增殖细胞核抗原在原发性胆囊癌中的表达及意义
作者：屠金夫 张启瑜 陈必成
单位：
关键词：胆囊肿瘤；增殖细胞核抗原；免疫组织化学法
肝胆胰外科杂志990108 摘要 目的：探讨PCNA在原发性胆囊癌的表达及意义。方法：34例原发性胆囊癌，8例胆囊腺瘤和10例慢性胆囊炎石蜡包埋标本，用SP免疫组织化学方法测定。结果：PCNA在原发性胆囊癌、胆囊腺瘤和慢性胆囊炎中的阳性表达指数分别为43.75±21.73%、7.98±5.19%和4.31±2.15%，原发性胆囊癌PCNA指数显著高于胆囊良性病变(P<0.01)。低分化腺癌PCNA指数显著高于高、中分化者(P<0.01)。结论：原发性胆囊癌的发生发展与细胞的异常增殖有关，PCNA可作为胆囊癌预后的重要指标。
The expression and significanci of proliferating cell nuclear antigen(PCNA) in primary gallbladder carcinoma (PGC)
, 百拇医药
Tu Jinfu,Zhang Qiyu Chen,Bicheng
Department of Surgery,First Hospital,Wenzhou Medical College,Wenzhou325000
Abstrct Objactive：In order to determine the expression and significance of PCNA in PGC.Metheds：SP staining was used to study the expressions of PCNA in patients with PGC(34cases)，adenoma(8cases)，and chronic cholecystitis(10cases).Results：The PCNA index were 43.75±21.73%，7.98±5.19% and 4.31±2.15%，respectively.This index was signficantly higher inmalignant lesions than in benign diseases(P<0.01).Concolution：The gallbladder carcinogensis is associated with the high proliferative activity.The detection of PCNA expression in PGC tissue may be useful in judging the prognosis for PGC.
, http://www.100md.com
Key words Gallbladder carcinoma Proliferating cell nuclear antigen Immunohistocemical method
肿瘤群体增殖动力学参数对研究肿瘤生物学行为有很高的价值。近年来，增殖细胞核抗原(prolif-eratingcellnuclearantigen，PCNA)作为原位检测肿瘤细胞平殖状态的新探针开始用于肿瘤动力学研究。我们采用SP免疫组织化学法观察增殖细胞核抗原在原发性胆囊癌中的表达，探讨其生物学意义。
1材料和方法
1.1 材料：收集我院1991-1997年间经病理证实的原发性胆囊癌34例，胆囊腺瘤8例，慢性胆囊炎10例的石蜡包埋组织标本。原发性胆囊癌34例中，男10例，女24例，年龄38～78岁，平均61.5岁。病理分级属高分化腺癌8例，中分化腺癌11例，低分化腺癌15例。按Nevin分期属Ⅰ期3例，Ⅱ期9例，Ⅲ期3例，Ⅳ期6例，Ⅴ期13例。伴淋巴结、肝脏或腹膜转移18例。
, http://www.100md.com
1.2 试剂：鼠PCNA单抗PC10、SP试剂盒及DAB试剂盒均由福州迈新生物技术开发公司提供。
1.3 方法：采用SP免疫组织染色技术，具体操作按说明书进行。用PBS代替一抗做阴性对照，用已知阳性切片做阳性对照。
