大自然五花饮质控标准的研究
摘 要 目的：制定大自然五花饮的质控标准。方法 ：采用薄层色谱法和显微鉴别法，对金银花、白茅根、甘草、菊花等进行了定性分析；用反相高效液相色谱法对金银花中绿原酸进行了定量测定。结果：供试品色谱与绿原酸标准品对照液显示相同的斑点。在定量分析实验中，进样量0.2～1.2μg范围内绿原酸具有良好的线性关系，r=0.9981;加样回收率为99.80%；样品测定均在质量控制合格范围内。结论：检测方法较简便，专属性强，可对大自然五花饮进行质量控制。
关键词 金银花；绿原酸；薄层色谱法；反相高效液相法
大自然五花饮是由金银花、菊花、扁豆花等药材组成的袋泡制剂，是根据传统的中医理论提供的处方依据研制的茶剂[1]，具有清热生津、化湿醒脾、凉血解毒的作用，主要用于湿热症[1]。因本品全部为生药原粉，故可采用显微鉴别。方中加金银花，质轻而走表，性凉而清热，清热宣透，疏散上焦在表之湿热选择其作为定量的指标，而绿原酸是其主要有效成分之一，具有一定代表意义。
1 仪器与试药
高效液相色谱仪(BIORAD MODEL 700)、分析天平(SARTORIUS BP 210S)、恒温水浴锅(上海凯乐电子设备厂 UTS.3-1)。绿原酸对照品(由中国药品生物制品检定所提供)，五花饮(010308、010916、020722批准文号，规格5 g/袋)及阴性样品(由广州军区总医院提供)、硅胶H板(青岛海洋化工厂分厂)。 甲醇、乙醇等试剂均为分析纯。乙腈为色谱纯。
2.1 定性分析
2.1.1 显微鉴别
取本品内容物适量，用水合氯醛装片，置显微镜下观察：表皮细胞平行排列，每纵行列多为1个长细胞与两个短细胞(1个木栓细胞及1个硅细胞)相间排列；偶有1个短细胞介于2个长细胞间(白茅根)[2]。纤维成束，壁厚；晶鞘纤维易见，草酸钙方晶大至30μm；具缘纹孔导管较大，稀有网纹导管，木栓细胞红棕色,多角形，棕色块状物，形状不一(甘草)[2]。花粉粒众多，黄色，类球形，外壁较厚，具粗齿，萌发孔3个；T形毛大多断碎；无柄腺毛鞋底形，两两相对排列，外被角质层(菊花)[2]。
2.1.2 金银花的鉴别[2]
取本品2 g，加甲醇25 mL，放置12 h，滤过，滤液浓缩至5 mL 作为供试品溶液。另取缺金银花的阴性样品同上法制得阴性样品溶液。再取绿原酸对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各10μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以ψ(乙酸丁酯-甲酸-水)7∶2.5∶2.5的上层溶液为展开剂，展开，晾干，置紫外灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，与对照品色谱相应的位置上，显相同的荧光斑点，阴性对照液无此斑点。见图1。
2.2 定量分析
绿原酸的含量测定[2](照高效液相色谱法试验[2]测定)。
2.2.1 色谱条件与系统适用性试验
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,ψ(乙腈∶0.4%磷酸溶液)=13∶87为流动相,检测波长为327 nm,流速1 mL/min,室温。理论板数按绿原酸峰计算应不低于1000。
分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性供试液等注入色谱仪,记录色谱图，见图2。从图中可见,阴性样品图谱在绿原酸峰位置处无假阳性峰。本试验条件下绿原酸与其他组分完全分离,主峰与杂质峰分离良好。
2.2.2 对照品溶液的配制
精密称取绿原酸对照品适量，置棕色量瓶中，用φ=50%甲醇制成每1 mL 含40μg的溶液，即得(10 ℃以下保存)。
2.2.3 供试品溶液的配制
取样品5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加φ=50%甲醇50 mL，称定重量，超声处理30 min，放冷，再称定重量，用φ=50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5 mL，置25 mL棕色量瓶中，加φ=50%甲醇至刻度，摇匀，即得。
