血清脯肽酶与肝纤维化
1中国人民解放军北京军区总医院肝病研究所 北京市 100700
2中国人民解放军89医院 山东省潍坊市 261000
项目负责人 胡大荣中国人民解放军北京军区总医院肝病研究所 北京市 100700
收稿日期 1999-07-11 接收日期 1999-11-08
Subject headings liver cirrhosis/diagnosis; hepatitis/diagnosis
, 百拇医药 主题词 肝硬化/诊断；肝炎/诊断；脯肽酶
肽酶(PLD)参与胶原蛋白降解，是反映肝纤维化进展的良好指标[1]. 血清PLD测定已被《病毒性肝炎防治方案》推荐为慢性肝病常规检测项目[2]. 本文在已报道的基础上[3]，进一步评价PLD在慢性肝病诊断中的意义.
1 材料和方法
1.1 材料 昆明小鼠130只，鼠龄8wk～10wk，体质量25g～40g. 肝纤维化模型采用间断腹腔注射CCl4建立. 采集血液和肝组织标本在末次注射CCl4后96h进行. 根据注射CCl4周数(1，3，6，9，12wk)分5组，每组20只. 另30只以生理盐水替代CCl4作正常对照(对照组). 测定血清PLD及ALT水平. 参照Schvacz标准对肝纤维化分级[4]. Ⅰ级：无明显胶原纤维和成纤维细胞增生；Ⅱ级：胶原纤维由汇管区或中央静脉向外轻度延伸，成纤维细胞轻度增生；Ⅲ级：为假小叶雏型形成，成纤维细胞活跃增生；Ⅳ级：典型假小叶形成. Ⅰ～Ⅳ级分别计1～4分. 根据分级计算各组肝纤维化总积分(Tf)和平均积分(Mf). Mf=Tf/n(n为每组动物数).
, 百拇医药
1.2 临床应用 轻度慢性肝炎127例，中度慢性肝炎456例，肝硬变241例，分别提供184例、796和639份共1619菅.瓯 164例诊断经组织学证实，其中132例进行了纤维染色，评定其纤维化程度. 测定患者PLD，ALT和部分患者的HA和PCⅢ水平.
统计学处理 均数比较t检验，百分率比较χ2检验，相关性分析相关检验.
2 结果
2.1 动物模型 肝硬变的形成分3个阶段，1wk～6wk为胶原纤维增生阶段，6wk～9wk为肝硬变雏型形成阶段，9wk～12wk为典型肝硬变阶段. 各时相点的PLD和ALT及肝纤维化分级评定结果见表1.
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表1 血清PLD，ALT水平及肝纤维化分级(x±s,U/L)
, 百拇医药
n为动物数，12只中途死亡未列入统计. aP<0.05，bP<0.01，vs 对照组.
PLD变化与Mf呈“剪刀差”改变，6wk前PLD随Mf增加而升高；6wk后Mf继续增加，而PLD逐渐降至正常. ALT在各阶段均明显升高.
2.2 临床应用 患者PLD及ALT测定结果见表2.
表2 患者PLD及ALT的同步检测结果(x±s,%)
, 百拇医药
aP<0.05，vs ALT异常率；bP<0.01，vs 健康人. %为异常率.
各组PLD均显著升高，中度慢性肝炎和肝硬变组PLD显著高于轻度慢性肝炎组. 肝硬变组PLD异常率明显高于ALT.
2.3 PLD水平与肝纤维化程度 结果见表3.
表3 患者PLD水平与肝纤维化程度(x±s,%)
, http://www.100md.com
bP<0.01，vs 健康人(986.9±213.3). %为异常率.
PLD随纤维化进展而升高，但当肝硬变形成时(4期)，PLD降至正常.
2.4 PLD变化与HA和PCⅢ的相关性分析 结果见表4.
表4 PLD变化与HA及PCⅢ水平的相关性分析
, http://www.100md.com
其中32例肝纤维化分级为3期；r1,r2分别代表HA和PCⅢ与PLD的相关系数.
患者HA，PCⅢ及PLD均高于健康人(P<0.01)，升高幅度均以肝硬变组最高. 除轻度慢性肝炎组外，中度慢性肝炎及肝硬变组HA和PCⅢ的变化与PLD的变化均呈显著正相关.
3 讨论
开展特异性好、易推广的肝纤维化生化指标一直为临床所关注. 在与之相关的报道中，多集中在反映胶原蛋白合成指标的研究，而研究反映降解的生化指标甚少. 动物采血时间是在末次注射CCl4后96h，约2倍于PLD的血浆T1/2，因此PLD升高并非CCl4肝毒性所致，而与胶原蛋白的合成和降解增加有关. wk1末PLD开始升高，肝内出现胶原纤维和成纤维细胞增生，随着注射CCl4时间的延长，胶原纤维和成纤维细胞增生更趋活跃，PLD升至峰值；9wk后典型肝硬变形成，虽Mf继续增加，但PLD却逐渐降至正常. 慢性肝病患者PLD与同期肝纤维化程度比较也获得了与动物实验类似的结果，呈4级改变时，PLD无明显变化，表明PLD主要反映肝纤维化的进展，并不反映肝纤维化量的多少. 血清HA和PCⅢ测定是目前认为反映肝纤维化进展的较好指标[5]. 本研究的同步检测结果发现，中度慢性肝炎及肝硬变患者，PLD变化与HA和PCⅢ呈显著正相关，提示PLD与HA，PCⅢ共同组成肝纤维化谱能更准确反映肝纤维化的进展.