1.4 结果判断：以细胞核染成棕褐色作为PCNA阳作者单位：温州医学院附属第一医院普外科(325000)性细胞，选择PCNA标记良好的区域在400倍显微镜下任选5个高倍视野，记数100～200个肿瘤细胞。PCNA标记指数(PCNA-LI)＝阳性细胞数/记数肿瘤细胞总数×100%。数据采用t检验作统计学处理。
2结果
2.1 PCNA表达的部位及指数：PCNA阳性物质分布于细胞核，而胞浆和胞膜均阴性。切片中PCNA阳性细胞分布和阳性细胞着色程度呈异质性。PC-NA-LI在慢性胆囊炎、胆囊腺瘤和原发性胆囊癌依次为4.31±2.15%、7.98±5.19%和43.75±21.73%。原发性胆囊组织PCNA-LI显著高于胆囊良性病变(P<0.01)。
, 百拇医药
2.2 胆囊癌PCNA表达与临床病理关系见附表。低分化腺癌PCNA-LI显著高于高、中分化者(P<0.01)，晚期胆囊癌(NevinⅢ、Ⅳ、Ⅴ)PCNA指数显著高于早期者(NevinⅠ、Ⅱ)。 PCNA-LI与性别、年龄及有无伴发转移等因素无关(P>0.05)。
附表 胆囊癌PCNA表达与临床病理特征关系 病理特征
例数
PCNA-LI(X±s)
P〉值
性别
男
10
40.52±27.15%
, http://www.100md.com
>0.05
女
24
44.77±29.28%
年龄
≥61.5岁
23
45.11±30.05%
>0.05
<61.5岁
11
39.88±21.59%
分化程度
, 百拇医药
高、中分化
19
31.17±13.52%
<0.01
低分化
15
59.75±28.15%
Nevin分期
ⅠⅡ
11
27.23±12.10%
<0.01
, 百拇医药 ⅢⅣⅤ
23
51.19±25.32%
转移
有
18
48.01±30.12%
<0.01
无
16
39.72±20.89%
3讨论
目前肿瘤增殖力学研究方法有核分裂相记数、3H-胸腺嘧啶标记、Brd摄入法、细胞核DNA含量、增殖细胞核抗原检测及核仁组成区嗜银染色等[1]。其中原位检测PCNA方法操作简单，尚能用于石蜡组织，可进行大规模回顾性研究，有较高的实用价值。PCNA是近年发现的聚集在S期复制细胞核内的细胞周期依赖性蛋白。在细胞周期过程中，PCNA的合成G1期后开始增加，到S期达到高峰，G2-M期逐渐减少，M期细胞中含量甚微。PCNA作为DNA聚合酶，直接参与了细胞增殖过程中的DNA复制，其含量和表达反映了细胞的增殖过程中的DNA复制，其含量和表达反映了细胞的增殖活性。我们发现原发胆囊癌PCNA表达标记指数明显高于胆囊良性病变(P<0.01)，表明胆囊良恶性病变组织中处于S期的细胞数量明显不同，亦即增殖速度明显不同，提示胆囊癌的发生发展同细胞异常增殖有关。由于原发性胆囊癌手术切除率低，手术侵袭性大，且手术预后差，所以寻找可靠、准确的判定预后的指标已成为原发性胆囊癌生物学行为研究的重点。已有研究发现原发胆囊癌病理类型，病理分级，临床分期及有淋巴结转移等病理特征与胆囊癌预后密切相关[2]。近年来研究表明PCNA表达与一些恶性肿瘤生物学行为有密切的关系，但有关原发性胆囊癌PCNA的研究不多，且胆囊癌PCNA的表达与临床病理关系的结论尚不一致[3，4]。我们发现，PCNA在低分化腺癌表达显著高于高、中分化者(P<0.01)，晚期胆囊癌(NevinⅢ、Ⅳ、Ⅴ)PCNA指数高于早期者(NevinⅠ、Ⅱ)(P<0.05)。因此，胆囊癌PCNA高表达，则预后不良，PCNA可反应胆囊癌的生物学特征。
, 百拇医药
参考文献
1 周丁华，晏才杰.肿瘤增殖力学的方法学.国外医学肿瘤学分册，1995，22∶136
2 Henson DE，Sanavedra JA，Corle D.Carcinoma of thegallbladder，histologic type，stage of disease，grade and survivel rates.Cancer，1992，70∶1493
3 卿德科，夏亮芳，张贤良.增殖细胞核抗原在原发性胆囊癌中的表达及意义.中华外科杂志，1995，33∶102
4 杨竹林，钟德许，李永国等.胆系恶性肿瘤细胞核抗原表达及意义.中华外科杂志，1995，33∶437
(收稿：1998-10-02，修回：1998-12-31), http://www.100md.com
