食管鳞状细胞癌p53基因突变及其蛋白表达
作者:李淳 程继东 沈忠英
单位:李淳 程继东 沈忠英(汕头大学医学院肿瘤病理研究室 515031)
关键词:食管肿瘤;基因;p53;蛋白质p53;预后;PCR-SSCP;免疫组织化学
临床与实验病理学杂志990436
分类号 R735.1;R392.31 文献标识码 A
文章编号 1001-7399(1999)04-0363-01
食管鳞癌常伴有p53基因突变和(或)p53蛋白积聚。文献报道p53基因改变与p53蛋白积聚常出现不一致的现象〔1,2〕。我们应用PCR-SSCP及免疫组化方法探讨食管鳞癌p53基因突变与p53蛋白表达的关系。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料 取食管癌新鲜组织30例,同一标本分为2份,1份按常规方法提取DNA,另1份经福尔马林固定,石蜡包埋,连续切片。
1.2 PCR-SSCP〔3〕 PCR常规扩增反应后,取10 μl PCR产物与等量电泳缓冲液混合,96℃变性5 min后立即置冰浴,电泳后,凝胶经固定、银染、显影。基因点突变阳性与正常对照2条单链条带比较显示单链条带缺失或多带。阴性对照为野生型p53质粒的PCR产物。
1.3 染色 切片分别染HE、p53蛋白抗体。常规免疫组化染色。光镜观察,并根据组织分化程度分级。
2 结果
2.1 食管鳞癌中p53基因第5~8外显子总突变率为66.7%(20/30),其中,Exon 5为26.7%(8/30),Exon 6为33.3%(10/30),Exon 7为23.3%(7/30),Exon 8为36.7%(11/30)。癌组织中p53蛋白表达的阳性率为43.3%(13/30)。
, 百拇医药
2.2 20例p53基因突变中,单、多外显子突变与p53蛋白表达的关系见表1。经统计学精确概率法检测,单、多外显子突变的蛋白表达率差异有显著性(P<0.05)。另见2例p53蛋白表达阳性而基因突变阴性。
表1 p53基因单外显子、多外显子突变与p53蛋白表达的关系 项别
基因突变
例数
p53蛋白(+)
n
%
单外显子
8
2
, http://www.100md.com
25
多外显子
12
9
75
2.3 p53基因突变及蛋白表达与癌组织学分级以及转移的关系见表2。经统计学精确概率法检测,已转移病例的癌组织中p53基因突变率(91.7%)及蛋白表达率(66.7%)显著高于无转移组(分别为50%,27.8%)(P<0.05)。癌组织学分级间p53基因突变及蛋白表达差异无显著性(P>0.05)。表2 食管癌组织学分级及预后与p53基因突变及蛋白表达的关系 项别
n
p53蛋白(n)
p53基因突变(n)
, 百拇医药
分化程度
Ⅰ
8
5
7
Ⅱ
13
4
7
Ⅲ
9
4
6
转移
, 百拇医药
有
12
8
11
无
18
5
9
3 讨论
p53基因突变是人类肿瘤的一种常见现象〔4〕。我们用PCR-SSCP方法检测30例食管鳞癌p53基因5~8外显子,突变率为66.7%。抗p53蛋白抗体阳性率为43.3%。结果表明p53基因突变及蛋白表达是食管鳞癌中一种常见现象。
, http://www.100md.com 近年来对免疫组化所检测到的p53蛋白作了多方面的研究认为:p53蛋白的表达与p53基因突变存在不一致性〔1〕。本组20例p53基因突变中仅11例有p53蛋白表达,这11例蛋白表达阳性中有9例p53基因显示2~3外显子突变。这表明p53基因突变位点的多寡与蛋白表达有一定关系。单一突变位点p53蛋白表达率明显低于多突变位点,作者推测,这可能与基因单一突变位点引起蛋白的异构不明显,从而p53蛋白的半衰期没有明显变化有关。本文2例p53蛋白表达阳性而不伴基因突变。目前认为有许多因素都可导致p53蛋白在细胞内积聚,从而造成蛋白表达阳性而不伴基因突变的现象〔5〕。综上所述,p53蛋白的表达不能完全反映p53基因突变,因此,检测p53蛋白的表达只是对p53基因突变的初步预测。
p53蛋白表达在许多肿瘤中被认为是预测恶性肿瘤预后的指标之一〔6,7〕,本实验中,有转移组p53蛋白表达率及p53基因突变率显著高于无转移组(P<0.05)。表明p53蛋白表达及基因突变对预测食管鳞癌的预后有一定意义。
, 百拇医药
参考文献
1,Hall PA, Lane DP. p53 in tumour pathology:Can we trust immunohistochemistry? Pathol,1994;172:1
2,Xu L, Chen YS, Huvos AG et al. Overexpression of p53 protein in squamous cell carcinoma of head and neck without apparent gene mutation. Diagn Mol Pathol,1994;3(2):83
3,朱 丹,王 亮,吴. 应用PCR-SSCP银染技术检测食管癌症p53基因点突变. 中华医学遗传学杂志,1994;11(6):354
, 百拇医药
4,Hollstein M, Sidransky D, Vogelstein B et al. p53 mutation in human cancers. Science,1991;253:49
5,Pietenpol JA, Vogelstein B. No room at the p53 inn. Nature,1993;365:17
6,赖日权,罗祝泉,安建成等. p53、p21、p185蛋白表达与横纹肌肉瘤分化及预后的关系. 中华病理学杂志,1997;26(1):35
7,杨 毅,郭雪西,高 伟等. p170、p53、p16和p21蛋白在膀胱癌中表达的意义. 中华病理学杂志,1997;26(5):309
收稿日期:1998-10-21, http://www.100md.com
单位:李淳 程继东 沈忠英(汕头大学医学院肿瘤病理研究室 515031)
