术中微波快速病理制片的应用研究
【摘要】 目的 探讨术中微波快速病理制片为确诊术中组织肿瘤的良恶性及病变性质，指导手术切除范围。方法 将术中送检标本取材后，固定、脱水、浸蜡、染色在微波内进行快速制片。结果 1075例送检标本采用术中微波快速病理制片，20min内完成制片过程，切片完整无皱，染色对比度好。组织收缩小，细胞结构清晰，完全达到诊断要求。结论 术中微波快速病理制片，切片完整，结构清晰，对小组织、富于脂肪或胶原纤维较多的组织，能弥补冰冻切片的不足。
关键词 术中 微波制片 应用
【文献标识码】 A 【文章编号】 1680-6115(2003)10-0868-02
Study on application of rapid diagnostic pathologic
section in the microwave apparatus in operation
, http://www.100md.com
Yuan Huaizhi，Chen Hongmei，Chen Xianzhang，et al.
Department of Pathology，Chongqing Three Gorges Central Hospital，Wanzhou404000.
【Abstract】 Objective To discuss the rapid diagnostic pathologic section inthe microwave apparatus instead of the frozen section to solve the problem of the express sections of tissues from patients in operation.Methods 1075samples of tissues from patients in operation were collected and sliced.All the tissue sections were fasted，dehydrated，paraffined and stained in the microwave apparatusfor express facture.Results 1070of1075tissue samples were rapidly made into sections in20minutes.And the sections were integrated，no creases，and better staining contrast.The tissue of sections were hardly shrunk and the cytoarchitectureswere clear，which were fit for the pathologic diagnostic requests.Conclusion If there were no the frozen section apparatus in the hospital，the rapid pathologic diagnostic section in the microwave apparatus，instead of the frozen section，was completely applied for the clinic to solve the problem of the rapid sectionsof tissues from patients in operation，especially in the primary hospitals.
, 百拇医药
Key words in operation section in the microware apparatus application
冰冻切片在组织学技术中应用广泛，对临床手术病人的术中快速病理诊断，指导手术方式和范围有重要作用。但冰冻切片机多为国外产品，中、小医院不能广泛开展。我院在无冰冻切片机的情况下，从1994年5月～2002年5月，术中微波作快速病理制片1075例。将送检标本固定、脱水、浸蜡、染色采用微波处理，20min内完成制片过程。制片质量达到全国统一评定优良标准 [1] 。
1 材料与方法
1.1 标本来源 1075例送检标本中，本院术中送检1021例，外院术中送检54例。送检标本中:卵巢及子宫520例，乳腺280例，甲状腺肿瘤74例，肺肿瘤68例，腹腔淋巴结32例，其它101例(包括骨、膀胱、直肠等)。
, 百拇医药
1.2 方法
1.2.1 取材要求 最大不超过1cm，最厚不超过0.3cm，以小为宜，一般1cm×0.5cm×0.3cm即可。