2.2.4 测定法
照高效液相色谱法[2]测定，分别精密量取对照品溶液、阴性供试液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。
2.3 结果
2.3.1 线性范围
取绿原酸对照液，分别进样0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2μg，得回归方程C=-0001587+17.6958A，r=0.9991(n=6)由此可见，进样量0.2～1.2μg范围内绿原酸具有良好的线性关系。
2.3.2 重现性试验
按上述方法测定同一批号样品6份，分别按样品测试条件测定，含量分别为24.50、2415、24.90、24.26、24.23、24.00 mg/袋(5 g/袋)，平均含量为24.34 mg/袋，RSD为1.20%，表明重现性良好。
2.3.3 回收率试验
取样品2.5 g，精密称定，精密加入含绿原酸对照品为2、3、4 mg，按“2.2.3”以下操作，依法测定，测得平均回收率99.80%。测得数据见表1。 表1 回收率试验(略5)
2.3.4 精密度试验
按上述色谱条件取绿原酸浓度为38.4μg/mL对照品溶液10μg重复进样6次，结果RSD为0.16%，证明精密度良好。
2.3.5 稳定性试验
对供试品溶液在0、1、2、4、8、12、24 h进样测定7次，样品含量无明显差异。表明供试品溶液在24 h内稳定。
2.3.6 样品测定：按上述方法测定三个批号的样品，结果见表2。表2 样品的含量测定结果(略)
3 讨论
3.1 本试验采用高效液相色谱法测定大自然五花饮中绿原酸的含量，方法简便易行，结果可靠，可作生产厂家及医院制剂内控质量标准的分析方法之一。
3.2 本药由散剂改革袋泡茶剂，主要目的就在于使病人服用方便，能最大限度保护挥发性有效成分。袋泡茶剂具有汤剂的特点，发挥作用迅速，以绿原酸作为本药的质量指标，能够客观准确地反映本药的内在质量和疗效。
参考文献
[1] 孙维峰，康国治.大自然五花饮治疗温病湿热症疗效观察[J].新中医,1996，增刊：63.
[2] 中国药典(2000年版一部)[S].2000.65、177、附录：38.
( 广州军区广州总医院药剂科 广东 广州 510010), 百拇医药(赵玮 兰峻 吴新荣)
关键词 金银花；绿原酸；薄层色谱法；反相高效液相法
大自然五花饮是由金银花、菊花、扁豆花等药材组成的袋泡制剂，是根据传统的中医理论提供的处方依据研制的茶剂[1]，具有清热生津、化湿醒脾、凉血解毒的作用，主要用于湿热症[1]。因本品全部为生药原粉，故可采用显微鉴别。方中加金银花，质轻而走表，性凉而清热，清热宣透，疏散上焦在表之湿热选择其作为定量的指标，而绿原酸是其主要有效成分之一，具有一定代表意义。
1 仪器与试药
高效液相色谱仪(BIORAD MODEL 700)、分析天平(SARTORIUS BP 210S)、恒温水浴锅(上海凯乐电子设备厂 UTS.3-1)。绿原酸对照品(由中国药品生物制品检定所提供)，五花饮(010308、010916、020722批准文号，规格5 g/袋)及阴性样品(由广州军区总医院提供)、硅胶H板(青岛海洋化工厂分厂)。 甲醇、乙醇等试剂均为分析纯。乙腈为色谱纯。
2.1 定性分析
2.1.1 显微鉴别
取本品内容物适量，用水合氯醛装片，置显微镜下观察：表皮细胞平行排列，每纵行列多为1个长细胞与两个短细胞(1个木栓细胞及1个硅细胞)相间排列；偶有1个短细胞介于2个长细胞间(白茅根)[2]。纤维成束，壁厚；晶鞘纤维易见，草酸钙方晶大至30μm；具缘纹孔导管较大，稀有网纹导管，木栓细胞红棕色,多角形，棕色块状物，形状不一(甘草)[2]。花粉粒众多，黄色，类球形，外壁较厚，具粗齿，萌发孔3个；T形毛大多断碎；无柄腺毛鞋底形，两两相对排列，外被角质层(菊花)[2]。
2.1.2 金银花的鉴别[2]