单位：
关键词：胆囊肿瘤；增殖细胞核抗原；免疫组织化学法
肝胆胰外科杂志990108 摘要 目的：探讨PCNA在原发性胆囊癌的表达及意义。方法：34例原发性胆囊癌，8例胆囊腺瘤和10例慢性胆囊炎石蜡包埋标本，用SP免疫组织化学方法测定。结果：PCNA在原发性胆囊癌、胆囊腺瘤和慢性胆囊炎中的阳性表达指数分别为43.75±21.73%、7.98±5.19%和4.31±2.15%，原发性胆囊癌PCNA指数显著高于胆囊良性病变(P<0.01)。低分化腺癌PCNA指数显著高于高、中分化者(P<0.01)。结论：原发性胆囊癌的发生发展与细胞的异常增殖有关，PCNA可作为胆囊癌预后的重要指标。
The expression and significanci of proliferating cell nuclear antigen(PCNA) in primary gallbladder carcinoma (PGC)
, 百拇医药
Tu Jinfu,Zhang Qiyu Chen,Bicheng
Department of Surgery,First Hospital,Wenzhou Medical College,Wenzhou325000
Abstrct Objactive：In order to determine the expression and significance of PCNA in PGC.Metheds：SP staining was used to study the expressions of PCNA in patients with PGC(34cases)，adenoma(8cases)，and chronic cholecystitis(10cases).Results：The PCNA index were 43.75±21.73%，7.98±5.19% and 4.31±2.15%，respectively.This index was signficantly higher inmalignant lesions than in benign diseases(P<0.01).Concolution：The gallbladder carcinogensis is associated with the high proliferative activity.The detection of PCNA expression in PGC tissue may be useful in judging the prognosis for PGC.
, http://www.100md.com
Key words Gallbladder carcinoma Proliferating cell nuclear antigen Immunohistocemical method
肿瘤群体增殖动力学参数对研究肿瘤生物学行为有很高的价值。近年来，增殖细胞核抗原(prolif-eratingcellnuclearantigen，PCNA)作为原位检测肿瘤细胞平殖状态的新探针开始用于肿瘤动力学研究。我们采用SP免疫组织化学法观察增殖细胞核抗原在原发性胆囊癌中的表达，探讨其生物学意义。
1材料和方法
1.1 材料：收集我院1991-1997年间经病理证实的原发性胆囊癌34例，胆囊腺瘤8例，慢性胆囊炎10例的石蜡包埋组织标本。原发性胆囊癌34例中，男10例，女24例，年龄38～78岁，平均61.5岁。病理分级属高分化腺癌8例，中分化腺癌11例，低分化腺癌15例。按Nevin分期属Ⅰ期3例，Ⅱ期9例，Ⅲ期3例，Ⅳ期6例，Ⅴ期13例。伴淋巴结、肝脏或腹膜转移18例。
, http://www.100md.com
1.2 试剂：鼠PCNA单抗PC10、SP试剂盒及DAB试剂盒均由福州迈新生物技术开发公司提供。
1.3 方法：采用SP免疫组织染色技术，具体操作按说明书进行。用PBS代替一抗做阴性对照，用已知阳性切片做阳性对照。