1.2.2 仪器 所用微波仪为浙江临安电子器材厂生产的YWY781医用微波仪，额定功率为960W，微波功率为1～8档位分别为500、250、170、120、90、70、50、30W。
1.2.3 操作步骤 微波处理:固定、脱水、浸蜡时间见表1;组织取材后，放入100～200ml的耐热玻璃杯内，杯内倒入50～100ml所需相应溶液，每次更换，放入微波仪内，杯口用玻璃盖上防止处理过程中组织外溢。如同时处理两个不同标本，可用线穿上标签作标记。据组织取材大小可相应缩短或延长1min时间，如胃镜活检等小组织，可适当缩短丙酮时间或不用丙酮。
表1 微波仪固定、脱水、浸蜡时间 (略)
, 百拇医药
包埋:采用固体蜡包埋，用电烙铁熔化事先准备好的硬蜡块中央，用加热的镊子从蜡杯内取出已浸蜡的组织块，迅速埋入，待表面初凝后，用镊子轻压，使组织平整，也可直接将镊子在酒精灯上烧热包埋组织，包埋后放冰水中使其冻结，或放冷冻室1min即可切片。
染色:切片捞至载玻片上，在酒精灯上略加烘烤，使切片石蜡溶化，或使用电吹风吹化石蜡，水分烘干，入二甲苯脱蜡经梯度酒精入水，整个过程约1min，滴上苏木素染液放入微波仪内2档位30s或电吹风吹，酒精灯上加热30s均可，水洗后酒精分化、蓝化直至封片 [1，2] 。
1.3 术中微波快速病理制片与常规石蜡制片效果 术中微波快速病理制片，切片完整无皱，组织结构清晰，染色对比度好，与常规石蜡切片无明显差别，见图1，2。(见封三)(略)
常规石蜡制片采用自动组织脱水机，蜡温为62℃～70℃。
, 百拇医药
1.4 术中微波快速病理制片，与常规石蜡制片免疫组化表达 免疫组化试剂盒购于福州迈新生物技术开发公司。采用SP法，按说明操作 [3] 。选择30例乳腺癌将常规石蜡制片和术中微波快速病理制片切在同一张载玻片上进行免疫组化标记对比观察，见表2。
表2 免疫组化对比表达结果
2 结果
1075例术中微波快速病理制片，1070例20min内完成制片过程，切片完整无皱，染色对比度好，组织收缩小，细胞结构清晰。制片质量达到全国统一评定优良标准。其中5例染色时出现部分或完全掉片，主要原因是组织含水较多，脱水不彻底所致。采取将组织块取小一些，脱水时间适当延长，得到弥补。术中微波快速病理制片与常规石蜡制片免疫组化表达结果表明，通过抗原修复后，两者的表达结果无显著差异。但术中微波快速制片在抗原修复时出现部分或完全掉片的数量较多，占38.9%，因此笔者认为术中微波快速病理制片的蜡块，不宜作免疫组化。
, 百拇医药
3 讨论
冰冻切片技术在组织学技术中应用广泛，对临床病人的术中快速病理诊断尤其具有重要意义 [2] 。我们在医院无冰冻切片机的情况下，从1994年5月～2002年5月采用术中微波快速病理制片1075例 [4] 。除5例在染色过程中掉片外，1070例在20min内制出了优良的切片，完全达到了诊断要求，解决了术中急诊病理制片问题。为术中肿瘤良恶 性定性及病变性质确定，以及手术方式和切除范围的选择起到重要作用。由于微波属高频电磁波，能使处于微波场内的极性分子以偶极子状态进行每秒将近24亿5千万次的速度，随微波交电磁波交电场呈周期性和谐振动，由于微波的穿透作用，能使固定剂、脱水剂迅速渗入组织内部，使组织内外受热效应均匀快速 [3，5] 。因而加速组织在微波内、固定、脱水等全过程，使组织切片完整无皱，细胞结构清晰，染色对比度好，切片质量达到全国统一评定标准 [1] ，同时还能弥补冰冻切片对细小组织、富于脂肪和胶原纤维组织的不足。为临床术中快速病理诊断，决定手术方案做出重大贡献。特别适于无冰冻切片的基层医院应用。在实际工作中，以下几点要注意:(1)因福尔马林，丙酮等挥发性气体对人体有危害，操作室必须通风性好，应配备抽气机、换气扇。(2)取材不宜过大，一般为1cm×0.5cm×0.3cm大小，特别不宜太厚，以使固定剂和脱水剂能迅速均匀地渗入组织内部为宜，如遇有含水较多的组织(如卵巢粘液性囊腺瘤，神经原性的肿瘤等)可在100%乙醇和丙酮内脱水时间延长1min，以保证脱水彻底。经过我们多次试验研究，组织固定后直接放入100%乙醇开始脱水比放入80%或95%的乙醇开始脱水效果好，这可能是由于微波的穿透作用高浓度乙醇使组织内部脱水更迅速、彻底。而采用低浓度乙醇开始脱水，由于时间短，反而脱水不彻底，在染色过程中易掉片。为了节约时间以防脱蜡不净在洗去二甲苯后可用开水烫数秒钟，特别是冬季是必须的。(3)为防掉片，载物片以粘胶处理过的为好，或涂上蛋白甘油防脱片。如需做免疫组化，蜡块采用常规石蜡制片的蜡块为宜。部分特殊组织为了达到和正常石蜡切片相同的效果，可采用二档位脱水，但整个制片时间稍有延长。(4)由于微波仪型号厂家不同，其功率设计等都不同，因此组织处理的时间有较大差别，各医院应根据实际情况，探索适合自己型号微波仪组织处理的时间。一般情况下，最好选用带有恒温调节的微波仪，家用微波仪一般不适合病理科使用。由于部分医院工作量大，接触微波仪的次数增多，微波仪对人体的辐射也应防范，微波仪开启后，最好远离微波仪 [6，7] 。
