慢性活动性肝炎患者外周血淋巴细胞亚群及其IL2受体和转铁蛋白受体的表达
作者：唐望先 李品兰 张文英 李绍白
单位：同济医科大学附属同济医院肝病研究所
关键词：肝炎,慢性活动性；淋巴细胞；白细胞介素2；转铁蛋白；受体
摘要 报道9例慢性活动性肝炎 摘要 报道9例慢性活动性肝炎(CAH),12例慢性重症肝炎(CSH)和10名健康献血员的外周血淋巴细胞,白细胞介素2(IL2)受体,转铁蛋白受体(IFR)表达及其丝裂原诱导反应的结果,两组患者的OKT3均减少,OKT8均增加,TH/TS比值较正常人明显降低,p均<0.01。两组患者IL2受体表达增加,尤以CSH组显著,但PHA刺激后变化不明显。两组患者IFR表达增加,植物血凝素刺激后,转化率明显低于正常人(p<0.01)。本结果表明CAH与机体的免疫应答及调控机制紊乱有密切关系。
, http://www.100md.com
慢性活动性肝炎(CAH)与机体的免疫应答及调控机制紊乱有密切关系。参与免疫应答及其调控的淋巴细胞亚群在CAH的变化报道不尽一致[1]。我们对CAH患者外周血淋巴细胞表面白细胞介素2(IL2)受体和转铁蛋白受体(IFR)的表达及其丝裂原诱导的反应进行了研究,现报道如下。
材料和方法
一.研究对象
1.CAH组:9例患者系本院内科门诊及住院病人,符合1984年南宁会议CAH诊断标准。
2.慢性重症肝炎组(CSH):系严重的慢性活动性肝炎患者或重度活动性肝硬化患者,共12例,符合1984年南宁会议CSH诊断标准。
3.正常对照组:本院健康献血员工10名。均于早晨抽血并同时作常规肝功能检查。
, 百拇医药
二.单克隆抗体
OKT4,OKT8,OKT3,抗Bc抗IL2受体及抗IFR的单克隆抗体均为武汉生物制品研究所提供，各种抗体已在第三届国际人类白细胞分化抗原会议上鉴定。
三，淋巴细胞亚群及受体表达分析方法
取新鲜肝素抗凝血2ml，用淋巴细胞分层液离心分离(2000r/min,25分钟)。分离出单核细胞，并用1640液调细胞浓度至2×106/ml。然后采用陈平等改良的微量细胞毒试验分析各类L-C亚群及IL2受体与IFR表达细胞。同时，用植物血凝素(PHA)加入培养孔，2小时后观察IL2及IFR的变化。
四.统计学处理
应用t检验进行分析。
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转化率=(刺激后-刺激前)/刺激前*100%
结果
一.两组患者外周血肝功能，乙型肝炎病毒(HBA)以及淋巴细胞亚群的变化
两组的γ-谷氨酰转肽酶γ-GT与正常组比较均明显升高(p<0.01)。CSH组的ALT(丙氨酸转氨酶)与正常组比较明显升高(P〈0.01)。两组患者HBV感染阳性,尤以CSH组更严重(表1).外周血淋巴细胞亚群结果表明,OKT3+细胞在两组均减少(P<0.01),而
细胞则增加(P<0.01).TH/TS比值较正常人明显降低,且以CSH组更明显.B淋巴细胞在两组均有所升高,但仅CAH组与正常组有显著差异(表2)。
, 百拇医药
二.PHA刺激前后的IL2受体表达
在PHA刺激前,两组患者外周血淋巴细胞
表1 两组患者肝功能及HBV感染指标
组别
例数
ALT
γ-GT
HBsAg
HBeAg
HBeAb
HBcAb
+
, 百拇医药
-
+
-
+
-
+
-
正常
20
30±6
40±10
20
20
20
, http://www.100md.com
20
CAH
9
34±31
146±98*
4
5
3
6
1
8
8
1
CSH
, http://www.100md.com
12
170±111*
123±79*
9
3
6
6
1
11
12
0
注:"+"为阳性;"_"为阴性.*与正常组比较,P<0.01
的IL2受体表达均增加,尤其CSH组病人IL2的表达较之正常人增加(P<0.05)。而PHA刺激后IL2受体的表达3组之间差异无显著意义。比较3组受试者PHA刺激后IL2受体表达的增加率显示:两组肝炎病人的IL2表达对PHA的反应性明显减弱(表3)。
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三.PHA刺激前后IFR的表达
刺激前两组肝炎患者IFR表达细胞增加,CSH组增高显著(P<0.01),而刺激后,CAH患者的IFR表达则明显低于其正常组。IFR在PHA刺激后表达增加的百分率在两组肝炎患者均低于正常人,以CSH更明显(表3)。表2 两组患者外周血淋巴细胞及其亚群(
)
组别
OKT3%
OKT4%
OKT8%
, http://www.100md.com
TH/TS
B细胞(%)
正常