, http://www.100md.com
4 参考文献
1 Brosset B, Myara I, Fabre M. Plasma prolidase and prolinase activity in alcoholic liver disease. Clin Chim Acta, 1988;175:291-296
2 中华医学会. 病毒性肝炎防治方案. 中华内科杂志，1995；34：788-791
3 胡大荣，李梦东，陈国致. 血浆脯肽酶活性测定及其初步应用. 中华医学检验杂志，1992；15：270-273
4 Schvacz R, Glaumann H, Weiland O. Survival and histological resolution of fibrosis in patients with autoimmune chronic active
hepatitis. J Hepatol, 1993;18:15-23
5 王宝恩. 肝纤维化的诊断与严重度评估. 中华肝脏病杂志，1998；6：193-194, http://www.100md.com(胡大荣1 杨 伟2)
2中国人民解放军89医院 山东省潍坊市 261000
项目负责人 胡大荣中国人民解放军北京军区总医院肝病研究所 北京市 100700
收稿日期 1999-07-11 接收日期 1999-11-08
Subject headings liver cirrhosis/diagnosis; hepatitis/diagnosis
, 百拇医药 主题词 肝硬化/诊断；肝炎/诊断；脯肽酶
肽酶(PLD)参与胶原蛋白降解，是反映肝纤维化进展的良好指标[1]. 血清PLD测定已被《病毒性肝炎防治方案》推荐为慢性肝病常规检测项目[2]. 本文在已报道的基础上[3]，进一步评价PLD在慢性肝病诊断中的意义.
1 材料和方法
1.1 材料 昆明小鼠130只，鼠龄8wk～10wk，体质量25g～40g. 肝纤维化模型采用间断腹腔注射CCl4建立. 采集血液和肝组织标本在末次注射CCl4后96h进行. 根据注射CCl4周数(1，3，6，9，12wk)分5组，每组20只. 另30只以生理盐水替代CCl4作正常对照(对照组). 测定血清PLD及ALT水平. 参照Schvacz标准对肝纤维化分级[4]. Ⅰ级：无明显胶原纤维和成纤维细胞增生；Ⅱ级：胶原纤维由汇管区或中央静脉向外轻度延伸，成纤维细胞轻度增生；Ⅲ级：为假小叶雏型形成，成纤维细胞活跃增生；Ⅳ级：典型假小叶形成. Ⅰ～Ⅳ级分别计1～4分. 根据分级计算各组肝纤维化总积分(Tf)和平均积分(Mf). Mf=Tf/n(n为每组动物数).
, 百拇医药
1.2 临床应用 轻度慢性肝炎127例，中度慢性肝炎456例，肝硬变241例，分别提供184例、796和639份共1619菅.瓯 164例诊断经组织学证实，其中132例进行了纤维染色，评定其纤维化程度. 测定患者PLD，ALT和部分患者的HA和PCⅢ水平.
统计学处理 均数比较t检验，百分率比较χ2检验，相关性分析相关检验.
2 结果
2.1 动物模型 肝硬变的形成分3个阶段，1wk～6wk为胶原纤维增生阶段，6wk～9wk为肝硬变雏型形成阶段，9wk～12wk为典型肝硬变阶段. 各时相点的PLD和ALT及肝纤维化分级评定结果见表1.
, http://www.100md.com
表1 血清PLD，ALT水平及肝纤维化分级(x±s,U/L)
| 组别 | n | PLD (x±s) | ALT (x±s) | 肝纤维化(级) | |||||
| Ⅰ | Ⅱ | Ⅲ | Ⅳ | Tf | Mf | ||||
| 对照组 | 30 | 1042.4±287.2 | 14.2±8.6 | 30 | — | — | — | 30 | 1.00 |
| wk1 | 18 | 1663.3±296.0a | 110.6±59.4b | 4 | 14 | — | — | 32 | 1.78 |
| wk3 | 17 | 2409.9±249.1b | 22.9±43.5b | — | 2 | 15 | — | 49 | 2.88 |
| wk6 | 17 | 2305.6±393.5b | 132.1±24.0b | — | 1 | 15 | 1 | 50 | 2.94 |
| wk9 | 17 | 1452.2±187.4 | 99.4±3.5b | — | — | 2 | 15 | 66 | 3.88 |
| wk12 | 19 | 1427.1±244.8 | 115.9±20.1b | — | — | — | 9 | 76 | 4.00 |
, 百拇医药
n为动物数，12只中途死亡未列入统计. aP<0.05，bP<0.01，vs 对照组.
PLD变化与Mf呈“剪刀差”改变，6wk前PLD随Mf增加而升高；6wk后Mf继续增加，而PLD逐渐降至正常. ALT在各阶段均明显升高.