, 百拇医药
参考文献
1 杜卓民.实用组织学技术.北京:人民卫生出版社，1981，74.
2 王伯法，李玉松，黄高昂，等.病理学技术.北京:人民卫生出版社，2000，83-88.
3 蔡文琴，王伯法.实用免疫细胞化学与酸分子杂交技术.成都:四川科学技术出版社，1994，119.
4 袁怀志.应用微波仪作快速石蜡制片代替冰冻制片效果.四川肿瘤防治，1999，12(2):11.
5 杨文修，李正明.生物医学物理概论-微波的生物效应和医学应用.天津:天津科技翻译出版社，1993，280-284.
6 纪小龙，曹晓析，胡南南.微波炉在临床快速病理技术中的应用.临床与实验病理学杂志，1995，11:334.
7 马大烈，郑清渝，李金华.微波Envision免疫组织化学技术及其应用.中华病理学杂志，1998，27(2):153.
作者单位:1404000重庆三峡中心医院病理科2404000重庆三峡肿瘤防治研究所
(收稿日期:2003-05-18)
(编辑 于少伟), http://www.100md.com(袁怀志 陈红梅 陈显章 蒋绍仟 彭明珉)
关键词 术中 微波制片 应用
【文献标识码】 A 【文章编号】 1680-6115(2003)10-0868-02
Study on application of rapid diagnostic pathologic
section in the microwave apparatus in operation
, http://www.100md.com
Yuan Huaizhi，Chen Hongmei，Chen Xianzhang，et al.
Department of Pathology，Chongqing Three Gorges Central Hospital，Wanzhou404000.
【Abstract】 Objective To discuss the rapid diagnostic pathologic section inthe microwave apparatus instead of the frozen section to solve the problem of the express sections of tissues from patients in operation.Methods 1075samples of tissues from patients in operation were collected and sliced.All the tissue sections were fasted，dehydrated，paraffined and stained in the microwave apparatusfor express facture.Results 1070of1075tissue samples were rapidly made into sections in20minutes.And the sections were integrated，no creases，and better staining contrast.The tissue of sections were hardly shrunk and the cytoarchitectureswere clear，which were fit for the pathologic diagnostic requests.Conclusion If there were no the frozen section apparatus in the hospital，the rapid pathologic diagnostic section in the microwave apparatus，instead of the frozen section，was completely applied for the clinic to solve the problem of the rapid sectionsof tissues from patients in operation，especially in the primary hospitals.
