩藻糖苷酶(AFU)和谷氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶(GPDA)系夸克公司产品；Lp(a)系Wako公司产品；K、Na、Cl试剂盒由迅达公司生产；CK由长征公司生产；ALT、AST、Amy、TP、Alb、T-Bil、D-Bil、Urea、UA(尿酸)、T-Ch、TG、HDL-Ch、LDL-Ch、ApoA1、ApoB、Ca试剂盒系宝灵曼公司生产。
1.4 仪器 DSI 903 Na/K/Cl分析仪，用于Na、K、Cl测定；日立7060自动生化分析仪，用于其他各项测定。
1.5 数据处理和统计方法 每例样品经两次重复测定，结果取均值。不同抗凝剂不同时间测定的血葡萄糖结果，用方差分析；不加和加HMF样品各项生化检查结果比较，用配对资料t检验，并在相关分析基础上求出回归方程。
, http://www.100md.com
2 实验和结果
2.1 将2名志愿供血者之血标本，在15分钟内分离出部分血清和血浆，立即测定血葡萄糖，嗣后放置室温，在抽取血液后1、3、8、18小时再进行分离和测定。每次测定吸出样品后，即轻轻混匀全血，待下一次临测定前离心分离。血清和血浆均无溶血。测定结果见表1。
表1 用不同抗凝剂不同时间测定血葡萄糖结果(
，mmol/L) 时 间
无抗凝剂
HM
HMF
QAAC
立 即
, 百拇医药
5.61
5.73
5.76
5.76
1小时
5.32
5.66
5.77
5.73
3小时
4.55
5.57
5.68
, 百拇医药
5.68
8小时
3.01
5.36
5.78
5.75
18小时
1.85
5.21
5.73
5.42
24小时
1.31
, 百拇医药
5.13
5.69
5.27
结果表明，不加抗凝剂的血标本中，血葡萄糖浓度迅速而明显下降。而HMF对血葡萄糖的保护作用最好。
2.2 将各管在“立即”分离的血清和血浆，作其它各项检查，结果见表2。
3 讨论
3.1 表1显示，无抗凝剂的血标本和其他各管比较，即使立即测定血葡萄糖，结果已有下降，1～3小时下降明显，18～24小时的剩余血葡萄糖已降至33%～23%。我们曾随机取104名病人，每个病人采血时分成草酸钾-NaF抗凝血(制血浆)和非抗凝血(制血清)，在日立7060生化分析仪上，用HK法测定血浆和血清葡萄糖浓度。全部操作按日常工作循序进行，当日上午完成测定。室温15°C。测得血浆葡萄糖浓度(X)范围为4.25～16.25 mmol/L，均值为5.71 mmol/L；血清葡萄糖浓度(Y)为3.6～15.7 mmol/L，均值为5.08 mmol/L。经成对资料比较t检验，t=8.17>t0.001(100)，P<0.001。回归分析得
=1.003X-0.661，r=0.969。说明在日常工作中，如不注意防止血葡萄糖体外分解，会明显影响糖尿病的诊断和监护。尤应指出，这种误差，既不能借质控品分析发现，也不能在室间质评中反映出来。
, 百拇医药
3.2 由于NaF阻止葡萄糖分解的作用缓慢，草酸钾对多种生化检查存在干扰，我们放弃了对草酸钾-NaF的选择。根据文献报道[2]，我们对D-甘露糖对血糖的保护作用进行了观察，在肝素抗凝血中以1 g/L的浓度间隔加入D-甘露糖，使标本中D-甘露糖浓度在2～6 g/L之间。室温3小时后血糖下降百分比依次为7.8%、7.4%、6.3%、5.2%和3.7%。考虑到D-甘露糖是HK的竞争性抑制剂[3]，我们用两份不同葡萄糖浓度的混合血清，按上法分别制成不含和含2～6 g/L D-甘露糖的样品，用HK法测定葡萄糖浓度，每种浓度测定5次。结果经方差分析，F=0.717和2.0，均小于F0.1(5，24)，P>0.1。说明血清中D-甘露糖在0～6 g/L范围内，用朗道HK法试剂盒测定的葡萄糖值无显著差异。
表2 血清和HMF抗凝剂血浆各项生化检查结果比较(n=23)
无抗凝剂
, 百拇医药
HMF
t值
P
回归方程
均值
范围
均值
范围
CK
154
95～408
144
94～373
, 百拇医药
3.848
<0.001=9.0+0.874X
ALT
44.5
95～408
45.4
17～125
1.099
>0.2=0.16+1.016X
AST
, 百拇医药
41.2
16～127
39.6
17～125
0.146
>0.8=3.29+0.862X
ALP
111
15～135
112
72～224
, http://www.100md.com
0.549
>0.5=-2.08+1.023X
GGT
40.6
68～221
38.8
15～106
1.30
>0.2=-2.47+1.016X
AFU
