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编号:10252020
清毒饮和养正片对环磷酰胺所致的造血抑制小鼠粒系造血的影响
http://www.100md.com 《广州中医药大学学报》 1999年第1期
     作者:李振波 丘和明 刘国普 张惠臣 陈志雄 杨洪涌 陈志炼

    单位:广州中医药大学第一附属医院内科,广州 510405

    关键词:白血病;中药疗法;益气养阴;清热解毒药;治疗应用;清毒饮;药理学;养正片;药理学;小鼠

    广州中医药大学学报990110摘要:为探讨中药配合化疗对白血病的治疗价值,根据白血病化疗后多为虚实夹杂,既有热毒痰瘀又有气阴虚弱的见证,分别设复方中药清毒饮(由七叶一枝花、白花蛇舌草、山慈菇、莪术、胡黄连、大青叶、法半夏、竹茹、田七、生地、大黄、仙鹤草等组成)和养正片(由人参、黄芪、补骨脂、熟地、黄精、赤灵芝、女贞子、旱莲草、鸡内金、田七、虎杖、茜草根等组成),观察两方对环磷酰胺所致的造血抑制小鼠粒系造血的影响。观察指标:外周血白细胞计数、骨髓有核细胞计数及粒单系造血祖细胞培养。结果:两方均能提高外周血白细胞数、骨髓有核细胞数,养正片还能提高中性粒细胞百分数及粒单系造血祖细胞数。表明两方辅助化疗治疗白血病取效的机理可能分别是通过减轻化疗造成的骨髓抑制,改善粒系造血功能两个方面而实现的。
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    中图分类号:R733.7 文献标识码:A

    文章编号:1007-3213(1999)01-0034-04

    Effect of Qingdu Yin and Yangzheng Pian on the Generation of Granulocytic

    System in Mice with Hematopoietic Inhibition

    LI Zhen_bo, QIU He_ming, LIU Guo_pu, ZHANG Hui_chen

    CHEN Zhi_xiong, YANG Hong_yong, CHEN Zhi_lian

    (Dept.of Internal Medicine,the First Affiliated Hospital of Guangzhou
, 百拇医药
    University of TCM,Guangzhou 510405,China)

    Abstract:In order to study the effects of Qingdu Yin (QY) and Yangzheng Pian (YP) on the generation of granulocytes,NIH mice model with hematopoietic inhibition was established by intraperitoneal injection of cyclophosphamide.Forty NIH mice were allocated to 4 groups:QY Group,YP Group,model Group and normal control Group.White blood cells count in peripheral blood,karyocyte count in bone marrow and hemoblastic colony of granulocyte and monocyte systems (CFU-GM) were investigated.The results showed that the number of peripheral WBC and bone marrow karyocytes increased in QY Group and YP Group,and the percentage of neutrophil and the number of CFU-GM increased in YP Group.It is indicated that one of the therapeutic mechanism of QY and YP as a supplement to chemotherapy for leukemia is to improve the hematopoiesis of granulocytic system and reduce the hematopoietic inhibition of bone marrow caused by chemotherapy.
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    Key words:LEUKEMIA/TCD ther.; REINFORCING QI NOURISHING YIN;

    ANTIPYRETIC-DETOXICATE DRUGS/ther.use; @QINGDU YIN/pharmacology;

    @YANGZHENG PIAN/pharmacology; MICE

    我们以自拟的清毒饮和养正片配合化疗治疗白血病,取得了较好的疗效。为了探讨两方对粒系造血的不同作用机制,做了如下实验研究。

    1 材料与方法

    1.1 动物

    NIH 小鼠,雄性,鼠龄 6~8 周,体重 20~23 g,广州中医药大学动物房提供。
, 百拇医药
    1.2 药物

    清毒饮由七叶一枝花 20 g、白花蛇舌草 30 g、胡黄连 15 g、大青叶 15 g、山慈菇 15 g、法半夏 15 g、竹茹 12 g、莪术 12 g、制大黄 6 g、生地 30 g、仙鹤草 30 g、田七片 6 g 组成。

    养正片由黄芪 30 g、人参 12 g、补骨脂 30 g、熟地 20 g、黄精 15 g、赤灵芝 15 g、女贞子 15 g、旱莲草 30 g、鸡内金 10 g、田七片 6 g、虎杖 30 g、茜草根 15 g 组成。