62.5±4.7
44.4±2.7
27.1±11.3
1.80±0.2
14.3±2.2
CAH
49.8±3.7*
52.4±3.5
49.9±4.8*
, http://www.100md.com
1.12±0.1*
28.2±4.3*
CSH
43.0±3.8*
43.7±6.0
43.5±5.9*
1.01±0.1*
19.7±7.0
注:与正常组比较*P<0.01
表3 PHA刺激前后IL2表达的淋巴细胞()
, 百拇医药
组别
刺激前(%)
刺激后(%)
转化率(%)
正常
6.9±1.6
29.3±4.2
554±159
CAH
13.2±4.8
29.1±5.7
228±70*
, 百拇医药 CSH
17.3±5.4*
36.6±5.0
239±47*
注:与正常组比较*P<0.05
表4 PHA刺激前后IFR表达的淋巴细胞()
组别
刺激前(%)
刺激后(%)
转化率(%)
, http://www.100md.com
正常
10.7±2.1
43.4±2.9
432±84
CAH
15.4±3.8
24.2±2.8*
57±16Δ
CSH
31.3±5.3*
42.9±6.9
50±15*
, 百拇医药
注:与正常组比较*P<0.01ΔP<0.05
讨论
慢性活动性肝炎时,肝细胞损伤并非HBV直接所致,而是细胞毒淋巴细胞与受感染细胞表面的病毒抗原反应的结果。因而,了解CAH患者参与免疫反应的淋巴细胞的变化具有重要的意义。本研究证明两组慢性肝炎患者外周血B淋巴细胞增高,T细胞亚群中,OKT8亦明显升高,而TH/TS比值降低,这与其他作者的报道一致[3]。结果提示:慢性活动肝炎患者中TS细胞表达型增加,这可能与肝炎病毒抗原直接诱导或通过某种血清因子促进TS抗原表达有关[4]。B细胞功能增加则可能是机体产生抗体增加的免疫细胞学基础。
正常人外周血的淋巴细胞表面IL2受体表达较少,但在HBV感染的患者其淋巴细胞表面IL2受体表达增加,我们检测了12例CSH患者,其肝脏功能受到严重损害(表1)。实验结果提示:HBV抗原,尤其是HBsAg的感染后,病毒核心部分与肝细胞的核心部分整合,改变细胞特性,促进细胞表面IL2受体表达,从而诱导产生具有高杀伤活性的T细胞亚群,这与其他作者的实验结果一致[5]。当丝裂原刺激时,正常人的IL2R表达明显增加,但CAH和CSH组未增加。这提示,在肝炎患者已存在IL2受体高表达的水平上淋巴细胞表面的IL2受体对PHA刺激而更多表达的反应性明显减弱。这种反应性的减弱可能与IL2受体表型淋巴细胞有其最大表达数或者血清中存在某种因子防止过分表达有关。
, 百拇医药
本实验还证明:CAH患者IFR表达增加,而接受丝裂原刺激后,IFR表达却不如正常人明显。这进一步提示:HBV抗原可诱导淋巴细胞表达IFR。这种反映细胞分裂增殖标志的淋巴细胞表达增加明显,CAH时,淋巴细胞增殖增加.但是,PHA诱导的IFR表达减少,可能与HBV抗原直接降低了淋巴细胞对PHA的增殖反应性或提高增殖反应的刺激阈值有关。
总之,慢性活动性肝炎患者外周血淋巴细胞中TS表型增加,IL2受体及IFR表达增加,这均可能与HBV抗原刺激淋巴细胞增殖转化或活化有关。
参考文献
1.郝连杰.慢性乙型肝炎病人外周血T细胞亚群及血清因子的初步研究.中国免疫学杂志1988;4:96.
2.陈平,等.一种简易检测外周血T,B细胞总数及T细胞亚群的新方法.免疫学快报1988;8:1301.
, 百拇医药
3.Thomas Y,et al.Functional analysis of human T cell subsets defined by monoclonal antibodies.J Exp Med 1981;154:459.
4.Barnaba V,et al.T cell subsets in the hyporsponsiveness to hepatitis B surface antigen (HBsAg) and antigen-specific suppressor lymphocytes in chronic hepatitis B virus (HBV) infection .Clin Immunol Innunopathol1985;34:284
5.Yoshiok K,et al.Interleukin-2 activity in chronic active liver diseases response by T cell and in the autologous mixed lymphocyte reaction.Clin Exp Immunol 1984;56:668.