, 百拇医药
119
1799
120
78～205
1.67
>0.1=1.53+0.999X
GPDA
90
67116
90
69～117
0.31
, 百拇医药
>0.7=24.5+0.725X
Amy
89
58～130
90
66～125
1.18
>0.2=15.0+0.843X
LD
183
, 百拇医药
141～317
184
151～320
0.615
>0.5=13.7+0.918X
TP
68
59～77
68
58～80
0.18
, 百拇医药 >0.8=1.07+0.992X
Alb
43
36～50
43
36～51
1.427
>0.1=0.48+0.995X
T-Bil
15
, 百拇医药
7～28
15
7～26
1.418
>0.1=1.27+0.9224X
D-Bil
4.8
1.3～9.3
5.1
1.5～10
1.9
, http://www.100md.com >0.05=0.49+0.951X
Urea
6.0
4.3～7.8
6.0
4.6～8.1
0.997
>0.3=-0.38+1.077X
Cr
88
, http://www.100md.com
63～143
89
71～150
1.52
>0.1=1.89+0.998X
UA
322
247～435
324
216～444
0.91
, 百拇医药 >0.3=25.7+0.928X
TC
4.3
3.36.8
4.6
3.6～6.5
0.32
>0.7=0.81+0.826X
TG
1.8
, 百拇医药
0.85～3.1
1.8
0.9～3.0
1.11
>0.2=0.057+0.964X
Lp(a)
267
95～688
266
91～685
1.6
, 百拇医药
>0.1=17.8+0.982X
HDL-C
1.5
0.9～2.7
1.5
1.0～2.8
0.29
>0.7=0.07+0.946X
LDL-C
1.8
, http://www.100md.com
08～4.3
1.9
0.9～4.5
0.68
>0.5=0.03+1.02X
ApoA1
1.3
1.1～1.6
1.3
1.1～1.5
0.51
, 百拇医药
>0.6=0.48+0.62X
ApoB
14
0.7～3.0
1.3
0.8～3.0
0.28
>0.7=0.006+0.99X
Mg
0.96
, 百拇医药
0.7～1.3
0.95
0.6～1.2
1.12
>0.9=0.005+0.98X
iP
1.2
0.8～1.7
1.2
0.8～1.6
0.43
, 百拇医药
>0.6=0.134+0.894X
Ca
2.2
1.9～2.5
2.2
1.9～2.6
0.57
>0.5=0.113+0.95X
K
4.2
, 百拇医药
3.5～5.1
4.2
3.7～4.9
0.72
>0.4=0.78+0.82X
Na
139.5
133～147
144.7
139～155
4.52
, 百拇医药
<0.001=8.16+0.978X
Cl
100
92～106
100
94～106
0.378
>0.7=18.3+0.818X
3.3 将D-甘露糖与极小量NaF联合使用，同时加入肝素抗凝，制成HMF抗凝剂，可使血葡萄糖浓度8小时内基本不变，24小时仅下降1.7%(表1)，明显提高了对血葡萄糖的保护作用。考虑到HMF对其它生化检查可能存在干扰，我们用10份混合血清作了初步对照试验。每份取3 ml加于HMF管，剩余部分作为不加HMF的血清对照。每份样品作双份重复测定。在29个项目的测定结果中，HMF样品测得的CK均值为115.4 U/L，不含HMF样品的均值为119.9 U/L，前者显著低于后者(t=6.40，P<0.001)；而Na的测定结果的均值依次为138.1 mmol/L和142.4 mmol/L，前者显著高于后者(t=14.3，P<0.001)。其余各项检查结果，均无显著差异。为了更加符合实际工作条件，在混合血清对照试验基础上，对23例全血样品进行了比较观察，结果基本一致(表2)。HMF血浆CK结果除3例略高于血清外，其余各便和测定均值均低于血清，差异显著(t=3.848，P<0.001)；Na测定结果显著高于血清(t=4.52，P<0.001)。其它各项检查结果均无显著差异。根据本法HMF加入量计算，可使血样品中Na浓度提高4.76 mmol/L；在用混合血清的对照试验中，含HMF血清Na均值较不含HMF血清高4.3 mmol/L；在全血作比较观察中，HMF血浆Na均值高于血清5.2 mmol/L。实际测定值与计算的差异，除分析误差外，全血样品中可能还受细胞内外分布的影响。
, 百拇医药