    以上中药饮片由广州中医药大学第一附属医院中药房提供。制剂制备:由本校第一附属医院临床药理研究所制剂室,用水提醇沉法制做(pH7.0 左右),终浓度为每 100 mL 含生药 200 g。

    环磷酰胺(cyclophosphamide,Cy)200 mg/支,上海华联制药公司。批号:970306。
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    1.3 分组与用药

    取 40 只 NIH 小鼠,随机分成 4 组,分别为清毒饮组、养正片组、环磷酰胺(Cy)组、正常组。实验第 1、3 天,前 3 组以 Cy 100 mg/kg 给小鼠腹腔注射,并同时给小鼠灌胃相应中药,浓度为每 100 mL 含 200 g 生药,Cy 组和正常组以生理盐水代替,每次 0.3 mL,1次/d,连续灌胃 6 d,第7天做以下实验。

    1.4 方法

    1.4.1 眼球取血查外周血 WBC 和分类

    1.4.2 骨髓有核细胞计数 脱颈处死小鼠,剥离股骨取小鼠完整右侧股骨用 3% 冰醋酸溶液反复冲洗其骨髓细胞于 10 mL 3% 冰醋酸溶液内充分混匀,4 号针头过滤分散,显微镜下计数。

    1.4.3 粒单系造血祖细胞(colony forming units of granulocyte and monocyte,CFU-GM)培养 A:粒单系集落刺激因子(colony stimulating factor of granulocyte and monocyte GM-CSF)的制备。取小鼠肺、肌组织参照葛忠良法[1]制备 GM-CSF,并做其活性测定,画出肺-肌条件培养液与集落关系曲线。显示肺肌条件培养液有很好的活性,采用 20% 为标准剂量用于实验。B:CFU-GM 的培养,采用葛忠良法[2]稍加改进,取左侧完整股骨将骨髓以 RPNI-1640 培养液冲入 RPMI-1640 培养液中,过 4 号针头,离心,制成骨髓细胞悬液,计数后调至浓度为 5.72×108/L。每个培养体系中含马血清 35%、GM-CSF 20%、骨髓细胞悬液适量,以 RPMI-1640 培养液(1 mL RPMI-1640培养液中内含青霉素、链霉素各 100 U)补足所需体系总量,使体系内骨髓细胞浓度为 2×108/L,置 30 mm 小平皿中,37℃、5% CO2 浓度、饱和空气湿度下培养 7 d,于倒置显微镜下观察,计算 CFU-GM 数。
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    2 结果

    小鼠注射 Cy 后眼屎增多,大便变稀,喜群聚。用清毒饮后眼屎消失,大便正常;用养正片后上述症状虽减轻不明显,但小鼠精神明显好转。

    表 1 清毒饮和养正片对造血抑制小鼠白细胞及骨髓有核细胞的影响()

    N/例

    NWBC/(×109.L-1)

    pN

    pL

    N骨髓有核细胞/(×106.股骨-1)
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    清毒饮组

    10

    6.53±0.67*

    0.53±0.0786

    0.44±0.0709

    5.85±0.84**

    养正片组

    10

    6.57±0.36*

    0.58±0.0964*

    0.40±0.1039
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    7.92±0.75***

    Cy 组

    10

    3.73±0.39

    0.48±0.0625

    0.47±0.0606

    4.48±0.64

    正常组

    10

    6.77±0.56

    0.31±0.0397

    0.66±0.0377
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    14.53±0.82

    *与 Cy 小鼠组比较 P<0.05,**P<0.01,***P<0.001 清毒饮和养正片均能提高 Cy 所致的造血抑制小鼠外周血白细胞总数(NWBC)(均 P<0.05)。养正片能提高中性粒细胞百分数(pN)(P<0.05)。两方均能提高其骨髓有核细胞数(P<0.01,P<0.001)。养正片优于清毒饮,见表 1。养正片并能提高造血抑制小鼠骨髓粒单系祖细胞 CFU-GM 集落数(P<0.001),见表 2。

    表 2 清毒饮和养正片对造血抑制小鼠骨髓CFU-GM 的影响()