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Key words in operation section in the microware apparatus application
冰冻切片在组织学技术中应用广泛，对临床手术病人的术中快速病理诊断，指导手术方式和范围有重要作用。但冰冻切片机多为国外产品，中、小医院不能广泛开展。我院在无冰冻切片机的情况下，从1994年5月～2002年5月，术中微波作快速病理制片1075例。将送检标本固定、脱水、浸蜡、染色采用微波处理，20min内完成制片过程。制片质量达到全国统一评定优良标准 [1] 。
1 材料与方法
1.1 标本来源 1075例送检标本中，本院术中送检1021例，外院术中送检54例。送检标本中:卵巢及子宫520例，乳腺280例，甲状腺肿瘤74例，肺肿瘤68例，腹腔淋巴结32例，其它101例(包括骨、膀胱、直肠等)。
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1.2 方法
1.2.1 取材要求 最大不超过1cm，最厚不超过0.3cm，以小为宜，一般1cm×0.5cm×0.3cm即可。
1.2.2 仪器 所用微波仪为浙江临安电子器材厂生产的YWY781医用微波仪，额定功率为960W，微波功率为1～8档位分别为500、250、170、120、90、70、50、30W。
1.2.3 操作步骤 微波处理:固定、脱水、浸蜡时间见表1;组织取材后，放入100～200ml的耐热玻璃杯内，杯内倒入50～100ml所需相应溶液，每次更换，放入微波仪内，杯口用玻璃盖上防止处理过程中组织外溢。如同时处理两个不同标本，可用线穿上标签作标记。据组织取材大小可相应缩短或延长1min时间，如胃镜活检等小组织，可适当缩短丙酮时间或不用丙酮。
表1 微波仪固定、脱水、浸蜡时间 (略)
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包埋:采用固体蜡包埋，用电烙铁熔化事先准备好的硬蜡块中央，用加热的镊子从蜡杯内取出已浸蜡的组织块，迅速埋入，待表面初凝后，用镊子轻压，使组织平整，也可直接将镊子在酒精灯上烧热包埋组织，包埋后放冰水中使其冻结，或放冷冻室1min即可切片。
染色:切片捞至载玻片上，在酒精灯上略加烘烤，使切片石蜡溶化，或使用电吹风吹化石蜡，水分烘干，入二甲苯脱蜡经梯度酒精入水，整个过程约1min，滴上苏木素染液放入微波仪内2档位30s或电吹风吹，酒精灯上加热30s均可，水洗后酒精分化、蓝化直至封片 [1，2] 。
1.3 术中微波快速病理制片与常规石蜡制片效果 术中微波快速病理制片，切片完整无皱，组织结构清晰，染色对比度好，与常规石蜡切片无明显差别，见图1，2。(见封三)(略)
常规石蜡制片采用自动组织脱水机，蜡温为62℃～70℃。
, 百拇医药
1.4 术中微波快速病理制片，与常规石蜡制片免疫组化表达 免疫组化试剂盒购于福州迈新生物技术开发公司。采用SP法，按说明操作 [3] 。选择30例乳腺癌将常规石蜡制片和术中微波快速病理制片切在同一张载玻片上进行免疫组化标记对比观察，见表2。
表2 免疫组化对比表达结果
2 结果
1075例术中微波快速病理制片，1070例20min内完成制片过程，切片完整无皱，染色对比度好，组织收缩小，细胞结构清晰。制片质量达到全国统一评定优良标准。其中5例染色时出现部分或完全掉片，主要原因是组织含水较多，脱水不彻底所致。采取将组织块取小一些，脱水时间适当延长，得到弥补。术中微波快速病理制片与常规石蜡制片免疫组化表达结果表明，通过抗原修复后，两者的表达结果无显著差异。但术中微波快速制片在抗原修复时出现部分或完全掉片的数量较多，占38.9%，因此笔者认为术中微波快速病理制片的蜡块，不宜作免疫组化。