3.4 QAAC对血葡萄糖有较好保护作用，8小时内血葡萄糖浓度基本不变，18小时和24小时的浓度下降6%和9%，略逊于HMF。但对其他半数以上的检查项目有极明显干扰，而且QAAC在血中不易溶解，易引起溶血。
4 小结
比较了HM、HMF和QAAC对血葡萄糖的保护作用，其中以HMF作用最好，且较适应多种生化检查。同时强调了不能忽略用血清测定葡萄糖引起的误差，在糖尿病发病率呈现上升趋势的今天，尤见重要。
参考文献
1 孙永顺.血糖测定四种抗凝剂的比较和评价.中华医学检验杂志，1991，14：87
2 Nakashima K,Takel H,Nasu Y,et al.D-Mannose as a preservative of glucose in blood samples.Clin Chem,1987，33：708
3 Ho C S,Fung S L M,Chan A Y W.Interference of D-mannose in glucose measurements by glucose oxidase and hexokinase methods.Clin Chem,1991，37：477
(1999-05-08收稿), 百拇医药
单位：上海海员医院，上海200080
关键词：葡萄糖；抗凝剂
临床检验杂志990406 摘要 观察了在当前自动化分析条件下，血清葡萄糖测定结果明显偏低的现象。对肝素D-甘露糖、肝素D-甘露糖NaF和速效抗凝剂对血葡萄糖的保护作用以及对其它生化检查的适用性进行了探讨。HMF对血葡萄糖的保护作用良好，对其它生化检查的适用性较广。
为阻上血液标本中葡萄糖的体外分解，《全国临床检验操作规程》指明采用草酸钾-氟化钠作抗凝剂。随着自动生化分析仪的普及，有的实验室为求方便，采用血清样品一次完成包括血葡萄糖在内的成套生能较好阻止血葡萄糖体外分解，又能兼作其他检查的抗凝剂实属必要。兹将我们的有关实验结果报道如下。化检查，造成成批血葡萄糖结果人为偏低。因此，重申这一血葡萄糖分析前的质控措施，寻找既
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1抗凝管配制 肝素D-甘露糖(HM)抗凝管：每管加60 g/L D-甘露糖溶液300 μl，再加6250 kU/L肝素钠注射液5 μl，肝素D-甘露糖氟化钠(HMF)抗凝管：每管加含有60 g/L D-甘露糖和2 g/L NaF的水溶液300 μl，再加6250 kU/L肝素钠注射液5 μl；速效抗凝剂(QAAC)抗凝管：以柠檬酸：柠檬酸钠：EDTA.2Na：NaF=3.4：1.6：4.8：0.2的比例[1]，配制成每升含总溶质100 g的水溶液，每管加300 μl。各管均置37°C烘干。
1.2 血标本留取 取2名志愿供血者静脉血液，各分装3 ml于不含和含上述抗凝剂的各管内，用于观察血葡萄糖体外分解速率。抗凝血液中抗凝剂含量为：HM管含肝素10 kU/L,D-甘露糖6 g/L；HMF管含肝素10 kU/L，D-甘露糖6 g/L，NaF 0.2 g/L；QAAC管含总溶质10 g/L。另取受检者(n=23)静脉血液，每例取3 ml加于HMF管，另取3 ml不加抗凝剂，作其它生化检查对照试验用。
, 百拇医药
1.3 测定项目与试剂 血葡萄糖(Glu,HK法)和肌酐(Cr,酶法)试剂盒系朗道公司产品；ALP、GGT、LD、Mg、iP试剂盒系慈城生化试剂厂产品；α-L-岩藻糖苷酶(AFU)和谷氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶(GPDA)系夸克公司产品；Lp(a)系Wako公司产品；K、Na、Cl试剂盒由迅达公司生产；CK由长征公司生产；ALT、AST、Amy、TP、Alb、T-Bil、D-Bil、Urea、UA(尿酸)、T-Ch、TG、HDL-Ch、LDL-Ch、ApoA1、ApoB、Ca试剂盒系宝灵曼公司生产。
1.4 仪器 DSI 903 Na/K/Cl分析仪，用于Na、K、Cl测定；日立7060自动生化分析仪，用于其他各项测定。
1.5 数据处理和统计方法 每例样品经两次重复测定，结果取均值。不同抗凝剂不同时间测定的血葡萄糖结果，用方差分析；不加和加HMF样品各项生化检查结果比较，用配对资料t检验，并在相关分析基础上求出回归方程。
, http://www.100md.com
2 实验和结果
2.1 将2名志愿供血者之血标本，在15分钟内分离出部分血清和血浆，立即测定血葡萄糖，嗣后放置室温，在抽取血液后1、3、8、18小时再进行分离和测定。每次测定吸出样品后，即轻轻混匀全血，待下一次临测定前离心分离。血清和血浆均无溶血。测定结果见表1。