*武汉,邮政编码430030, http://www.100md.com
单位：同济医科大学附属同济医院肝病研究所
关键词：肝炎,慢性活动性；淋巴细胞；白细胞介素2；转铁蛋白；受体
摘要 报道9例慢性活动性肝炎 摘要 报道9例慢性活动性肝炎(CAH),12例慢性重症肝炎(CSH)和10名健康献血员的外周血淋巴细胞,白细胞介素2(IL2)受体,转铁蛋白受体(IFR)表达及其丝裂原诱导反应的结果,两组患者的OKT3均减少,OKT8均增加,TH/TS比值较正常人明显降低,p均<0.01。两组患者IL2受体表达增加,尤以CSH组显著,但PHA刺激后变化不明显。两组患者IFR表达增加,植物血凝素刺激后,转化率明显低于正常人(p<0.01)。本结果表明CAH与机体的免疫应答及调控机制紊乱有密切关系。
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慢性活动性肝炎(CAH)与机体的免疫应答及调控机制紊乱有密切关系。参与免疫应答及其调控的淋巴细胞亚群在CAH的变化报道不尽一致[1]。我们对CAH患者外周血淋巴细胞表面白细胞介素2(IL2)受体和转铁蛋白受体(IFR)的表达及其丝裂原诱导的反应进行了研究,现报道如下。
材料和方法
一.研究对象
1.CAH组:9例患者系本院内科门诊及住院病人,符合1984年南宁会议CAH诊断标准。
2.慢性重症肝炎组(CSH):系严重的慢性活动性肝炎患者或重度活动性肝硬化患者,共12例,符合1984年南宁会议CSH诊断标准。
3.正常对照组:本院健康献血员工10名。均于早晨抽血并同时作常规肝功能检查。
, 百拇医药
二.单克隆抗体
OKT4,OKT8,OKT3,抗Bc抗IL2受体及抗IFR的单克隆抗体均为武汉生物制品研究所提供，各种抗体已在第三届国际人类白细胞分化抗原会议上鉴定。
三，淋巴细胞亚群及受体表达分析方法
取新鲜肝素抗凝血2ml，用淋巴细胞分层液离心分离(2000r/min,25分钟)。分离出单核细胞，并用1640液调细胞浓度至2×106/ml。然后采用陈平等改良的微量细胞毒试验分析各类L-C亚群及IL2受体与IFR表达细胞。同时，用植物血凝素(PHA)加入培养孔，2小时后观察IL2及IFR的变化。
四.统计学处理
应用t检验进行分析。
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转化率=(刺激后-刺激前)/刺激前*100%
结果
一.两组患者外周血肝功能，乙型肝炎病毒(HBA)以及淋巴细胞亚群的变化
两组的γ-谷氨酰转肽酶γ-GT与正常组比较均明显升高(p<0.01)。CSH组的ALT(丙氨酸转氨酶)与正常组比较明显升高(P〈0.01)。两组患者HBV感染阳性,尤以CSH组更严重(表1).外周血淋巴细胞亚群结果表明,OKT3+细胞在两组均减少(P<0.01),而
细胞则增加(P<0.01).TH/TS比值较正常人明显降低,且以CSH组更明显.B淋巴细胞在两组均有所升高,但仅CAH组与正常组有显著差异(表2)。, 百拇医药
二.PHA刺激前后的IL2受体表达
在PHA刺激前,两组患者外周血淋巴细胞
表1 两组患者肝功能及HBV感染指标
组别
例数
ALT
γ-GT
HBsAg
HBeAg
HBeAb
HBcAb
+
, 百拇医药
-
+
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+
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+
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正常
20
30±6
40±10
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CAH
9
34±31
146±98*
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CSH
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12
170±111*
123±79*
9
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0
注:"+"为阳性;"_"为阴性.*与正常组比较,P<0.01
的IL2受体表达均增加,尤其CSH组病人IL2的表达较之正常人增加(P<0.05)。而PHA刺激后IL2受体的表达3组之间差异无显著意义。比较3组受试者PHA刺激后IL2受体表达的增加率显示:两组肝炎病人的IL2表达对PHA的反应性明显减弱(表3)。
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三.PHA刺激前后IFR的表达
刺激前两组肝炎患者IFR表达细胞增加,CSH组增高显著(P<0.01),而刺激后,CAH患者的IFR表达则明显低于其正常组。IFR在PHA刺激后表达增加的百分率在两组肝炎患者均低于正常人,以CSH更明显(表3)。表2 两组患者外周血淋巴细胞及其亚群(