    N/例

    NCFU-GM
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    清毒饮

    10

    54.2±12.0

    养正片

    10

    78.4±8.9***

    Cy 组

    10

    43.6±7.3

    正常组

    10

    99.4±10.5

, http://www.100md.com     ***与 Cy 小鼠组比较 P<0.001

    3 讨论

    用中医药治疗肿瘤包括白血病化疗造成的骨髓抑制、胃肠道反应等毒副作用,具有很好的疗效,临床报道很多。综观各家报道,所用方剂大多是以补脾肾、益气血、养阴中药为主组成的[3,4],除了能治疗恶性肿瘤化疗造成的外周血细胞及骨髓的损害外,有些药物还具有化疗增效、提高机体免疫功能的作用[5~8]。此外,还有一类以清热解毒、化痰温胃止呕药为主组成的方药,其除了减轻消化道反应外,还有缓解骨髓抑制等作用[9,10]。我们以自拟的清毒饮和养正片配合化疗治疗白血病,有以下优点:第一,清毒饮方中的七叶一枝花、白花蛇舌草、山慈菇、莪术、胡黄连、大青叶清热解毒抗肿瘤,法半夏、竹茹化痰降逆止呕,田七、生地、大黄、仙鹤草凉血活血止血。其在治疗白血病的同时,又有抵抗化疗的胃肠道反应和骨髓抑制作用;第二,养正片方中的人参、黄芪健脾益气以生血,补骨脂、熟地、黄精、赤灵芝、女贞子、旱莲草补肾填精以养阴,提高机体免疫功能;第三,临床可根据辨证灵活运用,偏于热毒炽盛用清毒饮,偏于气血阴虚用养正片,两者夹杂可两药合用。因为白血病多是虚实夹杂,有热毒痰瘀和气阴虚弱,在化疗过程中更有脾胃受伤和气血耗伤之症,因此使用方便,疗效较好。
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    本实验以 Cy 造成的骨髓抑制小鼠模型模拟人体白血病化疗造成的骨髓抑制状态,以了解清毒饮和养正片分别对抑制的粒系造血的影响,从而说明两方辅助化疗治疗白血病的机理之所在。Cy 是一种烷化剂,能够抑制 DNA 复制,致蛋白质合成障碍,细胞变性,有强烈杀伤骨髓造血细胞的作用,同时又能抑制体液免疫。实验发现给 NIH 小鼠腹腔注射 Cy 能造成骨髓抑制的动物模型,以清毒饮和养正片灌胃小鼠 1 周,显示两方均能提高小鼠外周血白细胞总数和骨髓有核细胞数,养正片优于清毒饮。养正片并能提高中性粒细胞的百分数,提高造血抑制小鼠 CFU-GM。证明两方均能治疗 Cy 造成的骨髓抑制,养正片优于清毒饮。用 Cy 给小鼠注射可见小鼠眼屎增多,大便变稀,导致小鼠热毒炽盛,可以认为是属于中医的毒邪入侵,用清热解毒的清毒饮则可能正好减轻此毒副作用,减轻化疗造成的骨髓抑制;而养正片促进 CFU-GM 的增殖,从而达到升高白细胞和提高中性粒细胞,增强机体抗感染能力。设想,在临床治疗中两方配合,辅助化疗治疗白血病可能会相得益彰,取得更好的疗效。

    基金项目:国家中医药管理局资助课题,编号95C041
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    作者简介:李振波,女,主治医师,博士;

    参考文献:

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    [2] 葛忠良,刘秀珍,白 炎,等.应用 GM-CFU-C 培养技术探讨再生障碍性贫血的发病机理[J].中华血液学杂志,1987,8(4):205

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    [7] 王晓瑜,王 黎,侯爱华.扶正消癌汤对肿瘤患者化疗引起的白细胞减少症及免疫功能的影响[J].河南中医药学刊,1996,11(3):55

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    [9] 朱海洪,陈泽涛,齐元富,等.参连温胆合剂治疗化疗所致的白细胞和血小板减少的临床观察和实验研究[J].上海中医药杂志,1997,10(2):13

    [10] 赵国华,张 新,戴卫东.半夏泻心汤在食管癌化疗中减毒作用的临床观察[J].中医研究,1996,9(2):40

    收稿日期:1998-09-23, 百拇医药