表1 用不同抗凝剂不同时间测定血葡萄糖结果(
，mmol/L) 时 间无抗凝剂
HM
HMF
QAAC
立 即
, 百拇医药
5.61
5.73
5.76
5.76
1小时
5.32
5.66
5.77
5.73
3小时
4.55
5.57
5.68
, 百拇医药
5.68
8小时
3.01
5.36
5.78
5.75
18小时
1.85
5.21
5.73
5.42
24小时
1.31
, 百拇医药
5.13
5.69
5.27
结果表明，不加抗凝剂的血标本中，血葡萄糖浓度迅速而明显下降。而HMF对血葡萄糖的保护作用最好。
2.2 将各管在“立即”分离的血清和血浆，作其它各项检查，结果见表2。
3 讨论
3.1 表1显示，无抗凝剂的血标本和其他各管比较，即使立即测定血葡萄糖，结果已有下降，1～3小时下降明显，18～24小时的剩余血葡萄糖已降至33%～23%。我们曾随机取104名病人，每个病人采血时分成草酸钾-NaF抗凝血(制血浆)和非抗凝血(制血清)，在日立7060生化分析仪上，用HK法测定血浆和血清葡萄糖浓度。全部操作按日常工作循序进行，当日上午完成测定。室温15°C。测得血浆葡萄糖浓度(X)范围为4.25～16.25 mmol/L，均值为5.71 mmol/L；血清葡萄糖浓度(Y)为3.6～15.7 mmol/L，均值为5.08 mmol/L。经成对资料比较t检验，t=8.17>t0.001(100)，P<0.001。回归分析得
=1.003X-0.661，r=0.969。说明在日常工作中，如不注意防止血葡萄糖体外分解，会明显影响糖尿病的诊断和监护。尤应指出，这种误差，既不能借质控品分析发现，也不能在室间质评中反映出来。, 百拇医药
3.2 由于NaF阻止葡萄糖分解的作用缓慢，草酸钾对多种生化检查存在干扰，我们放弃了对草酸钾-NaF的选择。根据文献报道[2]，我们对D-甘露糖对血糖的保护作用进行了观察，在肝素抗凝血中以1 g/L的浓度间隔加入D-甘露糖，使标本中D-甘露糖浓度在2～6 g/L之间。室温3小时后血糖下降百分比依次为7.8%、7.4%、6.3%、5.2%和3.7%。考虑到D-甘露糖是HK的竞争性抑制剂[3]，我们用两份不同葡萄糖浓度的混合血清，按上法分别制成不含和含2～6 g/L D-甘露糖的样品，用HK法测定葡萄糖浓度，每种浓度测定5次。结果经方差分析，F=0.717和2.0，均小于F0.1(5，24)，P>0.1。说明血清中D-甘露糖在0～6 g/L范围内，用朗道HK法试剂盒测定的葡萄糖值无显著差异。
表2 血清和HMF抗凝剂血浆各项生化检查结果比较(n=23)
无抗凝剂
, 百拇医药
HMF
t值
P
回归方程
均值
范围
均值
范围
CK
154
95～408
144
94～373
, 百拇医药
3.848
<0.001
=9.0+0.874XALT
44.5
95～408
45.4
17～125
1.099
>0.2
=0.16+1.016XAST
, 百拇医药
41.2
16～127
39.6
17～125
0.146
>0.8
=3.29+0.862XALP
111
15～135
112
72～224
, http://www.100md.com
0.549
>0.5
=-2.08+1.023XGGT
40.6
68～221
38.8
15～106
1.30
>0.2
=-2.47+1.016XAFU
, 百拇医药
119
1799
120
78～205
1.67
>0.1
=1.53+0.999XGPDA
90
67116
90
69～117
0.31
, 百拇医药
>0.7
=24.5+0.725XAmy
89
58～130
90
66～125
1.18
>0.2
=15.0+0.843XLD
183
, 百拇医药
141～317
184
151～320
0.615
>0.5
=13.7+0.918XTP
68
59～77
68
58～80
0.18
, 百拇医药 >0.8
=1.07+0.992XAlb
43
36～50
43
36～51
1.427
>0.1
=0.48+0.995XT-Bil
15
, 百拇医药
7～28
15
7～26
1.418
>0.1
=1.27+0.9224XD-Bil
4.8
1.3～9.3
5.1
1.5～10
1.9
, http://www.100md.com >0.05
=0.49+0.951XUrea
6.0
4.3～7.8
6.0
4.6～8.1
0.997
>0.3
=-0.38+1.077XCr
88
, http://www.100md.com
63～143
89