2.2 临床应用 患者PLD及ALT测定结果见表2.
表2 患者PLD及ALT的同步检测结果(x±s,%)
| 组别 | n | PLD (U/L) | ALT (U/L) | ||
| 健康人 | 168 | 986.9±213.3 | 1.2 | 25.4±5.7 | 0 |
| 轻度慢性肝炎 | 184 | 1572.5±256.7b | 77.3 | 112.5±23.7b | 85.2 |
| 中度慢性肝炎 | 769 | 2476.5±310.4b | 93.3 | 150.6±45.3b | 96.4 |
| 肝炎肝硬变 | 639 | 2238.3±413.4b | 63.4a | 30.4±15.8 | 26.4 |
, 百拇医药
aP<0.05，vs ALT异常率；bP<0.01，vs 健康人. %为异常率.
各组PLD均显著升高，中度慢性肝炎和肝硬变组PLD显著高于轻度慢性肝炎组. 肝硬变组PLD异常率明显高于ALT.
2.3 PLD水平与肝纤维化程度 结果见表3.
表3 患者PLD水平与肝纤维化程度(x±s,%)
| 纤维化(期) | n | PLD(U/L) | |
| 1 | 17 | 1787.9±210.4b | 47.5 |
| 2 | 34 | 2079.5±215.3b | 57.8 |
| 3 | 40 | 2453.4±203.7b | 92.3 |
| 4 | 41 | 1024.3±235.8 | 8.7 |
, http://www.100md.com
bP<0.01，vs 健康人(986.9±213.3). %为异常率.
PLD随纤维化进展而升高，但当肝硬变形成时(4期)，PLD降至正常.
2.4 PLD变化与HA和PCⅢ的相关性分析 结果见表4.
表4 PLD变化与HA及PCⅢ水平的相关性分析
| 组别 | n | HA(μg/L) | PCⅢ(μg/L) x±s | |||||
| x±s | r1 | P | x±s | r1 | P | |||
| 健康人 | 30 | 52.4±20.5 | — | — | 89.7±23.4 | — | — | 1917.6±250.3 |
| 轻度慢性肝炎 | 24 | 210.5±147.6 | 0.384 >0.05 | 197.8±87.6 | 0.363 >0.05 | 1687.3±231.2 | ||
| 中度慢性肝炎 | 61 | 287.4±119.6 | 0.359 <0.01 | 242.3±101.2 | 0.432 <0.01 | 2276.6±340.7 | ||
| 肝炎肝硬变 | 45 | 547.3±125.8 | 0.412 <0.01 | 314.7±88.5 | 0.441 <0.01 | 2554.9±403.3 |
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其中32例肝纤维化分级为3期；r1,r2分别代表HA和PCⅢ与PLD的相关系数.
患者HA，PCⅢ及PLD均高于健康人(P<0.01)，升高幅度均以肝硬变组最高. 除轻度慢性肝炎组外，中度慢性肝炎及肝硬变组HA和PCⅢ的变化与PLD的变化均呈显著正相关.
3 讨论
开展特异性好、易推广的肝纤维化生化指标一直为临床所关注. 在与之相关的报道中，多集中在反映胶原蛋白合成指标的研究，而研究反映降解的生化指标甚少. 动物采血时间是在末次注射CCl4后96h，约2倍于PLD的血浆T1/2，因此PLD升高并非CCl4肝毒性所致，而与胶原蛋白的合成和降解增加有关. wk1末PLD开始升高，肝内出现胶原纤维和成纤维细胞增生，随着注射CCl4时间的延长，胶原纤维和成纤维细胞增生更趋活跃，PLD升至峰值；9wk后典型肝硬变形成，虽Mf继续增加，但PLD却逐渐降至正常. 慢性肝病患者PLD与同期肝纤维化程度比较也获得了与动物实验类似的结果，呈4级改变时，PLD无明显变化，表明PLD主要反映肝纤维化的进展，并不反映肝纤维化量的多少. 血清HA和PCⅢ测定是目前认为反映肝纤维化进展的较好指标[5]. 本研究的同步检测结果发现，中度慢性肝炎及肝硬变患者，PLD变化与HA和PCⅢ呈显著正相关，提示PLD与HA，PCⅢ共同组成肝纤维化谱能更准确反映肝纤维化的进展.
, http://www.100md.com
4 参考文献
1 Brosset B, Myara I, Fabre M. Plasma prolidase and prolinase activity in alcoholic liver disease. Clin Chim Acta, 1988;175:291-296
2 中华医学会. 病毒性肝炎防治方案. 中华内科杂志，1995；34：788-791
3 胡大荣，李梦东，陈国致. 血浆脯肽酶活性测定及其初步应用. 中华医学检验杂志，1992；15：270-273
4 Schvacz R, Glaumann H, Weiland O. Survival and histological resolution of fibrosis in patients with autoimmune chronic active
hepatitis. J Hepatol, 1993;18:15-23
5 王宝恩. 肝纤维化的诊断与严重度评估. 中华肝脏病杂志，1998；6：193-194, http://www.100md.com(胡大荣1 杨 伟2)