关键词:食管肿瘤;基因;p53;蛋白质p53;预后;PCR-SSCP;免疫组织化学
临床与实验病理学杂志990436
分类号 R735.1;R392.31 文献标识码 A
文章编号 1001-7399(1999)04-0363-01
食管鳞癌常伴有p53基因突变和(或)p53蛋白积聚。文献报道p53基因改变与p53蛋白积聚常出现不一致的现象〔1,2〕。我们应用PCR-SSCP及免疫组化方法探讨食管鳞癌p53基因突变与p53蛋白表达的关系。
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1 材料和方法
1.1 材料 取食管癌新鲜组织30例,同一标本分为2份,1份按常规方法提取DNA,另1份经福尔马林固定,石蜡包埋,连续切片。
1.2 PCR-SSCP〔3〕 PCR常规扩增反应后,取10 μl PCR产物与等量电泳缓冲液混合,96℃变性5 min后立即置冰浴,电泳后,凝胶经固定、银染、显影。基因点突变阳性与正常对照2条单链条带比较显示单链条带缺失或多带。阴性对照为野生型p53质粒的PCR产物。
1.3 染色 切片分别染HE、p53蛋白抗体。常规免疫组化染色。光镜观察,并根据组织分化程度分级。
2 结果
2.1 食管鳞癌中p53基因第5~8外显子总突变率为66.7%(20/30),其中,Exon 5为26.7%(8/30),Exon 6为33.3%(10/30),Exon 7为23.3%(7/30),Exon 8为36.7%(11/30)。癌组织中p53蛋白表达的阳性率为43.3%(13/30)。
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2.2 20例p53基因突变中,单、多外显子突变与p53蛋白表达的关系见表1。经统计学精确概率法检测,单、多外显子突变的蛋白表达率差异有显著性(P<0.05)。另见2例p53蛋白表达阳性而基因突变阴性。
表1 p53基因单外显子、多外显子突变与p53蛋白表达的关系 项别
基因突变
例数
p53蛋白(+)
n
%
单外显子
8
2
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25
多外显子
12
9
75
2.3 p53基因突变及蛋白表达与癌组织学分级以及转移的关系见表2。经统计学精确概率法检测,已转移病例的癌组织中p53基因突变率(91.7%)及蛋白表达率(66.7%)显著高于无转移组(分别为50%,27.8%)(P<0.05)。癌组织学分级间p53基因突变及蛋白表达差异无显著性(P>0.05)。表2 食管癌组织学分级及预后与p53基因突变及蛋白表达的关系 项别
n
p53蛋白(n)
p53基因突变(n)
, 百拇医药
分化程度
Ⅰ
8
5
7
Ⅱ
13
4
7
Ⅲ
9
4
6
转移
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有
12
8
11
无
18
5
9
3 讨论
p53基因突变是人类肿瘤的一种常见现象〔4〕。我们用PCR-SSCP方法检测30例食管鳞癌p53基因5~8外显子,突变率为66.7%。抗p53蛋白抗体阳性率为43.3%。结果表明p53基因突变及蛋白表达是食管鳞癌中一种常见现象。
, http://www.100md.com 近年来对免疫组化所检测到的p53蛋白作了多方面的研究认为:p53蛋白的表达与p53基因突变存在不一致性〔1〕。本组20例p53基因突变中仅11例有p53蛋白表达,这11例蛋白表达阳性中有9例p53基因显示2~3外显子突变。这表明p53基因突变位点的多寡与蛋白表达有一定关系。单一突变位点p53蛋白表达率明显低于多突变位点,作者推测,这可能与基因单一突变位点引起蛋白的异构不明显,从而p53蛋白的半衰期没有明显变化有关。本文2例p53蛋白表达阳性而不伴基因突变。目前认为有许多因素都可导致p53蛋白在细胞内积聚,从而造成蛋白表达阳性而不伴基因突变的现象〔5〕。综上所述,p53蛋白的表达不能完全反映p53基因突变,因此,检测p53蛋白的表达只是对p53基因突变的初步预测。
p53蛋白表达在许多肿瘤中被认为是预测恶性肿瘤预后的指标之一〔6,7〕,本实验中,有转移组p53蛋白表达率及p53基因突变率显著高于无转移组(P<0.05)。表明p53蛋白表达及基因突变对预测食管鳞癌的预后有一定意义。
, 百拇医药
参考文献
1,Hall PA, Lane DP. p53 in tumour pathology:Can we trust immunohistochemistry? Pathol,1994;172:1
2,Xu L, Chen YS, Huvos AG et al. Overexpression of p53 protein in squamous cell carcinoma of head and neck without apparent gene mutation. Diagn Mol Pathol,1994;3(2):83
3,朱 丹,王 亮,吴. 应用PCR-SSCP银染技术检测食管癌症p53基因点突变. 中华医学遗传学杂志,1994;11(6):354
, 百拇医药
4,Hollstein M, Sidransky D, Vogelstein B et al. p53 mutation in human cancers. Science,1991;253:49
5,Pietenpol JA, Vogelstein B. No room at the p53 inn. Nature,1993;365:17
6,赖日权,罗祝泉,安建成等. p53、p21、p185蛋白表达与横纹肌肉瘤分化及预后的关系. 中华病理学杂志,1997;26(1):35
7,杨 毅,郭雪西,高 伟等. p170、p53、p16和p21蛋白在膀胱癌中表达的意义. 中华病理学杂志,1997;26(5):309
收稿日期:1998-10-21, http://www.100md.com