腺病毒介导HAV结构基因表达及其产物的免疫学性质检测
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吴 娟；李嘉琦；孙茂盛；戴长柏
重组腺病毒|HAV|vp3+vp1|免疫反应,关键词：
参见附件。
吴 娟；李嘉琦；孙茂盛；戴长柏 中国医学科学院协和医科大学医学生物学研究所 云南 昆明650106中国医学科学院协和医科大学医学生物学研究所云南 昆明650118；云南烟草科学研究院生物技术重点实验室 免疫学杂志 2002 3
关键词：重组腺病毒；HAV；vp3+vp1；免疫反应
目的 探讨重组腺病毒免疫实验动物后的抗体反应。方法 利用RT-PCR方法,从HAV-L8株的RNA中扩增出结构蛋白vp3+vpl基因,克隆到穿梭质粒pXCX2 NotI上。采用磷酸钙-DNA共沉淀技术,将E1缺失的复制缺陷型腺病毒载体pJM17与pXCX2-CMV-HAV共转染293细胞。结果 通过胞内同源重组,经RT-PCR、免疫荧光染色和蛋白印迹鉴定表明,获得了复制缺陷型重组腺病毒rAdHAV。纯化后的rAdHAV滴度为1×109.0TCID50/mL。昆明种小白鼠口服rAdHAV后,诱导产生了抗HAV IgG。结论 复制缺陷型腺病毒可望成为发展口服病毒疫苗的有效载体系统。
关键词：重组腺病毒；HAV；vp3+vp1；免疫反应
目的 探讨重组腺病毒免疫实验动物后的抗体反应。方法 利用RT-PCR方法,从HAV-L8株的RNA中扩增出结构蛋白vp3+vpl基因,克隆到穿梭质粒pXCX2 NotI上。采用磷酸钙-DNA共沉淀技术,将E1缺失的复制缺陷型腺病毒载体pJM17与pXCX2-CMV-HAV共转染293细胞。结果 通过胞内同源重组,经RT-PCR、免疫荧光染色和蛋白印迹鉴定表明,获得了复制缺陷型重组腺病毒rAdHAV。纯化后的rAdHAV滴度为1×109.0TCID50/mL。昆明种小白鼠口服rAdHAV后,诱导产生了抗HAV IgG。结论 复制缺陷型腺病毒可望成为发展口服病毒疫苗的有效载体系统。
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