取本品2 g，加甲醇25 mL，放置12 h，滤过，滤液浓缩至5 mL 作为供试品溶液。另取缺金银花的阴性样品同上法制得阴性样品溶液。再取绿原酸对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各10μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以ψ(乙酸丁酯-甲酸-水)7∶2.5∶2.5的上层溶液为展开剂，展开，晾干，置紫外灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，与对照品色谱相应的位置上，显相同的荧光斑点，阴性对照液无此斑点。见图1。
2.2 定量分析
绿原酸的含量测定[2](照高效液相色谱法试验[2]测定)。
2.2.1 色谱条件与系统适用性试验
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,ψ(乙腈∶0.4%磷酸溶液)=13∶87为流动相,检测波长为327 nm,流速1 mL/min,室温。理论板数按绿原酸峰计算应不低于1000。
分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性供试液等注入色谱仪,记录色谱图，见图2。从图中可见,阴性样品图谱在绿原酸峰位置处无假阳性峰。本试验条件下绿原酸与其他组分完全分离,主峰与杂质峰分离良好。
2.2.2 对照品溶液的配制
精密称取绿原酸对照品适量，置棕色量瓶中，用φ=50%甲醇制成每1 mL 含40μg的溶液，即得(10 ℃以下保存)。
2.2.3 供试品溶液的配制
取样品5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加φ=50%甲醇50 mL，称定重量，超声处理30 min，放冷，再称定重量，用φ=50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5 mL，置25 mL棕色量瓶中，加φ=50%甲醇至刻度，摇匀，即得。
2.2.4 测定法
照高效液相色谱法[2]测定，分别精密量取对照品溶液、阴性供试液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。
2.3 结果
2.3.1 线性范围
取绿原酸对照液，分别进样0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2μg，得回归方程C=-0001587+17.6958A，r=0.9991(n=6)由此可见，进样量0.2～1.2μg范围内绿原酸具有良好的线性关系。
2.3.2 重现性试验
按上述方法测定同一批号样品6份，分别按样品测试条件测定，含量分别为24.50、2415、24.90、24.26、24.23、24.00 mg/袋(5 g/袋)，平均含量为24.34 mg/袋，RSD为1.20%，表明重现性良好。
2.3.3 回收率试验
取样品2.5 g，精密称定，精密加入含绿原酸对照品为2、3、4 mg，按“2.2.3”以下操作，依法测定，测得平均回收率99.80%。测得数据见表1。 表1 回收率试验(略5)
2.3.4 精密度试验
按上述色谱条件取绿原酸浓度为38.4μg/mL对照品溶液10μg重复进样6次，结果RSD为0.16%，证明精密度良好。
2.3.5 稳定性试验
对供试品溶液在0、1、2、4、8、12、24 h进样测定7次，样品含量无明显差异。表明供试品溶液在24 h内稳定。
2.3.6 样品测定：按上述方法测定三个批号的样品，结果见表2。表2 样品的含量测定结果(略)
3 讨论
3.1 本试验采用高效液相色谱法测定大自然五花饮中绿原酸的含量，方法简便易行，结果可靠，可作生产厂家及医院制剂内控质量标准的分析方法之一。
3.2 本药由散剂改革袋泡茶剂，主要目的就在于使病人服用方便，能最大限度保护挥发性有效成分。袋泡茶剂具有汤剂的特点，发挥作用迅速，以绿原酸作为本药的质量指标，能够客观准确地反映本药的内在质量和疗效。
参考文献
[1] 孙维峰，康国治.大自然五花饮治疗温病湿热症疗效观察[J].新中医,1996，增刊：63.
[2] 中国药典(2000年版一部)[S].2000.65、177、附录：38.
( 广州军区广州总医院药剂科 广东 广州 510010), 百拇医药(赵玮 兰峻 吴新荣)