豚鼠耳蜗缺血再灌注损伤的一氧化氮合酶异构体表达
再灌注损伤;,一氧化氮合酶;,异构体；,耳蜗;,豚鼠,,再灌注损伤;,一氧化氮合酶;,异构体；,耳蜗;,豚鼠,1材料与方法,2结果,3讨论,参考文献：
摘要: 目的 建立豚鼠耳蜗缺血再灌注动物模型,观察耳蜗缺血及不同时间段内再灌注时组织中一氧化氮合酶(NOS)异构体的表达及分布的情况。 方法 健康豚鼠40只,随机分对照组(N组)、假手术组(C组)和模型组(A组);模型组分为缺血30 min组(A1组),缺血30 min再灌注6 h组(A2组),缺血30 min再灌注24 h组(A3组)。微动脉夹夹闭一侧颈总动脉并烧灼双侧椎动脉建立耳蜗缺血模型,打开微动脉夹建立再灌注模型,用免疫组织化学法检测耳蜗NOS异构体的表达和变化,并进行图像分析。 结果 A1、A2及A3组均可见内外毛细胞变形,Corti器内外毛细胞缺损,血管纹变薄。NOS异构体在血管纹、螺旋神经节和Corti器都存在表达上调。A2、A3组仅诱导型一氧化氮合酶(iNOS)存在表达上调。 结论 豚鼠耳蜗缺血再灌注有相关的病理改变，如内外毛细胞变形、缺损,血管纹变薄等。NOS异构体在正常耳蜗中有弱阳性到阳性表达。iNOS可能参与耳蜗缺血再灌注的损伤,并抑制内皮细胞型一氧化氮合酶(eNOS)的保护性表达。关键词: 再灌注损伤; 一氧化氮合酶; 异构体； 耳蜗; 豚鼠
内耳微循环障碍是致内耳疾病的最主要的致病因素之一,而缺血再灌注损伤常可使原有的损伤进一步加重,因此，研究内耳微循环障碍的发病机理和病变学基础具有重要意义。关于缺血再灌注损伤的机制目前多认为与自由基损伤、钙离子超载及细胞凋亡等有关，而正常豚鼠耳蜗中各型NOS的分布及表达量存在差异[12]。为探讨耳蜗缺血再灌注损伤中NOS的变化,特别是原生型一氧比氮合酶(cNOS)在耳蜗缺血再灌注损伤中的作用以及各型NOS之间的相互作用，笔者在建立耳蜗缺血再灌注损伤动物模型的基础上,研究NOS三种异构体在不同时间点的表达和变化,探讨其活性与耳蜗缺血再灌注损伤的关系,为耳蜗缺血再灌注损伤的发病机制的研究和内耳疾病的临床诊治提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 动物分组 健康豚鼠40只,雌雄不拘,体质量250~350 g,耳廓反射灵敏[福建医科大学实验动物中心提供,批准证号SYXK(闽)20040007]。随机分为对照组(N组),假手术组(C组)和模型组(A组)；模型组分为缺血30 min组(A1组),缺血30 min再灌注6 h组(A2组),缺血30 min再灌注24 h组(A3组)。
1.2 主要试剂及仪器 兔抗鼠诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、内皮细胞型一氧化氮合酶(eNOS)、脑型一氧化氮合酶(nNOS)单克隆抗体(美国New Mark公司),即用型免疫组织化学广谱试剂盒(福州迈新生物技术开发有限公司),石蜡切片机(AS1512,德国Leitz公司),显微镜(BH2,日本奥林巴斯光学工业株式会社),电子天平(BS110S,德国 Sartorius公司),恒温培养箱(DNP9082,上海精宏实验设备有限公司),图像分析仪(Motic Image Advance 3.0,HongKong) ......
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