人杀菌渗透增强性蛋白N 末端片段在大肠杆菌中的表达
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董 伟,董晓慧,楚雍烈,杨 娥,胡 刚,郑建武
杀菌,渗透增强性蛋白;基因表达;大肠杆菌,人杀菌渗透增强性蛋白N末端片段在大肠杆菌中的表达
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董 伟,董晓慧,楚雍烈,杨 娥,胡 刚,郑建武
西安交通大学医学院免疫学与病原生物学系
【关键词】
杀菌/ 渗透增强性蛋白;基因表达;大肠杆菌
【发表年期页】
2006,1; 11-15
【摘要】
目的 构建表达人杀菌渗透增强性蛋白(BPI) N2端193 个氨基酸的重组表达质粒,诱导表达BPI193 重组蛋白。
方法 应用RT2PCR 的方法从HL260 细胞内扩增出BPI 氨基端1 - 193 个氨基酸的基因序列,克隆入T 载体。将
BPI193 基因片段定向克隆入原核表达载体PET228a 中,构建重组的原核表达质粒PET2BPI193 ,转化大肠杆菌BL21
菌株,用IPTG诱导表达蛋白。应用SDS2PA GE 检测蛋白表达情况,计算机薄层扫描分析蛋白占菌体总蛋白百分比;
Western2blot 技术检测表达蛋白的特异性。结果 从HL260 细胞中扩增得到579bp 的BPI193 基因片段,构建了
T2BPI193亚克隆和PET2BPI193 重组表达质粒。转化大肠杆菌BL21 ,通过IPTG诱导,经SDS2PA GE 检测表明,成功
表达了6His2BPI193 融合蛋白。计算机薄层扫描分析表达量占菌体总蛋白的12 %。Western2blot 检测显示表达产物
具有特异性。结论 成功构建了PET2BPI193 重组表达质粒。在大肠杆菌BL21 内,诱导获得了BPI193 与组氨酸融
合表达的重组蛋白。
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