1.4 结果判断：以细胞核染成棕褐色作为PCNA阳作者单位：温州医学院附属第一医院普外科(325000)性细胞，选择PCNA标记良好的区域在400倍显微镜下任选5个高倍视野，记数100～200个肿瘤细胞。PCNA标记指数(PCNA-LI)＝阳性细胞数/记数肿瘤细胞总数×100%。数据采用t检验作统计学处理。
2结果
2.1 PCNA表达的部位及指数：PCNA阳性物质分布于细胞核，而胞浆和胞膜均阴性。切片中PCNA阳性细胞分布和阳性细胞着色程度呈异质性。PC-NA-LI在慢性胆囊炎、胆囊腺瘤和原发性胆囊癌依次为4.31±2.15%、7.98±5.19%和43.75±21.73%。原发性胆囊组织PCNA-LI显著高于胆囊良性病变(P<0.01)。
, 百拇医药
2.2 胆囊癌PCNA表达与临床病理关系见附表。低分化腺癌PCNA-LI显著高于高、中分化者(P<0.01)，晚期胆囊癌(NevinⅢ、Ⅳ、Ⅴ)PCNA指数显著高于早期者(NevinⅠ、Ⅱ)。 PCNA-LI与性别、年龄及有无伴发转移等因素无关(P>0.05)。
附表 胆囊癌PCNA表达与临床病理特征关系 病理特征
例数
PCNA-LI(X±s)
P〉值
性别
男
10
40.52±27.15%
, http://www.100md.com
>0.05
女
24
44.77±29.28%
年龄
≥61.5岁
23
45.11±30.05%
>0.05
<61.5岁
11
39.88±21.59%
分化程度
, 百拇医药
高、中分化
19
31.17±13.52%
<0.01
低分化
15
59.75±28.15%
Nevin分期
ⅠⅡ
11
27.23±12.10%
<0.01
, 百拇医药 ⅢⅣⅤ
23
51.19±25.32%
转移
有
18
48.01±30.12%
<0.01
无
16
39.72±20.89%
3讨论
目前肿瘤增殖力学研究方法有核分裂相记数、3H-胸腺嘧啶标记、Brd摄入法、细胞核DNA含量、增殖细胞核抗原检测及核仁组成区嗜银染色等[1]。其中原位检测PCNA方法操作简单，尚能用于石蜡组织，可进行大规模回顾性研究，有较高的实用价值。PCNA是近年发现的聚集在S期复制细胞核内的细胞周期依赖性蛋白。在细胞周期过程中，PCNA的合成G1期后开始增加，到S期达到高峰，G2-M期逐渐减少，M期细胞中含量甚微。PCNA作为DNA聚合酶，直接参与了细胞增殖过程中的DNA复制，其含量和表达反映了细胞的增殖过程中的DNA复制，其含量和表达反映了细胞的增殖活性。我们发现原发胆囊癌PCNA表达标记指数明显高于胆囊良性病变(P<0.01)，表明胆囊良恶性病变组织中处于S期的细胞数量明显不同，亦即增殖速度明显不同，提示胆囊癌的发生发展同细胞异常增殖有关。由于原发性胆囊癌手术切除率低，手术侵袭性大，且手术预后差，所以寻找可靠、准确的判定预后的指标已成为原发性胆囊癌生物学行为研究的重点。已有研究发现原发胆囊癌病理类型，病理分级，临床分期及有淋巴结转移等病理特征与胆囊癌预后密切相关[2]。近年来研究表明PCNA表达与一些恶性肿瘤生物学行为有密切的关系，但有关原发性胆囊癌PCNA的研究不多，且胆囊癌PCNA的表达与临床病理关系的结论尚不一致[3，4]。我们发现，PCNA在低分化腺癌表达显著高于高、中分化者(P<0.01)，晚期胆囊癌(NevinⅢ、Ⅳ、Ⅴ)PCNA指数高于早期者(NevinⅠ、Ⅱ)(P<0.05)。因此，胆囊癌PCNA高表达，则预后不良，PCNA可反应胆囊癌的生物学特征。
, 百拇医药
参考文献
1 周丁华，晏才杰.肿瘤增殖力学的方法学.国外医学肿瘤学分册，1995，22∶136
2 Henson DE，Sanavedra JA，Corle D.Carcinoma of thegallbladder，histologic type，stage of disease，grade and survivel rates.Cancer，1992，70∶1493
3 卿德科，夏亮芳，张贤良.增殖细胞核抗原在原发性胆囊癌中的表达及意义.中华外科杂志，1995，33∶102
4 杨竹林，钟德许，李永国等.胆系恶性肿瘤细胞核抗原表达及意义.中华外科杂志，1995，33∶437
(收稿：1998-10-02，修回：1998-12-31), http://www.100md.com