71～150
1.52
>0.1
=1.89+0.998XUA
322
247～435
324
216～444
0.91
, 百拇医药 >0.3
=25.7+0.928XTC
4.3
3.36.8
4.6
3.6～6.5
0.32
>0.7
=0.81+0.826XTG
1.8
, 百拇医药
0.85～3.1
1.8
0.9～3.0
1.11
>0.2
=0.057+0.964XLp(a)
267
95～688
266
91～685
1.6
, 百拇医药
>0.1
=17.8+0.982XHDL-C
1.5
0.9～2.7
1.5
1.0～2.8
0.29
>0.7
=0.07+0.946XLDL-C
1.8
, http://www.100md.com
08～4.3
1.9
0.9～4.5
0.68
>0.5
=0.03+1.02XApoA1
1.3
1.1～1.6
1.3
1.1～1.5
0.51
, 百拇医药
>0.6
=0.48+0.62XApoB
14
0.7～3.0
1.3
0.8～3.0
0.28
>0.7
=0.006+0.99XMg
0.96
, 百拇医药
0.7～1.3
0.95
0.6～1.2
1.12
>0.9
=0.005+0.98XiP
1.2
0.8～1.7
1.2
0.8～1.6
0.43
, 百拇医药
>0.6
=0.134+0.894XCa
2.2
1.9～2.5
2.2
1.9～2.6
0.57
>0.5
=0.113+0.95XK
4.2
, 百拇医药
3.5～5.1
4.2
3.7～4.9
0.72
>0.4
=0.78+0.82XNa
139.5
133～147
144.7
139～155
4.52
, 百拇医药
<0.001
=8.16+0.978XCl
100
92～106
100
94～106
0.378
>0.7
=18.3+0.818X3.3 将D-甘露糖与极小量NaF联合使用，同时加入肝素抗凝，制成HMF抗凝剂，可使血葡萄糖浓度8小时内基本不变，24小时仅下降1.7%(表1)，明显提高了对血葡萄糖的保护作用。考虑到HMF对其它生化检查可能存在干扰，我们用10份混合血清作了初步对照试验。每份取3 ml加于HMF管，剩余部分作为不加HMF的血清对照。每份样品作双份重复测定。在29个项目的测定结果中，HMF样品测得的CK均值为115.4 U/L，不含HMF样品的均值为119.9 U/L，前者显著低于后者(t=6.40，P<0.001)；而Na的测定结果的均值依次为138.1 mmol/L和142.4 mmol/L，前者显著高于后者(t=14.3，P<0.001)。其余各项检查结果，均无显著差异。为了更加符合实际工作条件，在混合血清对照试验基础上，对23例全血样品进行了比较观察，结果基本一致(表2)。HMF血浆CK结果除3例略高于血清外，其余各便和测定均值均低于血清，差异显著(t=3.848，P<0.001)；Na测定结果显著高于血清(t=4.52，P<0.001)。其它各项检查结果均无显著差异。根据本法HMF加入量计算，可使血样品中Na浓度提高4.76 mmol/L；在用混合血清的对照试验中，含HMF血清Na均值较不含HMF血清高4.3 mmol/L；在全血作比较观察中，HMF血浆Na均值高于血清5.2 mmol/L。实际测定值与计算的差异，除分析误差外，全血样品中可能还受细胞内外分布的影响。
, 百拇医药
3.4 QAAC对血葡萄糖有较好保护作用，8小时内血葡萄糖浓度基本不变，18小时和24小时的浓度下降6%和9%，略逊于HMF。但对其他半数以上的检查项目有极明显干扰，而且QAAC在血中不易溶解，易引起溶血。
4 小结
比较了HM、HMF和QAAC对血葡萄糖的保护作用，其中以HMF作用最好，且较适应多种生化检查。同时强调了不能忽略用血清测定葡萄糖引起的误差，在糖尿病发病率呈现上升趋势的今天，尤见重要。
参考文献
1 孙永顺.血糖测定四种抗凝剂的比较和评价.中华医学检验杂志，1991，14：87
2 Nakashima K,Takel H,Nasu Y,et al.D-Mannose as a preservative of glucose in blood samples.Clin Chem,1987，33：708
3 Ho C S,Fung S L M,Chan A Y W.Interference of D-mannose in glucose measurements by glucose oxidase and hexokinase methods.Clin Chem,1991，37：477
(1999-05-08收稿), 百拇医药