)组别
OKT3%
OKT4%
OKT8%
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TH/TS
B细胞(%)
正常
62.5±4.7
44.4±2.7
27.1±11.3
1.80±0.2
14.3±2.2
CAH
49.8±3.7*
52.4±3.5
49.9±4.8*
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1.12±0.1*
28.2±4.3*
CSH
43.0±3.8*
43.7±6.0
43.5±5.9*
1.01±0.1*
19.7±7.0
注:与正常组比较*P<0.01
表3 PHA刺激前后IL2表达的淋巴细胞(
), 百拇医药
组别
刺激前(%)
刺激后(%)
转化率(%)
正常
6.9±1.6
29.3±4.2
554±159
CAH
13.2±4.8
29.1±5.7
228±70*
, 百拇医药 CSH
17.3±5.4*
36.6±5.0
239±47*
注:与正常组比较*P<0.05
表4 PHA刺激前后IFR表达的淋巴细胞(
)组别
刺激前(%)
刺激后(%)
转化率(%)
, http://www.100md.com
正常
10.7±2.1
43.4±2.9
432±84
CAH
15.4±3.8
24.2±2.8*
57±16Δ
CSH
31.3±5.3*
42.9±6.9
50±15*
, 百拇医药
注:与正常组比较*P<0.01ΔP<0.05
讨论
慢性活动性肝炎时,肝细胞损伤并非HBV直接所致,而是细胞毒淋巴细胞与受感染细胞表面的病毒抗原反应的结果。因而,了解CAH患者参与免疫反应的淋巴细胞的变化具有重要的意义。本研究证明两组慢性肝炎患者外周血B淋巴细胞增高,T细胞亚群中,OKT8亦明显升高,而TH/TS比值降低,这与其他作者的报道一致[3]。结果提示:慢性活动肝炎患者中TS细胞表达型增加,这可能与肝炎病毒抗原直接诱导或通过某种血清因子促进TS抗原表达有关[4]。B细胞功能增加则可能是机体产生抗体增加的免疫细胞学基础。
正常人外周血的淋巴细胞表面IL2受体表达较少,但在HBV感染的患者其淋巴细胞表面IL2受体表达增加,我们检测了12例CSH患者,其肝脏功能受到严重损害(表1)。实验结果提示:HBV抗原,尤其是HBsAg的感染后,病毒核心部分与肝细胞的核心部分整合,改变细胞特性,促进细胞表面IL2受体表达,从而诱导产生具有高杀伤活性的T细胞亚群,这与其他作者的实验结果一致[5]。当丝裂原刺激时,正常人的IL2R表达明显增加,但CAH和CSH组未增加。这提示,在肝炎患者已存在IL2受体高表达的水平上淋巴细胞表面的IL2受体对PHA刺激而更多表达的反应性明显减弱。这种反应性的减弱可能与IL2受体表型淋巴细胞有其最大表达数或者血清中存在某种因子防止过分表达有关。
, 百拇医药
本实验还证明:CAH患者IFR表达增加,而接受丝裂原刺激后,IFR表达却不如正常人明显。这进一步提示:HBV抗原可诱导淋巴细胞表达IFR。这种反映细胞分裂增殖标志的淋巴细胞表达增加明显,CAH时,淋巴细胞增殖增加.但是,PHA诱导的IFR表达减少,可能与HBV抗原直接降低了淋巴细胞对PHA的增殖反应性或提高增殖反应的刺激阈值有关。
总之,慢性活动性肝炎患者外周血淋巴细胞中TS表型增加,IL2受体及IFR表达增加,这均可能与HBV抗原刺激淋巴细胞增殖转化或活化有关。
参考文献
1.郝连杰.慢性乙型肝炎病人外周血T细胞亚群及血清因子的初步研究.中国免疫学杂志1988;4:96.
2.陈平,等.一种简易检测外周血T,B细胞总数及T细胞亚群的新方法.免疫学快报1988;8:1301.
, 百拇医药
3.Thomas Y,et al.Functional analysis of human T cell subsets defined by monoclonal antibodies.J Exp Med 1981;154:459.
4.Barnaba V,et al.T cell subsets in the hyporsponsiveness to hepatitis B surface antigen (HBsAg) and antigen-specific suppressor lymphocytes in chronic hepatitis B virus (HBV) infection .Clin Immunol Innunopathol1985;34:284
5.Yoshiok K,et al.Interleukin-2 activity in chronic active liver diseases response by T cell and in the autologous mixed lymphocyte reaction.Clin Exp Immunol 1984;56:668.
*武汉,邮政编码430030, http://www.100md.com