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3 讨论
冰冻切片技术在组织学技术中应用广泛，对临床病人的术中快速病理诊断尤其具有重要意义 [2] 。我们在医院无冰冻切片机的情况下，从1994年5月～2002年5月采用术中微波快速病理制片1075例 [4] 。除5例在染色过程中掉片外，1070例在20min内制出了优良的切片，完全达到了诊断要求，解决了术中急诊病理制片问题。为术中肿瘤良恶 性定性及病变性质确定，以及手术方式和切除范围的选择起到重要作用。由于微波属高频电磁波，能使处于微波场内的极性分子以偶极子状态进行每秒将近24亿5千万次的速度，随微波交电磁波交电场呈周期性和谐振动，由于微波的穿透作用，能使固定剂、脱水剂迅速渗入组织内部，使组织内外受热效应均匀快速 [3，5] 。因而加速组织在微波内、固定、脱水等全过程，使组织切片完整无皱，细胞结构清晰，染色对比度好，切片质量达到全国统一评定标准 [1] ，同时还能弥补冰冻切片对细小组织、富于脂肪和胶原纤维组织的不足。为临床术中快速病理诊断，决定手术方案做出重大贡献。特别适于无冰冻切片的基层医院应用。在实际工作中，以下几点要注意:(1)因福尔马林，丙酮等挥发性气体对人体有危害，操作室必须通风性好，应配备抽气机、换气扇。(2)取材不宜过大，一般为1cm×0.5cm×0.3cm大小，特别不宜太厚，以使固定剂和脱水剂能迅速均匀地渗入组织内部为宜，如遇有含水较多的组织(如卵巢粘液性囊腺瘤，神经原性的肿瘤等)可在100%乙醇和丙酮内脱水时间延长1min，以保证脱水彻底。经过我们多次试验研究，组织固定后直接放入100%乙醇开始脱水比放入80%或95%的乙醇开始脱水效果好，这可能是由于微波的穿透作用高浓度乙醇使组织内部脱水更迅速、彻底。而采用低浓度乙醇开始脱水，由于时间短，反而脱水不彻底，在染色过程中易掉片。为了节约时间以防脱蜡不净在洗去二甲苯后可用开水烫数秒钟，特别是冬季是必须的。(3)为防掉片，载物片以粘胶处理过的为好，或涂上蛋白甘油防脱片。如需做免疫组化，蜡块采用常规石蜡制片的蜡块为宜。部分特殊组织为了达到和正常石蜡切片相同的效果，可采用二档位脱水，但整个制片时间稍有延长。(4)由于微波仪型号厂家不同，其功率设计等都不同，因此组织处理的时间有较大差别，各医院应根据实际情况，探索适合自己型号微波仪组织处理的时间。一般情况下，最好选用带有恒温调节的微波仪，家用微波仪一般不适合病理科使用。由于部分医院工作量大，接触微波仪的次数增多，微波仪对人体的辐射也应防范，微波仪开启后，最好远离微波仪 [6，7] 。
, 百拇医药
参考文献
1 杜卓民.实用组织学技术.北京:人民卫生出版社，1981，74.
2 王伯法，李玉松，黄高昂，等.病理学技术.北京:人民卫生出版社，2000，83-88.
3 蔡文琴，王伯法.实用免疫细胞化学与酸分子杂交技术.成都:四川科学技术出版社，1994，119.
4 袁怀志.应用微波仪作快速石蜡制片代替冰冻制片效果.四川肿瘤防治，1999，12(2):11.
5 杨文修，李正明.生物医学物理概论-微波的生物效应和医学应用.天津:天津科技翻译出版社，1993，280-284.
6 纪小龙，曹晓析，胡南南.微波炉在临床快速病理技术中的应用.临床与实验病理学杂志，1995，11:334.
7 马大烈，郑清渝，李金华.微波Envision免疫组织化学技术及其应用.中华病理学杂志，1998，27(2):153.
作者单位:1404000重庆三峡中心医院病理科2404000重庆三峡肿瘤防治研究所
(收稿日期:2003-05-18)
(编辑 于少伟), http://www.100md.com(袁怀志 陈红梅 陈显章 蒋绍仟 彭明珉)